Bortezomib增强三氧化二砷抑制KM3细胞生长和促凋亡机制的研究

目的:新的治疗药物及方法的出现大大提高了多发性骨髓瘤(MM)的疗效,但仍然无法使其治愈。为了寻求治疗药物及方法,提高单药或联合用药对MM的治疗效果。我们观察了三氧化二砷(ATO,As2O3)单药及联合硼替佐米(Velcade,PS-341)有无增强诱导MM细胞凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:检测ATO单药及联合硼替佐米对KM3细胞的影响。应用台盼蓝拒染法检测细胞活力,MTT(四甲基偶氮唑盐比色法)检测细胞生长抑制率。流式细胞术检测细胞的凋亡比例。应用RT-PCR方法检测p65mRNA的表达变化。应用Western blotting检测p65、p-p65、PARP、caspase-3、-8、-9蛋白表达的变化。结果:ATO抑制细胞生长,对KM3细胞p65mRNA及其蛋白没有显著影响,主要是通过激活caspase-3,-8,-9,诱导细胞凋亡。当与bortezomib联合用药时有协同促凋亡作用。结论:ATO单独作用于KM3细胞可以抑制其生长并诱导细胞凋亡,与bortezomib联用时有协同效应。

三氧化二砷与硼替佐米联合应用对多发性骨髓瘤KM3细胞凋亡的作用及其机制研究(英文)

本研究探讨硼替佐米(Bor)单用及与三氧化二砷(As2O3)联合应用对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3细胞凋亡的影响及其相关机制。采用MTT法检测Bor单用及与As2O3联合应用对KM3细胞增殖的抑制作用,计算其IC50值。采用AnnexinⅤ-FITC凋亡试剂盒检测各药物组KM3细胞早期及晚期凋亡率,流式细胞术测定各药物组KM3细胞跨膜电位的变化。采用RT-PCR检测各药物组KM3细胞Caspase-3、Bim、Bcl-xL mRNA水平的变化。结果表明,Bor联合As2O3对KM3细胞生长抑制明显高于Bor单用,处理72 h作用最明显〔(27.64±0.81)%vs(21.67±2.20)%,P<0.05〕。联合用药组KM3细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均较Bor单药组明显增多,前者在作用48 h时效果最明显〔(53.20±3.70)%vs(35.40±2.58)%,P<0.01〕,后者在作用72 h时效果最明显〔(63.96±2.97)%vs(54.08±3.76)%,P<0.01〕。联合用药组KM3细胞线粒体跨膜电位较Bor单药组明显下降,作用48 h时下降最明显。与Bor单药组比较,联合用药组KM3细胞Caspase-3 mRNA、Bim mRNA均升高,Bcl-xLmRNA下降。结论:在体外As2O3可增强Bor对KM3细胞增殖的抑制,增加KM3细胞的凋亡,并且可能通过抑制Bcl-xL mRNA表达,诱导Caspase-3和BIM mRNA表达的途径增强凋亡作用。

氟达拉滨对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞分泌IL-6的影响

目的研究氟达拉滨(fludarabine)在体外对多发性骨髓瘤细胞KM3细胞生长的影响及对细胞上清液IL-6、sIL-6R的影响。方法采用MTT法及细胞计数法分别观察不同浓度氟达拉滨对KM3细胞生长的影响;用双抗夹心法检测不同浓度氟达拉滨作用KM3细胞后上清液白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和可溶性白细胞介素6受体(soluble interleukin-6 receptor,sIL-6R)的表达水平。结果MTT法及细胞计数法均显示氟达拉滨对KM3细胞有明显的抑制作用,氟达拉滨作用KM3细胞72h后,25、50、100、200、400nmol/L组的增殖抑制率均高于对照组(P<0.01),且与浓度成正比。400nmol/L组对KM3细胞增殖抑制率随时间的延长而增加。双抗夹心法检测结果显示KM3细胞经氟达拉滨作用96h后,其IL-6水平先升高后明显下降,而sIL-6R水平随药物浓度的升高而逐渐下降。结论氟达拉滨能明显抑制KM3细胞的增殖,同时能抑制KM3细胞自分泌IL-6和sIL-6R。。

EGCG对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的抑制效应及机制初探

本研究探讨绿茶茶多酚成分之一表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的影响及其机制。体外培养多发性骨髓瘤细胞KM3,观察不同浓度EGCG作用后的培养上清对血管内皮细胞株HUVEC迁移和形成血管能力的影响。ELISA法检测KM3细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平;RT-PCR方法检测KM3细胞VEGF mRNA表达水平。结果表明:EGCG以浓度依赖方式抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用,5,25,50和100μmol/L的EGCG迁移细胞数目分别为414±27,299±70,202±42及116±13个,且EGCG的浓度与内皮细胞的迁移数目呈负相关(r=-0.952,p<0.05)。同时,内皮细胞形成小管的面积随EGCG浓度的升高而减少,25及50μmol/L时的面积分别是88343.9±3231.1和60897.5±914.1μm2,均明显低于对照组(p<0.01),小管面积与EGCG浓度呈负相关(r=-0.888,p<0.05)。5、25、50、100μmol/L的EGCG作用于KM3细胞48小时后培养上清中VEGF的含量分别为1399.0±47.4pg/ml,660.1±5.7pg/ml,108.5±5.8pg/ml和26.2±18.6pg/ml,与对照组比较,25、50、100μmol/L组均有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示EGCG抑制KM3细胞VEGF的mRNA水平表达,且呈浓度依赖性。结论:EGCG能显著抑制多发性骨髓瘤细胞KM3的促血管新生作用;下调VEGF转录水平的表达,减少VEGF的分泌可能是其药理作用机制之一。

反应停诱导骨髓瘤细胞株(KM3)凋亡的初步研究

目的:观察反应停对KM3骨髓瘤细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:不同浓度的反应停作用于KM3细胞,光镜下计数细胞和胎盼蓝拒染法观察细胞增殖和细胞活力,细胞形态、细胞凋亡的荧光染色后的荧光显微镜检查、Annexin V-FITC和PI双染后流氏细胞仪分析判定凋亡和早期的凋亡细胞。结果:反应停在一定的剂量和一定的作用时间下可以抑制KM3细胞增殖,诱导KM3细胞凋亡,这一作用呈剂量和时间依赖性。结论:反应停诱导KM3细胞凋亡,抑制KM3细胞增殖可能是其直接抗骨髓瘤作用之一。

氟达拉滨对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞增殖和代谢的影响

目的:研究氟达拉滨在体外对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的生长抑制、诱导凋亡作用及对细胞自分泌细胞因子的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度氟达拉滨对KM3细胞生长的影响;用AnnexinⅤ/PI双染法流式细胞仪检测KM3的凋亡率;用双抗夹心法(ELISA)检测上清液中VEGF、IL-6和可溶性IL-6受体(sIL-6R)的水平。结果:①氟达拉滨对KM3细胞有明显的抑制作用,并随药物浓度升高和作用时间的延长而抑制作用增强。MTT法显示,氟达拉滨作用于KM3细胞72h后,其半数抑制率IC50约为95nmol/L。25～400nmol/L浓度范围氟达拉滨作用72h后,KM3细胞的凋亡率随药物浓度的增加而升高。②KM3细胞经氟达拉滨作用72h后,上清液中VEGF和sIL-6R水平随药物浓度的升高逐渐下降,而IL-6水平先升高后明显下降。结论:氟达拉滨能明显抑制KM3细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,同时能抑制KM3细胞自分泌VEGF、IL-6和sIL-6R。

沙利度胺联合地塞米松对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用

为了探讨沙利度胺(thalidomide,THD)联合地塞米松(Dx)对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验(MTT法)观察不同浓度、不同作用时间的THD或THD+地塞米松(Dx)作用于KM3细胞后细胞的抑制率,以选取最佳药物干预条件。使用该条件处理KM3细胞,并采用间接ELISA法检测细胞上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮抑素(ES)、凋亡抑制蛋白survivin的表达。结果表明:随着THD浓度的加大、作用时间的延长,KM3细胞生长的抑制也呈增强的趋势,同时THD与Dx联用可显著提高药物对KM3细胞的生长抑制作用。80μg/ml或100μg/mlTHD联合Dx(4μg/ml)可使KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin表达下降,ES表达增加,而对VEGF的表达无影响。结论:THD联合Dx对KM3细胞有协同抑制作用,THD联合Dx可能通过下调KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin的表达,上调ES的表达而发挥抗多发性骨髓瘤的作用。

氟达拉滨、米托蒽醌对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226 KM3的增殖抑制作用

目的:观察氟达拉滨、米托蒽醌对两株不同多发性骨髓瘤细胞RPMI8226、KM3体外增殖的抑制作用。方法:采用MTT法观察1.25～20μg/ml氟达拉滨及联合应用米托蒽醌处理RPMI8226、KM3细胞后其增殖的变化。结果:氟达拉滨剂量逐渐增大时,对两株多发性骨髓瘤细胞抑制率逐渐增强(P<0.01)。氟达拉滨对RPMI8226细胞的IC50为5.26μg/ml,对KM3细胞的IC50为4.93μg/ml。氟达拉滨联合米托蒽醌对RPMI8226、KM3细胞的增殖抑制作用显著强于氟达拉滨或米托蒽醌单独处理组(P<0.01)。结论:氟达拉滨对两种不同性质的多发性骨髓瘤细胞株均有明显的杀伤作用。氟达拉滨联合米托蒽醌能更有效地抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,为临床治疗多发性骨髓瘤提供实验依据。

高密集度理想——MVRDV的三维城市理论KM3

随着人口的不断增长,城市生活的复杂性不断加深,城市空间短缺的矛盾日益突出.如何面对这一普遍存在的问题已经成为设计者研究的重点课题之一.荷兰建筑师小组MVRDV从城市规划与城市设计的角度为这一矛盾的解决提供了一个可能的方法,即以数据景观为研究方法的三维城市模型KM3.KM3是一个带有乌托邦理想色彩、可持续发展的多层次密集城市模型,虽然有一定的局限性,却为未来的城市发展提供一个方向.笔者意图通过对KM3这一城市理论的介绍与分析,为城市规划研究与实践提供新思路与新方法.

基于KM3x的低功耗红外通信设计

针对目前红外无线通信距离短、功耗高、模块设计复杂等问题,提出了一种低功耗红外通信设计.采用XBAR模块、PWM调制技术及低功耗编程的软件设计,有效精简了电路,降低了功耗和成本,提高了可靠性,可更有效地构建红外无线通信网络.实验结果表明:系统在休眠时功耗为0.5 m W,正常工作时也仅为发射管工作功率的1/3左右;模块在自然光等环境中零误码率通信距离达到25 m,能满足便携式设备、医疗电子、水下通信、工业设备网络等诸多领域的应用需求.

在梦想中探索人类未来的家园——评MVRDV的新书《KM3》

论文通过评述荷兰前卫事务所MVRDV的新书《KM3》,论述了MVRDV以数据操作为基础、以立体城市模型KM3为线索的理论、思想和设计实践,揭示了其理论与实践在乌托邦色彩背后的前瞻性、现实意义,以及其创新性与局限性。

硼替佐米和柔红霉素联合应用对多发性骨髓瘤细胞株KM3的作用(英文)

为了研究硼替佐米(bortezomib,Bor)单用及与柔红霉素(daunorubicin,DNR)联合应用对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株KM3细胞的抑制作用,采用MTT法检测Bor单用及与DNR联合应用对KM3细胞的抑制作用,求出其IC50。结果表明:Bor、DNR对KM3细胞生长抑制作用呈浓度依赖性,IC50分别为0.27μmol/L,0.16μmol/L;Bor联合DNR对KM3细胞生长抑制作用明显增强(p<0.05)。结论:在体外,Bor联合DNR对KM3细胞生长抑制有协同作用。

补肾养骨汤诱导多发性骨髓瘤细胞株KM3的凋亡及机制探讨

目的探讨补肾养骨汤对人多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法取对数生长期KM3细胞,分别加入5%、10%、20%的补肾养骨汤含药血清培养,培养12、24、48和72 h后,采用Cell CountingKit-8(CCK-8)法检测补肾养骨汤对KM3细胞增殖的影响;KM3细胞经过不同浓度含药血清培养72 h后,采用流式细胞术检测补肾养骨汤对KM3细胞周期和凋亡作用;RT-q PCR和Western blot检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)和核转录因子(NF)-κB的表达水平。结果补肾养骨汤抑制KM3细胞株的增殖,诱导KM3细胞株呈剂量依赖性凋亡,使KM3细胞周期停滞在G0/G1期,导致KM3细胞株Bcl-2、NF-κB表达下调,Bax表达上调。结论补肾养骨汤抑制KM3细胞的增殖,影响细胞周期,诱导其凋亡,此作用机制可能与Bcl-2、Bax和NF-κB表达异常有关。

集成环境下基于KM3DCAPP-A的飞机部件三维装配工艺设计及应用

以飞机某关重部件的装配工艺设计、装配现场控制为目标,在现有集成信息化条件下,考虑自身上游设计基础,应用面向三维的装配工艺规划及装配过程执行的工具——KM3DCAPP-A,可实现装配工艺的可理解性的提高、装配进度的跟踪和控制、数字化选配、装配质量控制,并与企业已有信息化系统集成,打通集成环境下的完整数据流。

巨细胞病毒对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对IL-6mRNA表达的影响

目的 探讨人巨细胞病毒 (CMV)对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对细胞IL 6mRNA表达的影响。方法 以 10 0 ,10 ,1半数组织培养感染量 (TCID50 )滴度的CMV与KM3细胞共培养 ,RT PCR法检测细胞CMV即刻早期抗原基因 (IE)、甘油醛 3 磷酸脱氢酶基因 (GAPDH)及IL 6mRNA的表达 ,流式细胞术检测细胞CMVpp6 5抗原的表达 ,透射电镜检测细胞内CMV病毒颗粒。结果 CMV感染的KM3细胞可明显地表达IEmRNA ,同时该细胞IL 6mRNA水平明显升高 ;10 0 ,10TCID50滴度的CMV感染的KM3细胞CMVpp6 5抗原表达率分别为 (5 .5 8± 1.5 5 ) %、(3.75± 0 .85 ) % ,与对照组的 (1.5 8± 0 .33) %相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;透射电镜下 ,10 0TCID50 滴度的CMV感染的KM3细胞内及胞膜表面可见到CMV病毒颗粒。结论 CMV可感染多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞 ,并在其中活化复制 ;该病毒可提高KM3细胞IL

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤KM3细胞增殖与凋亡和H3K4me3蛋白表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤KM3细胞增殖、凋亡和组蛋白3第4位赖氨酸的三甲基化(H3K4me3)蛋白表达的影响。方法以人多发性骨髓瘤细胞株KM3为研究对象,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术和共聚焦显微镜检测细胞凋亡;蛋白质印迹法和共聚焦显微镜检测雷公藤内酯醇对KM3细胞H3K4me3表达的影响。结果雷公藤内酯醇对KM3细胞的增殖有明显抑制作用,呈现剂量和时间依赖关系(P<0.05)。雷公藤内酯醇对KM3细胞有明显诱导凋亡的作用,并且随着雷公藤内酯醇作用浓度的增加,细胞凋亡比例逐渐增加,其中总凋亡率分别为(48.97±1.78)%,(53.72±2.21)%和(60.75±2.43)%。H3K4me3集中分布于细胞核内,80 nmol·L-1雷公藤内酯醇干预48 h后,KM3细胞H3K4me3的平均荧光强度值(21.96±0.34)显著低于对照组(39.86±0.47)(P<0.05)。结论雷公藤内酯醇可抑制多发性骨髓瘤KM3细胞增殖,诱导KM3细胞凋亡,降低H3K4me3蛋白表达。

阿霉素增强TRAIL诱导的人骨髓瘤细胞系KM3细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨阿霉素增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人骨髓瘤细胞系KM3细胞凋亡的分子机制。方法采用TUNEL法和流式细胞术比较单独TRAIL及联合应用阿霉素对KM3细胞凋亡率的影响。Westem blot法检测阿霉素诱导前后KM3细胞核内转录因子NF-κB亚单位蛋白P65以及死亡受体DR5表达的变化。结果流式细胞术分析显示，10、20、50、100ng／ml的TRAIL联合应用1μg／ml阿霉素诱导KM3细胞后，细胞凋亡率分别为20．88％、40．03％、57．87％和60．82％，显著高于单独应用阿霉素或TRAIL诱导的细胞凋亡率；与TUNEL法检测结果一致。KM3细胞经不同浓度阿霉素（0．5、1．0、2．0、4．0μg／m1）联合20ng／ml TRAIL处理后，DR5受体的表达量随应用阿霉素浓度的增加而上升，而细胞核内P65蛋白表达量则随阿霉素浓度的增加而下降。结论骨髓瘤细胞膜DR5表达量提高和NF-κB的核转移是阿霉素协同TRAIL诱导凋亡反应的重要分子机制。

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞及KM3细胞TRAIL受体表达的研究

目的 了解多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)及骨髓瘤细胞系(KM3细胞)中4种TRAIL受体的表达情况,探讨TRAIL的选择性杀瘤机制及化疗药物对TRAIL受体的影响。方法 应用半定量RT PCR和流式细胞术检测23例MM患者、15名正常对照者BMMNC和KM3细胞中4种TRAIL受体的表达,并比较了12例MM患者化疗前后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育前后4种TRAIL受体表达的变化。结果 MM患者BMMNC死亡受体DR4、DR5的表达均高于正常对照组(P<0. 05),DR5的表达高于DR4(P<0. 05);诱捕受体DcR1、DcR2在MM组中的表达明显低于正常对照组(P<0. 05);KM3细胞死亡受体DR4、DR5强表达,未检测到诱捕受体DcR1、DcR2的表达; MM患者化疗后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育后DR5的表达均上调(P<0. 05)。结论 死亡受体DR4、DR5和诱捕受体DcR1、DcR2在MM患者BMMNC和正常人BMMNC中表达有差异,这可能是TRAIL可以选择性杀死MM细胞而对正常细胞无毒性作用的机制之一; MM患者化疗后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育后死亡受体DR5表达上调,提示化疗药物可能通过上调死亡受体DR5的表达而促使细胞凋亡。

骨髓瘤细胞系KM3中免疫球蛋白重链基因易位的初步研究

目的 研究骨髓瘤细胞系KM3中免疫球蛋白重链基因 (IgH)的易位。 方法 用PCR方法合成地高辛标记的各IgH转换区 (switchregion ,S区 )探针 ,即σμ/σδ、Sμ、Sγ、Sα、Sε的 3′端和 5′端探针 ,应用Southernblot方法检测杂交结果。结果 胎盘基因组DNA中有一 10 .0kb的HindⅢ片段可同时与 5′Sμ探针和 3′Sμ探针杂交 ,而骨髓瘤细胞系KM3基因组DNA中除有一相同的 10 .0kb的HindⅢ片段外 ,还有 1个 5 .6kb的HindⅢ片段 ,仅与 3′Sμ探针杂交。 结论 骨髓瘤细胞系KM3存在 1个由IgH基因易位引起的异常重组片段 。

和厚朴酚联合硼替佐米对骨髓瘤KM3细胞增殖和凋亡的作用

目的探讨和厚朴酚(HNK)及硼替佐米对人多发性骨髓瘤KM3细胞增殖的影响及诱导凋亡作用。方法本实验分实验组和对照组(A组),实验组分为HNK单药组(B、C、D、E、F、G组的药物质量浓度分别为4、6、8、10、12、15μg/mL)、硼替佐米单药组(H、I、J组的药物质量浓度分别为5、10、20ng/mL)及二者联合用药组(K组为HNK4μg/mL+硼替佐米5ng/mL,L组为HNK4μg/mL+硼替佐米10ng/mL,M组为HNK4μg/mL+硼替佐米20ng/mL)。在不同的时间(24、48、72h)采用MTT比色法检测对照组和实验组细胞增殖活性;采用流式细胞术检测对照组和实验组细胞凋亡的变化。结果和厚朴酚4～15μg/mL对KM3细胞作用24、48、72h的细胞增殖抑制率分别由20.38%升至80.54%、27.45%升至89.99%、44.94%升至90.91%,不同组、不同作用时间相比差异均有统计学意义(P<0.05)。H组、I组、J组KM3细胞48h的细胞增殖抑制率分别是13.13%、36.22%、53.99%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。K组、L组、M组作用48h的细胞增殖抑制率分别是52.68%、69.99%、78.53%,K组与H组、L组与I组、M组与J组比较差异有统计学意义(P<0.05)。流式结果显示B组、C组、E组作用于KM3细胞24h和48h后细胞凋亡率分别是6.92%、16.15%、60.70%和18.84%、37.21%、86.07%,同一时间不同实验组之间差异有统计学意义(P<0.05)。H组、I组作用于KM3细胞24、48h的细胞凋亡率分别是9.27%、17.87%和11.92%、53.51%,同一时间不同实验组之间差异有统计学意义(P<0.05)。K组、L组作用于KM3细胞24、48h,细胞凋亡率分别是15.75%、22.18%和35.96%、74.70%,K组、L组细胞凋亡率明显高于H组、I组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论和厚朴酚与硼替佐米均可诱导KM3细胞凋亡,抑制KM3细胞的增殖,两者联合作用能显著提高KM3细胞的凋亡率,增强抑制KM3细胞的生长。