KNK437抑制乙型肝炎病毒复制及转录

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)在肝细胞内复制过程中,病毒反转录酶(P蛋白)与前基因组RNA(Pregenomic RNA,pgRNA)上的RNA包装信号ε形成P-ε复合物,启动反转录合成和核衣壳装配。封闭P-ε相互作用是一种极具吸引力的抗HBV策略。已知P-ε形成RNP复合物正常发挥活性时,需要热休克蛋白(Heat-shock proteins,Hsps)参与。本研究探索Hsps抑制剂KNK437对HBV复制及转录的影响。主要运用了三种工作模型:HepG2.2.15细胞系、瞬时转染1.05×HBV(pCH9-3091)质粒的Huh7细胞系和瞬时转染1.3×HBV(pGEM-1.3×HBV)质粒的Huh7细胞系。采用CCK-8方法检测KNK437的细胞毒性,ELISA测定细胞培养液上清中HBsAg和HBeAg的分泌水平;q-PCR和qRT-PCR分别检测细胞内HBV核衣壳中DNA和细胞内HBV RNA水平;Western blotting检测细胞内衣壳亚单位(core)表达水平;qRT-PCR检测细胞内Hsps本身的转录水平。结果表明:20μM KNK437对细胞没有毒性,且在该浓度下KNK437除HepG2.2.15模型外,均下调HBV HBsAg和HBeAg的胞外分泌,抑制细胞内HBV核衣壳中DNA合成,降低细胞内HBV RNA转录水平,最低可使DNA水平降至1.5%左右,RNA水平降至30%左右,从而表明KNK437抑制HBV复制和转录。在HepG2.2.15中的Western blotting显示,KNK437明显减少细胞内衣壳亚单位(core)表达水平。KNK437也抑制Hsp70,Hsp90b,Hsp40等三种热休克蛋白RNA的转录,从而验证了它的确是一种泛Hsps抑制剂。本研究结果显示KNK437具有潜在抗HBV应用前景。

HSP70调节ATO诱导胶质瘤细胞死亡的实验研究

目的通过调节热休克蛋白70(HSP70)的表达,观察HSP70在三氧化二砷(ATO)诱导胶质瘤细胞U251MG死亡中的作用。方法台盼蓝染色用来评价细胞的活性,免疫印迹分析HSP70和Caspase-3表达情况,进一步使用热休克蛋白抑制剂KNK437和热激的方法调节HSP70的水平,观察ATO在不同HSP70水平对U251MG死亡的影响。结果 ATO诱导U251MG细胞的死亡,伴有HSP70的表达;应用KNK437明显增加ATO诱导U251MG细胞的死亡和凋亡蛋白Caspase-3表达;热激明显抑制ATO诱导U251MG细胞的死亡。结论 HSP70在ATO诱导胶质瘤细胞U251MG死亡中起保护作用,KNK437可能在ATO治疗胶质瘤中起协同作用。