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产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌临床及分子流行病学特征比较
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作者 殷丽军 卢露 +2 位作者 何磊燕 武娜娜 王传清 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期556-562,共7页
目的比较产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床及分子流行病学特征。方法回顾性分析2017—2020年某儿童医院非重复儿童住院患者临床分离的CRKP,查阅菌株来源患者的病历资料获得患者的基本临床特征。对CRKP进行药敏试... 目的比较产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床及分子流行病学特征。方法回顾性分析2017—2020年某儿童医院非重复儿童住院患者临床分离的CRKP,查阅菌株来源患者的病历资料获得患者的基本临床特征。对CRKP进行药敏试验及多位点序列分型(MLST)分析,比较产NDM-1和产KPC-2的CRKP临床及分子流行病学特征。结果2017—2020年共收集164株CRKP菌株,其中96株携带bla NDM-1,68株携带bla KPC-2,产NDM-1的CRKP主要分布在新生儿科室,产KPC-2的CRKP以非新生儿科室居多,两组在标本来源、患者年龄、科室分布和预后情况方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);产NDM-1的CRKP菌株以ST 17型和ST 278型为主,分别为40.63%、18.75%;而产KPC-2的CRKP菌株以ST 11为主,达73.53%。产KPC-2的CRKP分离株对头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、呋喃妥因和磷霉素的耐药率均高于产NDM-1的CRKP分离株,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论产NDM-1和产KPC-2的CRKP菌株在临床及分子流行病学方面均存在差异,产KPC-2的CRKP菌株表现出更严重的耐药性,感染KPC-2 CRKP的患者预后较差,应引起临床和感控的重视。 展开更多
关键词 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌 kpc-2 NDM-1 ST 11 ST 17 CRKP 流行病学特征
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积雪草酸联合亚胺培南对产KPC-2耐药肠杆菌的体外抗菌作用 被引量:1
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作者 张卫 伍国强 +3 位作者 廖远军 许竞文 邹宜诺 周永林 《中国动物检疫》 CAS 2023年第8期94-102,共9页
碳青霉烯类抗生素是目前临床上用于治疗肠杆菌严重感染的最后防线药物。然而随着肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)等的出现和流行,碳青霉烯类药物治疗广泛耐药肠杆菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)感染面临巨大挑战。KPCs... 碳青霉烯类抗生素是目前临床上用于治疗肠杆菌严重感染的最后防线药物。然而随着肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)等的出现和流行,碳青霉烯类药物治疗广泛耐药肠杆菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)感染面临巨大挑战。KPCs家族中以KPC-2为主要流行类型,其可水解几乎所有β-内酰胺类抗生素。因此针对KPC-2开展抑制剂筛选迫在眉睫。本研究通过酶活性抑制试验、抑菌试验、细菌细胞膜通透性测定和细胞毒性检测等开展了KPC-2抑制剂的筛选及其活性验证。结果显示:中药活性成分积雪草酸可显著抑制KPC-2水解β-内酰胺类抗生素的生物学活性(P <0.05,IC50=4.38μg/mL),从而可有效增强亚胺培南等碳青霉烯类抗生素的体外抑菌作用和杀菌作用。同时,积雪草酸可增强亚胺培南对细菌细胞膜的损伤作用。此外,积雪草酸(≤32μg/mL)对不同来源细胞的细胞毒性较低,这有利于进一步开发其作为碳青霉烯类抗生素佐剂并投入临床使用。综上,本研究为CRE感染治疗提供了新的可行策略和先导化合物。 展开更多
关键词 积雪草酸 kpc-2 亚胺培南 协同抗菌
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Characterization of a bla_(CTX-M-3),bla_(KPC-2)and bla_(TEM-1B)co-producing IncN plasmid in Escherichia coli of chicken origin
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作者 WANG Wen-jing WANG Yi-fu +7 位作者 JIN Ya-jie SONG Wu-qiang LIN Jia-meng ZHANG Yan TONG Xin-ru TU Jian LI Rui-chao LI Tao 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期320-324,共5页
An extensively drug-resistant(XDR)Escherichia coli strain 258E was isolated from an anal swab sample of a chicken farm of Anhui province in China.Genomic analyses indicated that the strain 258E harbors an incompatibil... An extensively drug-resistant(XDR)Escherichia coli strain 258E was isolated from an anal swab sample of a chicken farm of Anhui province in China.Genomic analyses indicated that the strain 258E harbors an incompatibility group N(IncN)plasmid pEC258-3,which co-produces bla_(CTX-M-3),bla_(KPC-2),bla_(TEM-1B),qnrS1,aac(6')-Ib-cr,dfrA14,arr-3,and aac(6')-Ib3.Multiple genome arrangement analyses indicated that pEC258-3 is highly homologous with pCRKP-1-KPC discovered in Klebsiella pneumoniae from a patient.Furthermore,conjugation experiments proved that plasmid pEC258-3 can be transferred horizontally and may pose a significant potential threat in animals,community and hospital settings. 展开更多
关键词 bla_(CTX-M-3) bla_(kpc-2) bla_(TEM-1B) IncN PLASMID Escherichia coli
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Newly Detected Transmission of bla_(KPC-2) by Outer Membrane Vesicles in Klebsiella Pneumoniae
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作者 Liu-jun CHEN Xiao-peng JING +6 位作者 Dong-li MENG Ting-ting WU Huan ZHOU Rui-ling SUN Xiao-chun MIN Rong LIU Ji ZENG 《Current Medical Science》 SCIE CAS 2023年第1期80-85,共6页
Objective The prevalence of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(CR-KP)is a global public health problem.It is mainly caused by the plasmid-carried carbapenemase gene.Outer membrane vesicles(OMVs)contain toxins ... Objective The prevalence of carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(CR-KP)is a global public health problem.It is mainly caused by the plasmid-carried carbapenemase gene.Outer membrane vesicles(OMVs)contain toxins and other factors involved in various biological processes,includingβ-lactamase and antibiotic-resistance genes.This study aimed to reveal the transmission mechanism of OMV-mediated drug resistance of Klebsiella(K.)pneumoniae.Methods We selected CR-KP producing K.pneumoniae carbapenemase-2(KPC-2)to study whether they can transfer resistance genes through OMVs.The OMVs of CR-KP were obtained by ultracentrifugation,and incubated with carbapenem-sensitive K.pneumoniae for 4 h.Finally,the carbapenem-sensitive K.pneumoniae was tested for the presence of bla_(KPC-2)resistance gene and its sensitivity to carbapenem antibiotics.Results The existence of OMVs was observed by the electron microscopy.The extracted OMVs had bla_(KPC-2)resistance gene.After incubation with OMVs,bla_(KPC-2)resistance gene was detected in sensitive K.pneumoniae,and it became resistant to imipenem and meropenem.Conclusion This study demonstrated that OMVs isolated from KPC-2-producing CR-KP could deliver bla_(KPC-2)to sensitive K.pneumoniae,allowing the bacteria to produce carbapenemase,which may provide a novel target for innovative therapies in combination with conventional antibiotics for treating carbapenem-resistant Enterobacteriaceae. 展开更多
关键词 bla_(kpc-2) carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae CARBAPENEMASE outer membrane vesicles simplified carbapenem inactivation method
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广东省东莞地区发现1株泛耐药产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌 被引量:6
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作者 张丽 张小兵 +6 位作者 杨维青 黄娟 张丽华 张菊芬 朱学海 朱凯欣 周静 《中国感染与化疗杂志》 CAS 北大核心 2013年第6期465-468,共4页
目的研究泛耐药肺炎克雷伯菌的相关耐药机制和治疗对策。方法细菌鉴定采用VITEK2全自动细菌鉴定系统,药敏试验采用K-B法,通过产碳青霉烯酶确证试验(改良Hodge试验)及聚合酶链反应(PCR)检测KPC-2基因,并进行序列测定。同时调查感染患者... 目的研究泛耐药肺炎克雷伯菌的相关耐药机制和治疗对策。方法细菌鉴定采用VITEK2全自动细菌鉴定系统,药敏试验采用K-B法,通过产碳青霉烯酶确证试验(改良Hodge试验)及聚合酶链反应(PCR)检测KPC-2基因,并进行序列测定。同时调查感染患者的诊疗情况。结果常规药敏试验显示,该菌株对阿米卡星敏感,对其他抗菌药物均耐药;Hodge试验阳性,PCR检测到KPC-2基因,序列测定与GenBank 11844849序列一致。患者经拔除气管插管,入住隔离病房,加强支持治疗后,1个月内未检测到泛耐药肺炎克雷伯菌。结论加强泛耐药肺炎克雷伯菌监测,提高对泛耐药菌的认识有助于感染疾病的治疗和预防。 展开更多
关键词 泛耐药 kpc-2碳青霉烯酶 肺炎克雷伯菌
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产KPC-2肺炎克雷伯菌的基因分型、毒力基因和血清型特征研究 被引量:8
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作者 程莉 曹小利 +4 位作者 沈瀚 张之烽 宁明哲 周万青 张葵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第8期591-595,共5页
目的分析我院产KPC-2肺炎克雷伯菌基因分型、毒力基因和血清型特点。方法收集碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株75株(采用改良Hodge试验和DNA测序以确定其表型和基因型)和同期分离的敏感株97株,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株间的同源性,... 目的分析我院产KPC-2肺炎克雷伯菌基因分型、毒力基因和血清型特点。方法收集碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株75株(采用改良Hodge试验和DNA测序以确定其表型和基因型)和同期分离的敏感株97株,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株间的同源性,PCR检测9种毒力基因all S、rmp A、mrk D、kfu BC、cf29a、fim H、uge、wab G、ure A和K1、K2、K5、K54、K57、K206种血清型。比较产KPC-2和非产KPC-2肺炎克雷伯菌的毒力基因和血清型差异。结果 75株碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株中,有61株细菌经改良Hodge试验初筛为产碳青霉烯酶菌株,PCR扩增及DNA测序确定其为产KPC-2酶。PFGE结果显示,依据相似度80%的折点,产KPC-2酶组的61株细菌来源于30个克隆菌株,不产KPC-2酶组的111株肺炎克雷伯菌来源于96个克隆菌株。all S基因在不产KPC-2组中的阳性率(21.9%)高于在产KPC-2组的阳性率(3.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。血清型K1、K2和K54在产KPC-2组与不产KPC-2组间的分布差异无统计学意义(P>0.05),其他3种血清型未检测到。结论产KPC-2肺炎克雷伯菌临床分离株携带的尿素酶基因all S减少,且大多不属于高致病性血清型,但作为高度耐药菌,应加强监控。 展开更多
关键词 kpc-2 毒力基因 血清型 脉冲场凝胶电泳 肺炎克雷伯菌
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海南产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状 被引量:5
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作者 李天娇 王旭明 +7 位作者 符生苗 周晓君 李成学 徐凯 黄涛 符惠群 吕叶 林翀 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期2204-2206,共3页
目的探讨海南地区产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状。方法通过法国梅里埃API20E生化鉴定条和法国生物梅里埃VITEK2全自动细菌鉴定仪和配套CNS试剂筛选出临床上耐亚胺培南或美罗培南的肠杆菌科细菌并进行药敏统计;并对其进行改... 目的探讨海南地区产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状。方法通过法国梅里埃API20E生化鉴定条和法国生物梅里埃VITEK2全自动细菌鉴定仪和配套CNS试剂筛选出临床上耐亚胺培南或美罗培南的肠杆菌科细菌并进行药敏统计;并对其进行改良Hodge试验和亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验检测碳青霉烯酶表型;对目的菌株进行KPC-2耐药基因PCR特异性扩增,扩增后将产物进行琼脂糖凝胶电泳。结果分离出30株耐亚胺培南和美罗培南的肠杆菌科细菌,体外药敏除阿米卡星23.3%和左氧氟沙星36.7%外,其他广谱青霉素类、头孢类、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂及庆大霉素呈现高水平耐药。30株耐亚胺培南和美罗培南的肠杆菌科细菌有9株改良Hodge试验为阳性,有21株亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验为阳性。对其9株改良Hodge试验为阳性菌株进行KPC-2基因PCR扩增,扩增后进行电泳没有发现携带KPC-2耐药基因的耐药菌株。结论海南地区耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌暂时没有发现携带KPC-2型基因耐碳青霉烯酶,但多见产金属酶的碳青霉烯酶。 展开更多
关键词 碳青霉烯酶 kpc-2基因 肠杆菌科 海南
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产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌整合子分布研究 被引量:4
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作者 姚慧琳 范德胜 +1 位作者 陆士海 刘培明 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期281-283,共3页
目的研究亚胺培南耐药肠杆菌耐药机制,分析整合子的分布情况及其在流行传播中的作用。方法收集临床分离的18株对亚胺培南耐药肠杆菌,用琼脂稀释法检测抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);用PCR、DNA测序法检测KPC-2型碳青霉烯酶基因和整合酶基因... 目的研究亚胺培南耐药肠杆菌耐药机制,分析整合子的分布情况及其在流行传播中的作用。方法收集临床分离的18株对亚胺培南耐药肠杆菌,用琼脂稀释法检测抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);用PCR、DNA测序法检测KPC-2型碳青霉烯酶基因和整合酶基因,并分析整合子在耐药基因传播中的作用。结果 18株肠杆菌除对亚胺培南耐药外,对头孢噻肟、环丙沙星、头孢吡肟、阿米卡星、氨苄西林等多药耐药,MIC值分别为128~2 048、8~512、64~2 048、16~2 048、64~4 096μg/mL;PCR、基因测序显示18株肠杆菌均产KPC-2型碳青霉烯酶;18株菌均扩增出Ⅰ类整合酶基因,未检测出Ⅱ类整合酶基因,可变区中不存在kpc-2基因。结论本院分离的18株亚胺培南耐药肠杆菌均存在Ⅰ类整合酶基因,且kpc-2基因是引起这些细菌对亚胺培南耐药的主要原因。 展开更多
关键词 肠杆菌 kpc-2基因 亚胺培南 整合子 聚合酶链反应 DNA测序
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弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导的KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因结构分析 被引量:3
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作者 林迪 方颍 +1 位作者 张嵘 陈功祥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第6期423-427,共5页
目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性... 目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究。结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带bla_(CTX-M-15);其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带bla_(NDM-1),CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带bla_(KPC-2)、CF-43-2同时携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2));分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似。结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,bla_(NDM-1)周围序列和bla_(KPC-2)周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似。 展开更多
关键词 弗劳地枸橼酸杆菌 碳青霉烯酶 NDM-1 kpc-2
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肺炎克雷伯菌携带碳青霉烯酶KPC-2基因环境多态性研究 被引量:4
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作者 沈平华 仉英 蒋晓飞 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期680-684,共5页
目的研究复旦大学附属华山医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌广泛播散初期携帯bla_(KPC-2)的完整基因结构,获得其播散的基因背景。方法收集2006年8月-2009年12月连续不重复的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌42株,进行质粒抽提、bla_(KPC-2)筛选... 目的研究复旦大学附属华山医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌广泛播散初期携帯bla_(KPC-2)的完整基因结构,获得其播散的基因背景。方法收集2006年8月-2009年12月连续不重复的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌42株,进行质粒抽提、bla_(KPC-2)筛选、多位点序列分型(MLST);随后设计一系列PCR引物,基因结构进行完整测序。结果MLST分型显示:34株属于ST11型,5株属于ST423,2株属于ST65,1株属于ST977。主要发现两种携带bla_(KPC-2)基因结构,A型(8/42):Tn1721-bla_(KPC-2)-Tn3;B型(34/42):Tn1721-bla_(KPC-2)-Tn3,且B型结构的两端序列存在差异。结论该组中肺炎克雷伯菌携带bla_(KPC-2)的基因结构存在多态性,Tn1721-bla_(KPC-2)-△Tn3-IS26样结构占优势。研究获得的携带bla_(KPC-2)基因结构及侧翼的完整序列,为进一歩正确认识和理解bla_(KPC-2)的播散模式和机制提供了完整的基因背景。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯类耐药 kpc-2 基因环境
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应用MALDI-TOF MS快速鉴定bla_(KPC-2)基因型肺炎克雷伯菌 被引量:2
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作者 汪华学 张杰 +3 位作者 曹云松 徐阳 应冲涛 郭普 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期217-223,共7页
目的探讨基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对携带bla_(KPC-2)基因型肺炎克雷伯菌的快速鉴定能力。方法收集2018年9月—2020年11月蚌埠医学院第一附属医院临床住院患者分离的肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法进行药敏试验。... 目的探讨基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对携带bla_(KPC-2)基因型肺炎克雷伯菌的快速鉴定能力。方法收集2018年9月—2020年11月蚌埠医学院第一附属医院临床住院患者分离的肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法进行药敏试验。应用聚合酶链反应(PCR)方法筛选携带bla_(KPC-2)基因型肺炎克雷伯菌。MALDI-TOF MS鉴定菌株并收集携带bla_(KPC-2)基因型和碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)的质谱图,各自选取其中70株菌株图谱,建立携带bla_(KPC-2)基因型和CSKP的超级图库(Super-Spectra)。采用超级图库鉴定除建库以外的肺炎克雷伯菌,根据耐药表型和PCR结果,判断鉴定结果是否准确。结果共收集295株肺炎克雷伯菌,经耐药表型筛选耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)143株和CSKP 152株。CRKP中鉴定出140株携带碳青霉烯酶基因(134株检出bla_(KPC-2)基因,3株检出blaKPC-18基因,2株检出blaNDM-1基因,1株检出blaIMP基因),3株不携带碳青霉烯酶基因;其中2株同时检出bla_(KPC-2)基因和blaNDM-1基因。根据建库要求,建立携带bla_(KPC-2)基因型和CSKP的超级图库(Super-Spectra);设置error值<0.5,二者重合率达80%;对比图发现,4154.4、8310.7、10880.8、3579、10079.3 m/z五个峰可作为区分携带bla_(KPC-2)基因肺炎克雷伯菌和CSKP的特征峰。选取除建库以外的155株肺炎克雷伯菌进行验证,准确率为92.90%(144/155);其中携带bla_(KPC-2)基因肺炎克雷伯菌准确率为94.52%(69/73),CSKP准确率为91.46%(75/82)。结论通过MALDI-TOF MS建立Super-Spectra,可快速预测bla_(KPC-2)基因型肺炎克雷伯菌,为临床CRKP感染的诊疗及医院感染防控提供可靠的实验室依据。 展开更多
关键词 基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 肺炎克雷伯菌 bla_(kpc-2) 超级图库
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一株弗劳地枸橼酸杆菌中发现KPC-2型碳青霉烯酶 被引量:5
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作者 张嵘 蔡加昌 +1 位作者 周宏伟 陈功祥 《浙江检验医学》 2007年第3期22-25,49,共5页
关键词 枸橼酸杆菌 kpc-2 碳青霉烯 大肠埃希菌 细菌鉴定仪 肉汤培养基 受体菌 肺炎克雷伯菌 青霉素类
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siHybrids分子对耐药肺炎克雷伯菌kpc-2抑制作用研究
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作者 范芳华 吴国友 +2 位作者 周筱琼 肖震 程璐 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第5期490-494,共5页
目的:本研究采用RNA干扰技术和合成小分子抑制剂的方法,研究si Hybrids分子对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯杆菌耐药性的影响。方法:通过对临床分离的48株肺炎克雷伯杆菌进行药敏实验,初步筛选并收集了耐碳青霉烯类抗生素的菌株;进一步利用PC... 目的:本研究采用RNA干扰技术和合成小分子抑制剂的方法,研究si Hybrids分子对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯杆菌耐药性的影响。方法:通过对临床分离的48株肺炎克雷伯杆菌进行药敏实验,初步筛选并收集了耐碳青霉烯类抗生素的菌株;进一步利用PCR检测,筛选出携带碳青霉烯酶基因kpc-2的耐药株。利用si Hybrids技术,针对kpc-2设计合成si Hybrids杂合分子,对肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因kpc-2进行特异性沉默后,通过荧光定量PCR实验检测si Hybrids沉默靶基因kpc-2的体外表达水平,并通过联合抑菌实验验证si Hybrids分子提高抗生素抗菌活性乃至逆转细菌耐药性的效果。结果:合成的小分子siHybrids可以使耐药肺炎克雷伯杆菌kpc-2基因的表达下调,并且与碳青霉烯类抗生素亚胺培南、美罗培南、厄他培南分别联合使用,可使肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南、美罗培南、厄他培南由耐药转为敏感。结论:si Hybrids可以特异地抑制耐药肺炎克雷伯杆菌kpc-2基因的表达,通过干扰产碳青霉烯酶基因kpc-2造成肺炎克雷伯杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药性的逆转。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯杆菌 碳青霉烯酶 kpc-2 siHybrids分子
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重症监护室患者胃肠道产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株的分布调查及遗传相关性分析
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作者 胡金曹 曹小利 +3 位作者 万会林 周辉 周万青 李阳 《临床检验杂志》 CAS 2022年第11期817-820,共4页
目的分析产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株在南京大学附属鼓楼医院重症监护室(Intensive Care Unit,ICU)住院患者胃肠道的定植情况,并分析bla_(KPC-2)阳性肺炎克雷伯菌ST11菌株之间的遗传相关性。方法采集我院ICU患者的肛拭子,使用含有0.5μg... 目的分析产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株在南京大学附属鼓楼医院重症监护室(Intensive Care Unit,ICU)住院患者胃肠道的定植情况,并分析bla_(KPC-2)阳性肺炎克雷伯菌ST11菌株之间的遗传相关性。方法采集我院ICU患者的肛拭子,使用含有0.5μg/mL美罗培南的麦康凯平板筛选碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌,K-B法测定其对临床常用抗菌药物的敏感性;采用PCR法和DNA测序技术检测bla_(KPC-2)基因;多位点序列分型技术分析bla_(KPC-2)基因阳性肺炎克雷伯菌的序列分型(sequence type,ST),筛选出ST11菌株。脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术分析产bla_(KPC-2)肺炎克雷伯菌ST11菌株之间的遗传相关性。结果共收集肛拭子125份,30株(24.2%)为碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌。其中,27株(90.0%)携带bla_(KPC-2)基因,26株(86.7%)细菌为肺炎克雷伯菌ST11,25株(83.3%)细菌为产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11株。PFGE结果显示,19株产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11菌株之间有很大的遗传相关性。结论产bla_(KPC-2)肺炎克雷伯菌ST11株在我院ICU患者胃肠道中定植广泛,可能是其感染的主要病原菌,需加强感染控制措施。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 ST11 kpc-2 重症监护室 碳青霉烯耐药
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产KPC-2肺炎克雷伯菌的MLST和wzi分型分析 被引量:4
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作者 翟俊斌 贾佳 +3 位作者 程莉 张之烽 沈瀚 曹小利 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第9期660-662,666,共4页
目的探讨产KPC-2肺炎克雷伯菌的多位点序列分型(MLST)并确定其wzi分型。方法收集南京鼓楼医院2012—2014年分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌108株,采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株,PCR和DNA测序技术鉴定KPC-2编码基因。对产KPC-2菌... 目的探讨产KPC-2肺炎克雷伯菌的多位点序列分型(MLST)并确定其wzi分型。方法收集南京鼓楼医院2012—2014年分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌108株,采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株,PCR和DNA测序技术鉴定KPC-2编码基因。对产KPC-2菌株,用MLST技术分析其遗传相关性,并用PCR技术对其进行wzi分型。结果 108株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中,72株产KPC-2。72株产KPC-2菌株经MLST分型分为9个不同克隆型,其中ST11(61/72,84.7%)最为流行,其次为ST15(4/72,5.6%);72株产KPC-2细菌有7种wzi分型,wzi209(K47荚膜型)最为流行(58/72,80.6%),其次为wzi64(K64荚膜型)(6/72,8.3%)。结论产KPC-2肺炎克雷伯菌ST11型在我院存在克隆播散,大多为wzi209,荚膜型为K47,需加强感染控制措施。 展开更多
关键词 kpc-2 肺炎克雷伯菌 多位点序列分型 wzi分型
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可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的初步应用 被引量:5
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作者 邹萍 鲍俊峰 +2 位作者 臧嘉 张婷 许耀辉 《检验医学》 CAS 2019年第1期56-59,共4页
目的建立可视化环介导等温扩增(LAMP)方法检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2),并初步评估其应用价值。方法设计3对特异性的LAMP引物,建立25μL的LAMP检测体系并进行优化,通过与聚合酶链反应(PCR)进行比较,分析其特异性和敏感性。结果... 目的建立可视化环介导等温扩增(LAMP)方法检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2),并初步评估其应用价值。方法设计3对特异性的LAMP引物,建立25μL的LAMP检测体系并进行优化,通过与聚合酶链反应(PCR)进行比较,分析其特异性和敏感性。结果成功建立了检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的可视化LAMP方法。63℃保温40 min可实现对bla_(KPC-2)基因的快速检测。特异性与PCR一致,敏感性比PCR高约10倍。采用新建立的可视化LAMP方法检测出25株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南其中之一耐药的肺炎克雷伯菌中有12株携带bla_(KPC-2)基因,31株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南敏感的肺炎克雷伯菌中有5株携带bla_(KPC-2)基因,二者比较差异有统计学意义(P=0.009 9)。结论建立的可视化LAMP方法可作为检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的方法,但尚不能替代体外药物敏感性试验。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 肺炎克雷伯菌 耐碳青霉烯酶 blakpc-2基因
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高毒力肺炎克雷伯菌中KPC-2型碳青霉烯酶对细菌毒力的影响 被引量:3
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作者 祝俊英 魏清 +2 位作者 沈震 袁挺 李敏 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期697-702,共6页
目的了解高毒力肺炎克雷伯菌获得KPC-2型碳青霉烯酶后对细菌毒力的影响。方法收集3株碳青霉烯类敏感的高毒力肺炎克雷伯菌野生株(hvKP)作为实验菌株并调查其临床信息,采用PCR方法检测其毒力基因、荚膜血清分型及ST分型等。采用过表达实... 目的了解高毒力肺炎克雷伯菌获得KPC-2型碳青霉烯酶后对细菌毒力的影响。方法收集3株碳青霉烯类敏感的高毒力肺炎克雷伯菌野生株(hvKP)作为实验菌株并调查其临床信息,采用PCR方法检测其毒力基因、荚膜血清分型及ST分型等。采用过表达实验将blaKPC-2克隆至pHSG396质粒并转化至hvKP野生株构建blaKPC-2转化株,采用血清抵抗试验和生物膜实验比较hvKP野生株和blaKPC-2转化株对血清中杀菌物质的抵抗能力及生物被膜形成能力,低速度离心沉降实验及糖醛酸测定比较二者黏液性及荚膜多糖含量,荧光定量PCR检测荚膜多糖结构基因及调控基因转录水平表达情况。结果3株hvKP野生株中1株为ST23 K1型,所检测的10种毒力基因均为阳性。另外2株均为ST65 K2型,毒力基因rmpA、rmpA2、iroB、iutA、ybtS、entB、mrkD均为阳性,magA、allS及kfu均为阴性。与hvKP野生株相比,blaKPC-2转化株对血清中杀菌物质的抵抗能力明显下降,生物被膜形成能力明显下降,细菌黏液性下降,荚膜多糖含量下降,荚膜多糖结构基因及调控基因转录水平下降。结论hvKP野生株获得KPC-2型碳青霉烯酶后可导致细菌荚膜多糖产生减少,可能导致细菌毒力降低。 展开更多
关键词 高毒力肺炎克雷伯菌 毒力 kpc-2型碳青霉烯酶 荚膜多糖
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携带blaKPC-2基因肺炎克雷伯菌引起儿童医院感染暴发的研究 被引量:4
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作者 张会 赵辉 +3 位作者 董丹丹 刘真真 贾楠 朱元祺 《中国实验诊断学》 2019年第1期136-139,共4页
目的调查分析某儿童医院分离的对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因和菌株间的同源性,为医院感染控制提供依据。方法收集非重复9株对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌。菌株的鉴定和药敏试验采用梅里埃Vitek-2Compact系统。碳青霉烯酶和... 目的调查分析某儿童医院分离的对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因和菌株间的同源性,为医院感染控制提供依据。方法收集非重复9株对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌。菌株的鉴定和药敏试验采用梅里埃Vitek-2Compact系统。碳青霉烯酶和超广谱β-内酰胺酶耐药相关基因通过PCR扩增和产物测序确定。多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳及应用BioNumerics聚类软件分析菌株之间的同源性。结果除了磺胺甲恶唑/甲氧苄啶外,9株肺炎克雷伯菌对头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素都耐药。在9株菌中,8株为ST11型,都携带blaKPC-2、blaCTX-M-65、blaSHV-12和blaTEM-1B耐药基因,且相互间脉冲场凝胶电泳聚类分析有92.8%-100%的相似度;另外1株为ST278型,仅携带blaKPC-2基因,与8株ST11型肺炎克雷伯菌的聚类分析相似度为64.3%。结论携带blaKPC-2、blaCTX-M-65、blaSHV-12和blaTEM-1B基因的ST11型肺炎克雷伯菌的克隆播散是引起患儿医院感染暴发的原因。经检索,这是国内外首次报道。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 kpc-2 儿童 医院感染
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亚胺培南联合头孢他啶对产KPC-2酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌效果 被引量:3
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作者 盛巍 叶美娟 +2 位作者 卢冰清 程韬 凌迎春 《中国医药》 2022年第2期266-268,共3页
目的探讨亚胺培南联合头孢他啶对产KPC-2酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌效果。方法回顾性分析浙江省金华市第二医院2019年1月至2020年12月收治的150例产KPC-2酶肺炎克雷伯菌感染患者的临床资料,送检标本中共分离出产KPC-2酶的肺炎克雷伯菌150... 目的探讨亚胺培南联合头孢他啶对产KPC-2酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌效果。方法回顾性分析浙江省金华市第二医院2019年1月至2020年12月收治的150例产KPC-2酶肺炎克雷伯菌感染患者的临床资料,送检标本中共分离出产KPC-2酶的肺炎克雷伯菌150株,分析检出菌株的标本分布情况、药物敏感试验结果、KPC基因型筛查结果以及亚胺培南联合头孢他啶的最低抑菌浓度值。结果 150株产KPC-2酶肺炎克雷伯菌检出标本来源为痰液84株(56.0%)、尿液43株(28.7%)、分泌物11株(7.3%)、血液9株(6.0%)、腹腔积液3株(2.0%);菌株对亚胺培南的耐药率为48.7%(73/150),对头孢他啶的耐药率为100%(150/150),对二者联合的耐药率为22.7%(34/150);均为携带blaKPC-2基因型。亚胺培南与头孢他啶联合的分级抑菌浓度指数<0.5,两种药物存在协同作用。结论亚胺培南联合头孢他啶对产KPC-2酶肺炎克雷伯菌具有明显的体外抗菌效应,为临床治疗产KPC-2酶肺炎克雷伯菌感染增加了一种用药选择。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 亚胺培南 头孢他啶 kpc-2 药物敏感试验
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KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
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作者 刘雄 张凤娇 +5 位作者 李享 陈芳红 房华丽 王琴 李涛 王慧 《生物技术通讯》 CAS 2013年第5期650-654,共5页
目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步... 目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。 展开更多
关键词 细菌耐药 kpc-2型碳青霉烯酶 Β内酰胺类抗生素 酶催化动力学
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