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利用降落PCR扩增KS基因
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作者 刘炳辉 曹远银 +3 位作者 程浩 闫建芳 齐小辉 刘秋 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第11期87-90,共4页
通过优化SDS法提取链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)和2株由生物技术与资源利用国家民委——教育部重点实验室分离获得的放线菌D8和D18基因组DNA,同时应用降落PCR和普通PCR扩增酮基合酶基因(ketosynthase,KS)。结果表明,扩增出的特... 通过优化SDS法提取链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)和2株由生物技术与资源利用国家民委——教育部重点实验室分离获得的放线菌D8和D18基因组DNA,同时应用降落PCR和普通PCR扩增酮基合酶基因(ketosynthase,KS)。结果表明,扩增出的特异性条带与目的基因片段长度一致,降落PCR法较普通PCR法扩增KS基因特异性更高。使用普通Taq酶,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,它可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性。 展开更多
关键词 优化SDS法 降落PCR 退火温度 ks基因
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马氏珠母贝接头蛋白CIKS的基因克隆与组织表达分析 被引量:3
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作者 何军军 梁海鹰 +2 位作者 吴羽媛 林丽旋 邓岳文 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第4期1-7,共7页
【目的】探究马氏珠母贝接头蛋白CIKS(PmCIKS)在马氏珠母贝免疫反应中的作用。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得PmCIKS基因cDNA全长序列,运用生物信息学手段分析该序列,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测PmCIKS基因在马氏... 【目的】探究马氏珠母贝接头蛋白CIKS(PmCIKS)在马氏珠母贝免疫反应中的作用。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得PmCIKS基因cDNA全长序列,运用生物信息学手段分析该序列,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测PmCIKS基因在马氏珠母贝7个组织中的表达模式。【结果】PmCIKS基因cDNA全长为1 987 bp,其中5′UTR长为228 bp,3′UTR长为148 bp,包含24 bp的ploy A,开放阅读框(ORF)为1 611 bp,编码536个氨基酸,预测其分子质量约为61.3 ku,等电点为7.01。物种间CIKS有较高的保守性。PmCIKS在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞、外套膜和足中均有表达,其中在血细胞中表达量最高。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 CIks 基因克隆 基因表达 实时荧光定量PCR
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Transcriptomic comparison to identify rapidly evolving genes in Braya humilis
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作者 YuMing Wei XiaoFei Ma PengShan Zhao 《Research in Cold and Arid Regions》 CSCD 2018年第5期428-435,共8页
The Brassicaceae species Braya humilis shows broad adaptation to different climatic zones and latitudes. However, the molecular adaptation mechanism of B. humilis is poorly understood. In China, B. humilis is mainly d... The Brassicaceae species Braya humilis shows broad adaptation to different climatic zones and latitudes. However, the molecular adaptation mechanism of B. humilis is poorly understood. In China, B. humilis is mainly distributed on the QinghaiTibetan Plateau(QTP) and in the adjacent arid region. Previous transcriptome analysis of B. humilis has revealed that 39 salt and osmotic stress response genes are subjected to purifying selection during its speciation. To further explore the adaptation mechanism of B. humilis to an arid environment, OrthoMCL program was employed in this study and 6,268 pairs of orthologous gene pairs with high confidence were obtained between B. humilis and Arabidopsis thaliana. A comparative evolutionary analysis based on nonsynonymous to synonymous substitution ratio(Ka/Ks) was then conducted. There were 64 pairs exhibiting a Ka/Ks ratio more than 0.5 and among which, three instrumental candidate genes, T20487,T22576, and T23757, were identified with strong selection signatures(Ka/Ks >1). The corresponding A. thaliana orthologs are double-stranded RNA-binding domain protein, MADS-box family protein, and NADH-dehydrogenase subunit6, which is encoded by mitochondria genome. This report not only demonstrates the adaptation contribution of fast evolving nuclear genes, but also highlights the potential adaptive value of mitochondria gene to the speciation and adaptation of B. humilis toward the extreme environment in an arid region. 展开更多
关键词 Braya humilis positive selection Ka/ks mitochondria gene variation NADH-dehydrogenase subunit 6
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大豆MIR156基因家族起源与进化模式研究 被引量:4
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作者 朱荣胜 金会会 +1 位作者 王志豪 陈庆山 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期8-15,共8页
Micro RNA(mi RNA)是小分子RNA,参与靶基因转录后调控,长度通常为20~22 nt。MIR156基因在植物中分布广,是目前已知第一个与植物年龄有关的小分子RNA,表达量随植物年龄增长而逐渐减少,对植物生长发育起重要调控作用。研究基于古多倍体... Micro RNA(mi RNA)是小分子RNA,参与靶基因转录后调控,长度通常为20~22 nt。MIR156基因在植物中分布广,是目前已知第一个与植物年龄有关的小分子RNA,表达量随植物年龄增长而逐渐减少,对植物生长发育起重要调控作用。研究基于古多倍体大豆基因组共线性分析,结合mi RBase收录数据和预测获取的基因,从进化角度对该基因家族进行系统分析。通过对大豆MIR156基因家族成员分布、复制模式、扩张模式和分子系统发育分析,揭示这一古老基因家族基本起源模式。结果表明,该家族由多个祖先基因起源,以全基因组复制及大片段复制等方式发展。研究从方法和结论上对系统分析植物小分子RNA起源和进化具有重要意义。 展开更多
关键词 基因家族 复制模式 ks 大豆
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拟南芥基因倍增及基因流失分析
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作者 李鸿健 谭军 《重庆邮电学院学报(自然科学版)》 2006年第4期548-552,共5页
基因倍增指基因组中含有基因的DNA片段复制出一个或更多拷贝的过程,是进化出新物种的主要原因。采用新的数据和方法研究拟南芥基因组的基因倍增过程,通过分析串联基因倍增和大规模基因倍增的存在比例和同义置换率分布,并估计大规模倍增... 基因倍增指基因组中含有基因的DNA片段复制出一个或更多拷贝的过程,是进化出新物种的主要原因。采用新的数据和方法研究拟南芥基因组的基因倍增过程,通过分析串联基因倍增和大规模基因倍增的存在比例和同义置换率分布,并估计大规模倍增后基因流失的比例,揭示了拟南芥基因组一次非常明显的全基因组倍增,采用科学的方法估计这次倍增发生在约8000万年前。比较该结果与之前的研究,提出了一种解释拟南芥基因倍增过程更合理的模型。 展开更多
关键词 拟南芥 基因倍增 同义置换率 基因流失
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人类疱疹病毒8型K8.1基因真核表达载体的构建与表达
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作者 赵丽娟 陈源红 +3 位作者 覃艳春 韦红玉 黄干荣 曾怡 《广西医学》 CAS 2012年第8期969-971,共3页
目的构建和表达人类疱疹病毒8型(HHV-8)K8.1基因真核表达载体。方法聚合酶链反应(PCR)法从HHV-8感染细胞BCBL-1细胞总DNA中扩增HHV-8 K8.1全长基因;克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+);将重组K8.1+pcDNA3.1真核表达载体转染人胚肾细胞293细... 目的构建和表达人类疱疹病毒8型(HHV-8)K8.1基因真核表达载体。方法聚合酶链反应(PCR)法从HHV-8感染细胞BCBL-1细胞总DNA中扩增HHV-8 K8.1全长基因;克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+);将重组K8.1+pcDNA3.1真核表达载体转染人胚肾细胞293细胞,提取总RNA,反转录PCR(RT-PCR)检测重组K8.1+pcDNA3.1真核表达载体在293细胞中的mRNA。结果经测序,克隆的K8.1基因序列与GenBank中登记的K8.1基因100%同源;RT-PCR法检测在约370 bp位置出现条带,与预期的369 bp大小一致。结论 HHV-8 K8.1基因真核表达载体构建成功,并可在293细胞中表达。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 K8.1基因 真核表达
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人类8型疱疹病毒K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达及其抗原特异性分析
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作者 赵淑君 何方平 +3 位作者 王星 陈晓 何斌 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第2期97-100,共4页
目的:制备人类8型疱疹病毒(HHV-8)K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达融合蛋白,并鉴定其抗原特异性。方法:将重组质粒pET41a-K8.1N转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)/K8.1N融合蛋... 目的:制备人类8型疱疹病毒(HHV-8)K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达融合蛋白,并鉴定其抗原特异性。方法:将重组质粒pET41a-K8.1N转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)/K8.1N融合蛋白,经Glutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化。采用Western blot法观察GST/K8.1N融合蛋白(作为抗原)与新疆地区、法国卡波西肉瘤(KS)患者血清以及四川健康儿童血清的血清学反应。结果:IPTG诱导后的菌体裂解蛋白,经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,显示有一个46kD的融合蛋白表达,经Westernblot法鉴定此融合蛋白能被KS患者血清特异性地识别,新疆地区KS患者血清检出率为78.6%,法国KS为12.0%,四川健康儿童血清无一例与GST/K8.1N融合蛋白发生反应。结论:HHV-8包膜糖蛋白编码基因在大肠杆菌BL21中获得正确表达,并与KS患者血清具有特异识别性。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 包膜糖蛋白K8.1N基因 原核表达 抗原特异性分析
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Genome-wide identification, characterization and evolution of cuticular protein genes in the malaria vector Anopheles sinensis (Diptera: Culicidae) 被引量:5
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作者 Bai-Qi Liu Liang Qiao +3 位作者 Qi-Yi He Yong Zhou Shuang Ren Bin Chen 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期739-750,共12页
Thirteen cuticular protein (CP) families have been recognized in arthropods. In this study, 250 Anopheles sinensis CP genes were identified and named based on genome and transcriptome sequences. They were classified... Thirteen cuticular protein (CP) families have been recognized in arthropods. In this study, 250 Anopheles sinensis CP genes were identified and named based on genome and transcriptome sequences. They were classified into 10 families based on mo- tifs and phylogenetic analyses. In 11 other insect species, nine had CP numbers 〉 150 while Apis mellifera and Tribolium castaneum had CP numbers less than 52. The CPs of eight species occupied 〉 1.4% of the total genomic gene number, whereas in three species the CPs occupied 〈 1%. The phylogenies for each CP family in An. sinensis were constructed and discussed. The 250 CPs each had 1-8 exons with 144 CPs (57.6%) having two exons. The intron length ranged from 66--3888 bp with 174 introns (54.0%) being 66--100 bp long. Except for two CPs on two contigs, 248 CPs were mapped onto 28 scaffolds with 136 genes (54.4%) restricted to five scaffolds. A total of 107 CPs were clustered and located at 27 loci. The CPR family had the conserved motif GSYS- LVEPDGTVRTV. The RR- 1 subfamily had an additional 21 amino acid (aa) motifs with the YVADENGF sequence that is common in insects. The RR-2 subfamily had an additional 50 aa motifs with two additional regions RDGDWKG and G-x(3)-VV. A comparison with 115 orthologous counterparts of An. gambiae CPs suggested purifying selection for all of these genes. This study provides basic information useful for further studies on biological functions of An. sinensis CPs as well as for comparative genomics of insect CPs. 展开更多
关键词 Anopheles sinensis CHARACTERIZATION cuticular protein genes genome-wideidentification PHYLOgeneTICS Ka/ks
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原发性纤毛运动障碍的临床特征分析 被引量:3
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作者 魏永祥 邢飞虹 +5 位作者 苗旭涛 刘小超 张欣 林静 孙异临 韩德民 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期195-198,共4页
目的探讨原发性纤毛运动障碍(primary ciliary dyskinesia,PCD)的临床特征及诊治。方法 3例临床表现为鼻窦炎的 PCD 患者行鼻内镜鼻窦手术,其中2例男性患者为双胞胎,另1例女性患者为孪生兄妹,但其兄无类似表现。术前取患者下鼻甲黏膜进... 目的探讨原发性纤毛运动障碍(primary ciliary dyskinesia,PCD)的临床特征及诊治。方法 3例临床表现为鼻窦炎的 PCD 患者行鼻内镜鼻窦手术,其中2例男性患者为双胞胎,另1例女性患者为孪生兄妹,但其兄无类似表现。术前取患者下鼻甲黏膜进行纤毛超微结构观察,取女性患者及其孪生哥哥的静脉血进行 DNAH5基因检测和染色体分析;定期随访观察术腔恢复状况。结果鼻腔鼻窦 CT 显示所有患者均为全组鼻窦炎症(1例影像学资料显示内脏反位,符合卡塔格内综合征表现),鼻内镜下切除鼻息肉、开放全组鼻窦,孪生兄弟切除肥大的腺样体。术后随访2~4年,鼻腔通气改善,术腔恢复良好,但仍有较多黏液性分泌物。电镜检查显示下鼻甲黏膜纤毛外侧动力蛋白臂缺失,DNAH5基因9个外显子检测和染色体分析未见异常。结论鼻腔鼻窦结构的微创手术可改善PCD 患者的相关症状,纤毛超微结构改变是其病理变化的重要标志,分子生物学检测还需深入研究。 展开更多
关键词 纤毛运动障碍 卡塔格内综合征 基因
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基于基因进化树和地理数据库追踪禽流感病毒变异 被引量:2
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作者 蔡斌 彭谨 +5 位作者 江华 杨浩 孙明伟 Charles Damien Lu 胡卫建 曾俊 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期887-891,共5页
目的禽流感疫情的爆发和传播受到多种自然因素的影响。今欲尝试将地理信息系统与基因进化树分析相结合,以建立一种基于基因序列变异追踪中国禽流感病毒地理传播的技术。方法禽流感病毒基因来源于美国国立医学图书馆(National Library ... 目的禽流感疫情的爆发和传播受到多种自然因素的影响。今欲尝试将地理信息系统与基因进化树分析相结合,以建立一种基于基因序列变异追踪中国禽流感病毒地理传播的技术。方法禽流感病毒基因来源于美国国立医学图书馆(National Library for Medicine,NLM)数据库,所获得的基因组数据利用E—Utilities软件包转化为结构体后,可用Matlab软件阅读。结构体主要字段包括PB2、PBl、PA、HA、NP、HA、M1和NSl8个片段,分别代表流感病毒的8个不同的基因片段。基于结构体字段,利用计算生物学的方法比较不同传播能力禽流感病毒的同义突变/非同义突变基因(Ka/Ks)比例,确定不同选择压力之下A型禽流感病毒的基因突变模式。进而选择Ka/Ks比例最大的基因片段,采用Jukes—Cantor算法估计氨基酸序列变异的进化距离,然后对不同爆发点的H5N1型禽流感进行进化树聚类。将聚类信息输入Google Earth,并利用不同图层地理信息对影响爆发点分布的因素做单因素分析。结果比较分析A型禽流感所有的8个基因序列可以看出,NSl、HA和NA蛋白的Ka/Ks比值较大。三者中,HA基因的Ka/Ks比值最大,可以代表病毒的传播能力。利用分级聚类的思路对HA基因转录的氨基酸相似程度进行比较,发现自2003年以来亚洲地区爆发的H5N1型禽流感之间的关系可以表示为一个由30个节点构成的进化树,其中14个节点为分支节点,16个节点为叶子结点。把分支树的前三个节点作为分类标准,可以把所有16个病毒株分为四类。这四类病毒在地理空间的分布呈现一定规律。计算发现禽流感爆发相关地理因素排序分别为:内陆水体〉主要铁路交通线〉家禽密度。结论对中国HSNl病毒株基因序列变异的地理分布分析显示,禽流感病毒爆发与候鸟迁徙、家禽运输密切相关。 展开更多
关键词 禽流感 病毒基因变异 谷歌地图 地理信息系统 基因进化树 同义突变/非同 义突变基因比例 Jukes-Cantor算法 中国
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卡波氏肉瘤组织中差异表达miRNA靶基因预测及生物信息学分析
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作者 罗婷 赵娟 +2 位作者 潘洋洋 袁武梅 曾妍 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期880-888,共9页
卡波氏肉瘤(Kaposi sarcoma,KS)在全球范围内是人免疫缺陷病毒感染者第二易患的肿瘤。本研究旨在确定KS中差异表达的关键微小RNA(microRNA,miRNA)及其靶基因和相关途径,为深入了解该疾病的分子机制提供理论基础。本研究通过测序获得KS... 卡波氏肉瘤(Kaposi sarcoma,KS)在全球范围内是人免疫缺陷病毒感染者第二易患的肿瘤。本研究旨在确定KS中差异表达的关键微小RNA(microRNA,miRNA)及其靶基因和相关途径,为深入了解该疾病的分子机制提供理论基础。本研究通过测序获得KS组织及瘤旁组织中的差异miRNA,借助starBase数据库预测差异表达miRNA的靶基因,同时用基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集和转录因子注释分析差异miRNA的靶基因,最后用实时荧光定量PCR(Quantitative Real⁃time PCR,qRT⁃PCR)验证下调最明显的三个miRNA。结果显示,上、下调差异miRNA分别为39个和67个。GO和KEGG富集分析显示,上调的差异miRNA靶基因主要富集在组蛋白修饰、核染色质、DNA−结合转录激活因子活性等生物学功能,主要通过cAMP信号通路和长时程增效等通路参与KS的疾病进程;下调的差异miRNA主要与组蛋白修饰、细胞前沿和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶的活性有关,主要通过FoxO及Hippo等信号通路参与KS的疾病进程。Reactome富集显示,差异miRNA多集中在受体酪氨酸激酶信号、信号转导疾病和PI3K⁃Akt等信号通路。转录因子注释结果显示,肿瘤蛋白P53(Tumor Protein P53,TP53)、叉头框转录因子O亚族1(Forkhead Box Protein O1,FOXO1)和叉头框转录因子O亚族3(Forkhead Box Protein O3,FOXO3)等转录因子可能和KS的发生发展密切相关。qRT⁃PCR结果显示,测序中下调最明显的三个miRNA在KSHV感染细胞中均显著下调。总之,本研究筛选出了KS组织中差异表达的miRNA,对其靶基因进行了一系列生物信息学分析,并初步发现miR⁃651⁃3p,miR⁃223⁃3p及miR⁃186⁃5p通过Hippo、FoxO及PI3K⁃AKT信号通路可能在KS的疾病进程中发挥重要作用。这些研究均为探寻KS的发病机制和靶向干预提供了有力的理论基础。 展开更多
关键词 卡波氏肉瘤(ks) 肿瘤 差异表达 MIRNA 靶基因 生物信息学
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水稻粒形调控相关基因进化的全基因组尺度分析
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作者 孙朋川 丁洪玲 +3 位作者 叶静 季磊 阎少宏 金殿川 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期3441-3450,共10页
水稻粒形相关基因,对于调控作物产量和品质都具有十分重要的作用,但关于其进化缺少一个系统的、全基因组尺度的比较基因组学分析。研究以已鉴定的水稻粒形相关基因为目标序列,在8个禾本科植物中进行比较基因组学分析,旨在全基因组范围... 水稻粒形相关基因,对于调控作物产量和品质都具有十分重要的作用,但关于其进化缺少一个系统的、全基因组尺度的比较基因组学分析。研究以已鉴定的水稻粒形相关基因为目标序列,在8个禾本科植物中进行比较基因组学分析,旨在全基因组范围揭示不同粒形基因在多个禾本科作物种系中的进化规律。基于同源比对分析发现,不同基因组中粒形相关基因数量不具有明显差异,平均每个基因组中粒长和粒宽相关的基因分别有364和75,其中较多的是谷子,有423粒长、71粒宽调控基因。基因组同源共线分析,发现全基因组加倍和串联重复对于家族基因拷贝数增加具有重要贡献,但是重复基因丢失可能维持了基因数量的稳定。通过粒形基因中旁系同源基因对间的同义核苷酸置换率(Ks)比较,揭示不同的粒形基因具有不同的进化速率,进化最快的是粒长调控相关基因An-1。本研究为认识水稻粒形调控相关基因进化提供了重要的理论基础,对于禾本科粒形相关基因从全局尺度到单基因的进化具有极为重要的意义。 展开更多
关键词 水稻 粒形 全基因组加倍 基因丢失 同义置换率(ks)
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