Coexistence of nitric oxide synthase with γ-aminobutyric acid during seizure induced by kainic acid in SD rats

Objective: Functional significance of NO and central inhibitory neurotransmitter γ-aminobutyric(GABA) during seizures were investigated morphorlogically. Methods: A kainate-induced complex partialseizure model was used in our experiment. Twenty SD rats were randomly divided into KA 30, 60, 90, 200min and control groups. The brain sections were stained by NADPh (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate ) diaphorase (Nd ) histochemically, and were further stained by GABA immunohistochemically.Results: Histological and immunohistochemical study revealed that in KA groups the number of Nd and GABA-positive double labelled neurons in CA3 region, CA3 region and dentate gyms was significantly reduced,compared with the control group. Conclusion: Nd coexisted with GABA in the brain. Reduction of GABA release led to relief of GABA-ergic inhibition and in the same way, reduction of NO release weakened its negative feedback modulation. Therefore neuronal synchronous paroxysmal discharges increased. GABA and NO,both having antiepileptic action, acted through different ways or different link in the same way. NO may involve in the effect of GABA-ergic neurons and play cooperative antiepileptic action with GABA.

油酸Ka值的测定-酸滴定油酸钠法

用无水乙醇作溶剂,将油酸钠纯化,并用气相色谱与质谱联用仪(GCMS)对油酸钠的含量进行检测;依据质子条件推导出在盐酸滴定油酸钠体系中溶液pH与油酸Ka值的关系,通过电位滴定法测定了20℃时油酸的电离常数(Ka)值为1.62×10^(-9);对不同浓度油酸钠的实测pH值与理论推导值进行了验证对照,结果一致。

金属卟啉催化空气氧化环己烷反应的工艺优化

简单铁、钴、铜、锰四苯基卟啉用于催化空气氧化环己烷联产KA油(环己醇和环己酮)和己二酸的反应,利用正交实验方法考察了锰四苯基卟啉催化下环己烷氧化反应中反应温度、压力、空气流速、时间、催化剂用量对反应转化率和产物选择性的影响,并获得了优化的工艺条件。以醇酮酸(环己醇、环己酮和己二酸)总产率作为评价指数进行极差分析得到温度、空气流速、反应时间、压力、催化剂量的极差值分别为6.17、3.12、2.25、1.81、1.53,表明温度是影响环己烷氧化的关键因素。锰四苯基卟啉催化环己烷空气氧化反应的优化工艺条件为温度150℃、压力1.2MPa、空气流速0.13m3.h-1、催化剂用量7mg、反应时间3.5h。验证实验表明,在上述优化条件下,环己烷转化率达20.0%,醇酮酸总选择性可达90.0%,己二酸选择性达到21.0%。

癫痫清颗粒对海人藻酸致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子及白细胞介素-4表达的影响

目的:研究癫痫清颗粒对海人藻酸(KA)致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-4(IL-4)表达的影响。方法:大鼠海马CA1区注射KA建立KA癫痫大鼠模型。观察癫痫清颗粒对KA癫痫大鼠模型行为学的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠海马内TNF-α及IL-4蛋白的表达。结果:癫痫清颗粒可延长癫痫大鼠发作潜伏期,降低其癫痫最大发作分级;可抑制由癫痫发作引起的大鼠海马内TNF-α及IL-4蛋白表达下降。结论:癫痫清颗粒可延长KA致痫大鼠的癫痫发作潜伏期,并降低发作分级,同时具有增加海马内TNF-α及IL-4蛋白表达的作用。

建立海人酸颞叶癫癎模型的实验研究

目的建立用立体定向技术制作大鼠海人酸颞叶癫癎模型的方法,并对模型永久癫癎敏感性的原因进行研究。方法将海人酸通过立体定向手术注入大鼠的海马组织,于不同的时间观察大鼠的癫癎发作情况和海马组织的病理学改变。结果大鼠在经历“湿狗样抖动”、口唇和头的自运动症、前肢抽搐、后肢抽搐后,进入强直-阵挛性全身发作,之后,每周均有自行发作,表现与人类颞叶癫癎极为一致。海马神经元的缺失、胶质细胞增生是模型长期癫癎敏感性的基础。结论立体定向方法建立的大鼠颞叶癫癎模型的发作形式及病理学改变与人类的颞叶癫癎极为一致,并且具有长期的癫癎敏感性。另外,立体定向局部注药所用海人酸的量较系统给药明显减少,花费显著减少。因此,该模型即可靠又经济。

海人酸癫癎大鼠海马存在能量代谢异常和线粒体功能障碍

目的:观察海人酸(KA)颞叶癫痫大鼠海马细胞内游离钙离子浓度、线粒体膜电位及线粒体酶活性和细胞能量代谢的改变,探讨线粒体功能障碍在海马神经元凋亡中的作用。方法:海人酸颞叶癫癎大鼠模型采用一侧海马注射海人酸制备。40只SD大鼠随机分为生理盐水对照组和KA组(6 h、1、3、7天),每组8只。检测各组海马细胞内游离钙离子浓度、线粒体膜电位、线粒体呼吸链复合物Ⅱ和Ⅳ以及Na^+-K^+-ATP酶活性、三磷酸腺苷(ATP)和二磷酸腺苷(ADP)的浓度。结果:KA组大鼠海马细胞内游离钙离子浓度显著增加,线粒体膜电位、线粒体呼吸链复合物Ⅱ和Ⅳ以及Na^+-K^+-ATP酶活性、ATP浓度、ATP/ADP比值显著降低,且随时间延长,其下降尤为显著。结论:KA大鼠海马存在能量代谢异常和线粒体功能障碍。

己二酸合成工艺研究进展评述

介绍了己二酸的性质、用途、市场前景和生产现状,介绍了己二酸的4种主要合成工艺:KA油法、C4烯烃法、生物法和环己烯法等,分析了这些工艺的现状和优缺点。根据己二酸行业现状及其合成工艺现状,展望了己二酸合成工艺的发展趋势,建议大力研发生物法和以臭氧为氧化剂的环己烯法等迎合未来发展趋势的新型的己二酸合成工艺。

己二酸生产工艺比较

本文介绍了几种己二酸生产方法:KA油硝酸氧化法工艺、KA油空气氧化法工艺、环己烷一步氧化法工艺等,并进行了工艺对比,简要概述其应用现状。

自发性高血压大鼠与正常血压大鼠缰核内微量注射海人酸引起的心血管和呼吸反应的比较

本文比较了自发性高血压大鼠(SHR)与正常血压大鼠(NR)缰核(Hb)内微量注射海人酸(KA)引起的心血管和呼吸反应。SHR与NR的Hb内微量注射KA均可使平均动脉压、心率和呼吸频率明显增加,同时伴有其它交感反应。SHR的Hb内微量注射KA引起的升压反应明显高于NR的Hb内微量注射KA引起的升压反应,但SHR与NR的Hb内微量注射KA引起的心率和呼吸频率增快反应之间的差异无统计学意义。结果提示:激活Hb内细胞体可引起明显的心血管和呼吸反应;Hb可能参与SHR高血压的形成。

SD大鼠红藻氨酸诱导性癫痫发作时Nd活性的组织学观察

本研究根据形态学观察对一氧化氮（NO）在癫病发作中的意义进行探讨。方法：选用红藻氨酸（KA）诱导的复杂部分性癫痫模型。SD大鼠20只随机分为KA30、60、90、200min组及对照组。脑组织进行还原型辅酶II依赖性黄逸酶（NADPHd，Nd）染色。结果：①KA建模鼠全部出现点头、肢体抽搐、湿水样摇动、姿式失衡及全身强直一阵挛性惊厥；②在不同的脑区和同一脑区不同时点Nd阳性神经元的分布均不同；KA建模组Nd的表达比对照级低，在CA3区KA30min组Nd的表达比其它时点KA组低；在KA90min组大脑皮质Nd的表达与对照组相比无显著差异。结论：①Nd免疫阳性产物在不同的脑区分布不同。②一氧化氮合酶─—氧化氮（NOS－NO）途径可能参与癫痫的起动与传播，在癫痫发作的不同阶段，内源性NO的作用依赖于NO具体的氧化还原状态，且与其被释放的部位、时间、程度有关．在早期，NO起负反馈调节作用，即早期抗发作。

海人藻酸致SD大鼠小脑损害机理及脑微灌流研究

目的:研究海人藻酸(KA)对损伤小脑组织局部细胞外液Ca^(2+)的影响。方法:采用鼠脑立体定位仪,微量注射KA损毁SD大鼠双侧小脑顶核,制备SD大鼠小脑共济失调模型;用脑微灌流技术检测损伤前后小脑组织细胞外液Ca^(2+)浓度。结果:病理学证实,KA注射部位的神经元大部分坏死、脱失,出现明显的神经变性损害;KA致小脑损伤后其局部组织细胞外液Ca^(2+)浓度立即下降。结论:SD大鼠小脑微量注射KA 1ul即可导致以神经元退变为主的病理学损害,证实了作为谷氨酸受体激动剂的KA是通过电压依赖性Ca^(2+)通道,使Ca^(2+)流入细胞内引起细胞内Ca^(2+)超载,导致大鼠小脑神经元的损害。

电压门控性钠通道mRNA在海人酸致痫大鼠表达的研究

目的:探讨电压门控性钠通道在癫痫发病机制中的作用。方法:采用海人酸颞叶癫痫模型,运用原位杂交技术检测不同时点海马DG区、CA1区、CA2区和CA3区SCN2A、SCN3A mRNA的表达。结果:SCN2A和SCN3AmRNA均表达于海马的DG区、CA1、CA2、CA3区。海人酸致痫后3小时在海马各区表达开始增强,6小时明显增强(P<0.05),12小时达到高峰(P<0.01),24小时开始下降,48小时恢复至正常水平。结论:电压门控性钠通道SCN2AmRNA和SCN3A mRNA的表达增加可能参与了颞叶癫痫急性期的发病。

红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马NOS的表达

目的：研究ＫＡ诱导癫痫发作对大鼠海马ＮＯＳ表达的影响；方法：采用ＮＡＤＰＨ—ｄ组织化学方法显示ＮＯＳ的变化。Ｎｉｓｓｌ染色显示神经元的变性坏死；结果：ＫＡ３０ｍｉｎ海马各区ＮＯＳ阳性细胞明显增加，以ＣＡ１、ＣＡ２区为著，ＫＡ１ｈ、２ｈ与对照无差异（Ｐ＞０．０５），以后逐渐增加，至ＫＡ６ｈＮＯＳ阳性细胞最多，然后逐渐减少。Ｎｉｓｓｌ染色神经元缺失ＣＡ３＝齿状回＞ＣＡ１区；结论：ＫＡ诱导癫痫发作引起海马ＮＯＳ表达增加，ＮＯＳ产生ＮＯ早期参与癫痫发生。

地塞米松对海人酸致（癇）大鼠脑P-糖蛋白表达的影响

目的：探讨地塞米松对海人酸致痫大鼠脑P-糖蛋白（P-gp）表达的影响.方法：将SD大鼠随机分为假手术组（Sham组,n=8）、癫痫组（EP组,n=12）、地塞米松干预癫痫组（DEX组,n=12）.后两组采用海马注射海人酸方法制作癫痫模型,DEX组癫痫造模前30 min给予腹腔注射地塞米松0.4 mg/kg.分别记录各组大鼠达到Ⅲ级和Ⅴ级发作时所需的时间（潜伏期）,初次至第6次≥Ⅳ级发作的间隔时间作为评价癫痫发作严重程度的指标;大鼠术后24 h处死,使用HE染色和免疫组织化学方法,比较各组海马CA3区、齿状回、杏仁核复合体区P-gp表达及脑损伤情况.结果：①Sham 组未见癫痫发作;DEX组与EP组达到Ⅲ级发作的潜伏期分别为（87.92±45.80）min和（67.50±22.91）min,达到Ⅴ级发作的潜伏期分别为（103.33±51.27 ）min和（75.60±22.10）min,差异均无统计学意义（P〉0.05）;与EP组相比,DEX组样发作严重程度降低（P=0.004）;②与EP组相比,DEX组于所观察的脑区损伤均减轻,以海马CA3区和杏仁核复合体区较为显著;③与Sham组比较,EP组各观察脑区P-gp表达均明显升高（P〈0.01）;与EP组相比,DEX组海马CA3区和杏仁核复合体区P-gp表达显著减少（P〈0.05）,而在齿状回表达量差异无统计学意义（P=0.078）.结论：地塞米松可降低海人酸致痫大鼠发作严重程度和脑损伤,抑制P-gp表达上调,其中以海马CA3区和杏仁核区较为显著.

海人酸颞叶癫犬模型的脑磁图研究

目的:应用海人酸(KA)海马注射建立颞叶癫(TLE)犬模型,探讨对其进行脑磁图(MEG)研究的可行性。方法:应用KA给予犬脑单侧海马微量注射建立TLE模型,观察癫发生发展过程中的发作表现、脑电图、磁共振及病理改变,着重分析这种模型的MEG结果。结果:应用KA给予犬脑局部微量注射可成功制作TLE模型,模型表现稳定,脑电图、磁共振图、病理改变规律和MEG表现与电生理学及形态学表现相符。结论:应用KA局部微量注射制备的TLE犬模型是癫研究的有效实验工具,该模型在MEG基础研究中具有应用价值。

红藻氨酸对大鼠海马锥体细胞钙电流的影响

目的：应用膜片钳技术，观察红藻氨酸（KA）对大鼠海马锥体细胞ca2＋电流的影响，以研究癫痫的发病机制。方法：采用酶加机械分离法制备出生10～12d的大鼠海马锥体神经元标本，用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性及观察KA对ca2＋电流的影响。结果：分离出的海马锥体细胞形态正常，有较长突起；用膜片钳技术证实，其保存了主要的离子通道活性。KA20μmol／L和100μmol／L的浓度均可使海马锥体细胞ca2＋电流峰值增大（n=8，P〈0．01）。结论：①大鼠海马锥体神经细胞具有明显的突起，细胞膜表面光洁、晕光好，适用于膜片钳实验研究；②KA使ca2＋内流增加，引起“Ca”超载”导致细胞毒性等一系列反应；③KA通过激活α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体，诱发快速的兴奋性突触后电位（EPSP），参与兴奋性突触传递。AMPA受体的激活可能是癫痫的发病机制之一。

癫痫清颗粒对海人藻酸致痫大鼠海马内氧化应激及MAPK信号通路的影响

目的 观察癫痫清颗粒对癫痫大鼠氧化应激及MAPK信号通路的影响。方法 选取辽宁长生生物技术有限公司提供的90只Wistar大鼠,称取体重后,按照随机数字表法将大鼠分为6组,每组15只,分别为假手术组,模型组,癫痫清颗粒低、中、高剂量组及苯妥英钠组,各组大鼠按相应剂量灌胃给药,连续给药7 d,1次/d。假手术组和模型组予相应体积的蒸馏水。待末次给药1 h后,除假手术组外,其余各组大鼠分别于左侧海马CA1区单次注射海人藻酸(KA)1μg,假手术组注射同质量的生理盐水。KA注射24 h后,采用评分法进行超兴奋性实验(接触反应和抓取反应)检测,采用ELISA测定脑组织内谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)含量,采用免疫蛋白印迹法检测MAPK信号通路中蛋白(p-ERK/ERK、p-JNK/JNK)的表达。结果 癫痫清颗粒可降低接触反应评分[高剂量组(1.38±0.37)分,中剂量组(1.57±0.35)分],与模型组(2.30±0.38)分相比,差异有统计学意义(P<0.01),降低抓取反应评分[高剂量组(1.13±0.32)分,中剂量组(1.28±0.48)分],与模型组(1.95±1.02)分相比,差异有统计学意义(P<0.05);增加GSH含量[高剂量组(233.96±21.34)μmol/L,中剂量组(181.18±15.51)μmol/L],与模型组(56.82±6.72)μmol/L相比,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),降低GSSG含量[高剂量组(32.97±3.15)μmol/L,中剂量组(45.11±3.17)μmol/L],与模型组(88.40±7.46)μmol/L相比,差异有统计学意义(P<0.01),增加GPX含量[高剂量组(64.63±5.03)pg/mL,中剂量组(63.56±4.55)pg/mL],与模型组(41.28±3.29)pg/mL相比,差异有统计学意义(P<0.05);抑制p-ERK/ERK表达[高剂量组(1.33±0.24)DPI],与模型组的(1.78±0.09)DPI相比,差异有统计学意义(P<0.01);抑制p-JNK/JNK表达[高剂量组(1.28±0.11)DPI],与模型组的(1.63±0.14)DPI相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 癫痫清颗粒具有改善癫痫模型大鼠氧化应激状态,抑制MAPK信号通路的作用。

软骨藻酸和谷氨酸受体

软骨藻酸是由硅藻产生的一种神经毒素 ,可以通过食物链蓄积 ,对环境和人类健康造成了严重危害。它能激活 NMDA受体和 KA/ AMPA受体 ,提高神经细胞内 Ca2 +浓度 ,引起机体内一系列生理、生化反应的改变。

拓展实验苯磺酸的谱学分析与指认

通过信息理论方法对苯磺酸(BHS)及其衍生物建模优化,并判断化学结构对其酸度系数pKa是否影响,并计算处理预测苯磺酸及其衍生物的p Ka值及分子光谱。通过计算苯磺酸及其衍生物的申农熵、费歇尔熵、二级费歇尔熵、Parr熵和pKa的值,得到各类熵和酸度系数相关性线性方程,并选出其中相关性最高的关于预测酸度系数的线性方程。通过红外光谱(IR)、拉曼光谱(Raman)、紫外-可见光谱(UV-Vis)、核磁谱图(1H-NMR,13C-NMR)对苯磺酸及部分衍生物进行模拟预测和描述。结果显示,苯磺酸及其12种衍生物的H、O原子的申农熵(Ss)、费歇尔熵(IF)、Parr熵(Gs)变化较小,而H、O原子的二级费歇尔熵(IF)变化较为明显,其中H原子的Parr熵与pKa线性关系最好(R2=0.985)。这对制药工程专业拓展实验苯磺酸衍生物的光谱以及构效关系提供了基础数据。

兴奋性氨基酸受体所介导细胞钙电流特征及其中L-SOP的作用途径

目的:研究兴奋性氨基酸受体各亚型所介导非洲爪蟾卵母细胞跨膜电流的特征及其中Ⅲ型受体激动剂L-SOP的作用途径。方法:用异硫氰酸胍-酚-氯仿法从成年大鼠脑中提取总RNA,以寡聚脱氧胸苷酸纤维素亲和层析法分离出mRNA并注射入非洲爪蟾卵母细胞使表达,以全细胞双电极电压钳位法灌流此卵母细胞。结果:100μM KA(kainate)(离子型)产生一主峰电流后缓慢下行,成为一稳定电流平台,最终脱敏,脱敏时间平均为37.57 min。2 txM QA(quisqualate)(代谢Ⅰ型)产生一峰值电流后转为一持续性钙振荡或直接出现钙振荡,振荡维持时间为(6.72±1.33)min,脱敏时间均随激动剂浓度的增加而缩短。0.8 mM L- SOP(L-phosphoserine)(代谢Ⅲ型)灌流产生规律性电流振荡,振荡时间为(20.17±8.47)min。此振荡电流可被代谢Ⅰ型受体拮抗剂L-AP_3所拮抗。结论:离子型、代谢Ⅰ型及代谢Ⅲ型受体均产生各自特征电流模型;L-SOP不仅是Ⅲ型受体的激动剂,而且是Ⅰ型受体的弱的激动剂,即细胞振荡电流是L-SOP通过Ⅰ型受体的作用途径而产生。