结核分枝杆菌临床分离株对四种注射用抗结核药物耐药及交叉耐药分析

目的探讨链霉素(S)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)和卷曲霉素(Cm)对结核分枝杆菌的耐药及交叉耐药情况,为耐药结核病的化学治疗提供理论依据。方法对首都医科大学附属北京胸科医院2004年1月至2010年12月间4247株临床分离株的药物敏感试验结果进行分析。采用绝对浓度法进行药物敏感试验。4种药物之间总耐药率的差异采用配对χ2检验及χ2分割法,以P<0.007 14为差异有统计学意义。4种药物之间交叉耐药率的差异采用两个样本率比较的χ2检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果4247份临床分离株标本中,S的耐药率为45.11%(1916/4247),Km的耐药率为17.93%(718/4005),Am的耐药率为19.02%(792/4164),Cm的耐药率为9.44%(401/4247)。经配对χ2检验,Cm与S、Am、Km之间耐药率差异有统计学意义,χ2值分别为1349.34、281.54、193.16,P值均小于0.007 14。经配对χ2检验,S与Am、Km之间耐药率差异有统计学意义,χ2值分别为821.10、869.28,P值均小于0.007 14。经配对χ2检验,Am与Km之间耐药率差异有统计学意义,χ2值为13.98,P值小于0.007 14,耐药率从高到低依次为S、Am、Km和Cm。S在其他3种药物的耐药株中的耐药率分别为82.59%(耐Km株,593/718)、77.78%(耐Am株,616/792)、76.81%(耐Cm株,308/401),χ2值分别为502.959、453.911、626.654,P值均小于0.05。Km在另外3种药物耐药株中的耐药率分别为33.13%(耐S株,593/1790)、83.31%(耐Am株,634/761)、67.89%(耐Cm株,260/383),χ2值分别为502.959、12.079、100.536,P值均小于0.05。Am在另外3种药物耐药株的耐药率分别为32.78%(耐S株,616/1879)、89.55%(耐Km株,634/708)、77.95%(耐Cm株,304/390),χ2值分别为453.911、12.079、163.761,P值均小于0.05。Cm在其他3种药物的耐药株中的耐药率分别为16.08%(耐S株,308/1916)、36.21%(耐Km株,260/718)和38.38%(耐Am株,304/792),χ2值分别为626.654、100.536、163.761,P值均小于0.05。结论4种注射用抗结核药物的耐药率从高到低依次为S、Am、Km和Cm。4种药物之间均表现出交叉耐药,但程度不同。S与其他3种药物之间为单向耐药,Km和Am两个药物之间近似完全交叉耐药,Cm是其他3种药物耐药时的选择药物。

卡那霉素对昆明小鼠听脑干反应和畸变产物耳声发射的影响

目的研究卡那霉素(KM)对昆明小鼠听脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)的影响,探讨昆明小鼠对氨基糖甙类抗生素(AmAn)的耳毒易感性。方法16只雄性昆明小鼠随机分为KM组和对照组,给于皮下注射KM[2×750mg/(kg·d)]或者等量生理盐水,连续用药2周,分别记录用药前、后ABR阈值和DPOAE幅值;应用硝酸银染色观察耳蜗形态学变化。结果KM组用药1周后,DPOAE幅值明显下降,而ABR阈移无显著变化;2周后ABR阈移显著增大且停药后进一步增大。对照组ABR阈移和DPOAE幅值在用药前后无明显改变;耳蜗硝酸银染色显示对照组外毛细胞排列整齐,结构完整,而KM组外毛细胞则发生大部分缺失。结论昆明小鼠对AmAn易感,应用KM可以建立昆明小鼠AmAn耳毒性模型。在听功能检测上DPOAE可能比ABR更灵敏。

苹果叶片再生体系建立研究

以乔纳金苹果试管苗叶片为外植体诱导不定芽再生,在培养基中添加不同浓度TDZ与NAA或IAA配合,使用琼脂或Polygel作为固化剂。结果表明,较适宜的叶片再生不定芽的培养基为TDZ 2.0 mg/L和NAA1.0 mg/L,或TDZ 2.0 mg/L与IAA 4.0 mg/L。较适宜的组培固化剂为5.0 g/L的Polygel。在不同的组培固化剂中,卡那霉素均能抑制不定芽的发生数量,但琼脂和Polygel效果不同。

柱前衍生化HPLC检测硫酸卡那霉素的方法研究

目的采用柱前衍生化高效液相色谱法建立了快速定性、定量分析食品中的硫酸卡那霉素的方法。方法首先茚三酮-吡啶溶液作为衍生化试剂考察了衍生化反应条件,包括反应溶液的酸碱度、温度和反应时间,并建立了色谱分离条件。衍生化条件为在pH为5.8条件下,75℃水浴中反应20min。色谱条件为,色谱柱:150×4.6 mm Kromasil C18;流动相:甲醇-水(40∶60);流速:0.5mL.min-1;紫外检测波长390nm;进样量:20μL。结果硫酸卡那霉素的浓度在2.24×10-5mol.L-1～1.12×10-4mol.L-1之内,浓度与峰面积呈现良好的线性关系,建立的方法线性良好,样品回收率在95%～98%之间。结论本方法快速、灵敏,适合日常样品检测的需要。

HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质

目的建立测定硫酸卡那霉素原料及其注射液中有关物质与卡那霉素含量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLCCAD)方法。方法采用Waters HSS T3色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.2 mol/L三氟乙酸水溶液为流动相,流速0.3m L/min,柱温30℃,电喷雾检测器的喷雾器温度为35℃。结果新建方法对卡那霉素与硫酸盐、有关物质分离良好,精密度、重复性、回收率均满足分析要求。卡那霉素浓度与峰面积线性关系良好(R2>0.99),检出限可达到6.1ng。采用该方法对单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素以及硫酸卡那霉素注射液进行了测定,检出的有关物质个数及含量均高于现行标准的结果。结论新建方法灵敏度更高、分离度更好,能检出更多杂质,可以满足硫酸卡那霉素原料及注射液有关物质及含量测定分析要求。

棉花农杆菌介导转化体系中影响抗性愈伤组织诱导率的因素

以冀无2031为材料,采用正交设计方法,研究了农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化过程中菌液浓度、侵染时间、共培养时间和共培养温度对抗性愈伤转化效率的影响。结果表明,4个因素均对抗性愈伤的诱导率有极显著影响,其诱导效应依次是共培养温度>菌液OD值>侵染时间>共培养时间。按照正交设计的原则,最终得到农杆菌介导转化棉花下胚轴的最佳条件是:菌液OD值为0.3,侵染15 min,24℃共培养24 h,下胚轴抗性愈伤的转化效率最高。用珂312、中521和农大94-7对所选出的最佳组合进行了进一步验证,结果3个品种在优选组合下的抗性愈伤组织诱导率都很高,分别为93.85%、86.72%和85.83%。