HPLC法同时测定抗支糖浆中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷的含量

目的:建立一种HPLC法同时测定抗支糖浆中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷含量。方法:采用Waters ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.2%磷酸水溶液(含0.1%三乙胺)梯度洗脱,检测波长为205 nm,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为30℃。结果:盐酸麻黄碱和苦杏仁苷分别在0.169~3.380μg(r=0.999 9)、0.141~2.820μg(r=0.999 7)线性范围良好;平均加样回收率分别为98.8%、99.1%,RSD分别为1.93%、1.22%(n=6)。结论:本方法可同时测定抗支糖浆中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷的含量,方法简单准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。

抗支糖浆对哮喘大鼠BALF中IL-4、IL-13与IFN-γ含量的影响

目的:观察抗支糖浆对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13及IFN-γ含量的影响,探讨其治疗哮喘的作用机制。方法:48只雄性大鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、抗支糖浆组四组,除空白组外,其余各组采用皮下注射10%OVA、2%氢氧化铝混合液致敏及2%OVA雾化激发的方法制作哮喘大鼠模型。各组分别用生理盐水、地塞米松及抗支糖浆进行灌胃,连续灌胃14天后取大鼠BALF,离心留取上清液。采用ELISA法测定BALF中IL-4、IL-13与IFN-γ的含量,并用HE染色法观察肺组织病理学改变。结果:与空白对照组比较,模型对照组BALF中IL-4、IL-13含量明显升高(P<0.05),IFN-γ含量明显降低(P<0.05);抗支糖浆组IL-4、IL-13含量跟模型组相比均明显降低(P<0.05),IFN-γ含量显著升高(P<0.05)。肺组织病理显示,抗支糖浆可以减少哮喘引起的炎细胞浸润、支气管粘膜充血、渗出物的生成。结论:抗支糖浆能有效治疗哮喘大鼠,其作用机制可能与调节哮喘大鼠IL-4、IL-13和IFN-γ水平有关。

抗支糖浆心脏毒性的安全性评价

目的:通过抗支糖浆心脏毒性的安全性评价方法,验证制剂正常剂量下服用的安全性。方法:将40只SD大鼠随机分为4组:空白对照组、抗支糖浆低(4.40 g·kg^(-1))、中(17.60 g·kg^(-1))、高(35.20 g·kg^(-1))剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余各组灌胃给药,2次/d,连续7 d。记录动物反应和体质量,进行心电图检测,测定心肌酶谱羟丁酸脱氢酶(HBDH)、肌酸激酶同功酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量,测定心脏脏器系数,进行组织形态学检查。结果:空白对照组和抗支糖浆低、中剂量组大鼠外表及行为正常,体质量增长稳定;高剂量组大鼠给药后活动减少,食量减退,毛色暗淡且杂乱,大便黏稠。心电图变化结果显示,ST段的改变无显著性变化,给药第4天,中、高剂量组T波幅度发生显著性变化,高剂量组出现宽大的QRS波,出现心律失常,心率升高(P<0.05),但给药第7天均无显著性差异。与空白对照组比较,抗支糖浆中剂量组CK-MB、LDH活性明显上升,高剂量组LDH、HBDH、CK、CK-MB活性明显上升(P<0.05),心脏脏器系数无明显差异(P>0.05)。空白对照组和抗支糖浆低、中剂量组大鼠的心肌纤维排列规整,间隙规律,染色均匀,细胞质胞核清晰,但高剂量组大鼠的心肌纤维排列不规整,局部出现断裂,心肌细胞染色不均匀,心肌细胞间有炎细胞浸润。结论:正常剂量服用抗支糖浆对大鼠心脏无明显毒性,用药安全。

抗支糖浆对肺炎支原体感染大鼠IL-4、IFN-γ表达的影响

目的探讨抗支糖浆对肺炎支原体感染大鼠Th1/Th2类代表性因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)免疫应答的调控,为进一步深入研究及其临床推广应用提供依据。方法将95只大鼠随机分成4组,空白对照组、模型对照组、抗支糖浆组、阿奇霉素组,空白对照组20只,其余各组25只。连续滴鼻感染肺炎支原体4 d,末次感染后1 d开始给予药物干预,并于给药后1、3、5、8、10 d,采集模型大鼠的血、支气管肺泡灌洗液(BALF)进行检测。结果给药后第1日,除空白对照组外,其余各组大鼠BALF中肺炎支原体-PCR检测均为阳性。酶联免疫法检测各组大鼠血清中IL-4、IFN-γ的含量,空白对照组、抗支糖浆组、阿奇霉素组分别与模型对照组比较,各时间点IFN-γ表达显著增高(P<0.05)、IL-4表达显著降低(P<0.05);抗支糖浆组各时间点与阿奇霉素组各时间点无显著差异(P>0.05)。结论抗支糖浆可以调节Th1/Th2失衡,改善肺炎支原体感染大鼠免疫功能紊乱的状态。

抗支糖浆对雾化烟草提取物环境哮喘模型小鼠气道炎症及Th17/Treg免疫平衡的影响

目的:探讨抗支糖浆对雾化烟草提取物环境哮喘模型小鼠气道炎症及Th17/Treg免疫平衡的影响。方法:将90只SPF级KM雌性小鼠随机分为9组,空白组(A组)、模型组(B组)、抗支糖浆低剂量组(C组)、抗支糖浆高剂量组(D组)、阳性药组(E组)、烟雾模型组(F组)、烟雾抗支糖浆低剂量组(G组)、烟雾抗支糖浆高剂量组(H组)、烟雾阳性药组(I组)。烟雾模型组、烟雾抗支糖浆低剂量组、烟雾抗支糖浆高剂量组、烟雾阳性药组用雾化烟草提取物溶液雾化,除空白组外,其余各组给予OVA及Al(OH)_(3)注射致敏。给药组于实验第21天开始进行药物干预。观察哮喘小鼠模型一般状态及行为学变化情况,检测小鼠BALF中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)相关细胞因子IL-10、IL-17、IL-23水平,过碘酸雪夫染色(PAS)观察肺组织病理变化,统计BALF中白细胞的分类及计数。结果:空白组小鼠在OVA激发前呼吸平稳,雾化过程中逐渐出现点头、喘息、前肢搔鼻、毛色光泽减低等表现,且随雾化激发次数的增加而加重。模型组、烟雾模型组症状相似,烟雾模型组小鼠雾化烟草提取物后,表现较模型组小鼠更为明显,药物干预后,小鼠状态得到改善。各组IL-10、IL-17、IL-23含量均有不同程度改变。空白组未见明显肺组织病理改变,模型组、烟雾模型组病理改变最为明显,与模型组、烟雾模型组比较,其余6组的病理变化显著减轻。除空白组外,其余8组的白细胞总数、EOS、LYM、NEU各组所占百分比均显著增多(P<0.05)。结论:抗支糖浆可改善雾化烟草提取物环境哮喘模型小鼠的一般病理状态,改善哮喘症状;抗支糖浆可通过上调IL-10水平,下调IL-17、IL-23的表达,恢复Th17/Treg平衡,改善气道炎症,减少黏液高分泌,达到治疗哮喘的目的。

基于气道炎症及Th1/Th2免疫通路探究抗支糖浆对雾化烟草提取物环境哮喘模型小鼠的影响

目的:基于气道炎症及Th1/Th2免疫通路探究抗支糖浆对雾化烟草提取物环境哮喘模型小鼠的影响。方法:将90只健康SPF级雌性KM小鼠随机分为9组,即空白组(A组)、模型组(B组)、模型+抗支糖浆低剂量组(C组)、模型+抗支糖浆高剂量组(D组)、模型+孟鲁司特组(E组)、模型+雾化烟草提取物组(F组)、模型+雾化烟草提取物+抗支糖浆低剂量组(G组)、模型+雾化烟草提取物+抗支糖浆高剂量组(H组)、模型+雾化烟草提取物+孟鲁司特组(I组)。除A组外,其他各组用卵白蛋白(OVA)联合氢氧化铝凝胶致敏及OVA雾化,并给予孟鲁司特片、抗支糖浆进行药物干预。F、G、H、I组给予雾化烟草提取物。实验后进行肺组织病理检查,统计肺泡灌洗液(BALF)中细胞的分类及计数,采用ELISA法测定BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ、LTD4的含量,Western Blot法和RT-PCR法检测CysLTR1的蛋白和基因表达。结果:空白组支气管及肺泡结构正常,未见明显病理改变,模型+雾化烟草提取物组病理改变最为明显。与空白组相比,其余组的白细胞总数、EOS绝对计数等各项指标均增多;模型组、模型+雾化烟草提取物组IFN-γ含量减少,其中,模型+雾化烟草提取物组减少更明显(P<0.05),而IL-4、IL-5、IL-13、LTD4含量增多(P<0.05);模型组、模型+雾化烟草提取物组CysLTR1的蛋白表达水平增多,模型+雾化烟草提取物组增多更明显(P<0.05);模型组、模型+雾化烟草提取物组CysLTR1mRNA相对表达量增多,模型+雾化烟草提取物组增多更明显(P<0.05)。经药物干预后,各给药组的生理生化指标均有不同程度好转。结论:抗支糖浆可改善雾化烟草提取物环境哮喘模型小鼠的一般病理状态,减轻雾化烟草提取物环境哮喘气道炎症,可通过调节IL-4、IL-5、IL-13、LTD4、IFN-γ的表达,恢复Th1/Th2免疫平衡状态,下调CysLTR1mRNA的表达,从而干预CysLTR1介导的哮喘CysLTs炎症通路,达到防治雾化烟草提取物环境哮喘的目的。

抗支糖浆治疗咳嗽变异性哮喘作用机制网络药理学分析

目的基于网络药理学探讨抗支糖浆治疗咳嗽变异性哮喘(CVA)的靶点和作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取抗支糖浆中主要活性成分及其相关靶点,通过在线人类孟德尔遗传数据系统(OMIM)、Gene Cards数据库获取CVA相关靶点,采用Venny 2.1绘制抗支糖浆靶点与CVA疾病靶点的韦恩图,采用Cytoscape 3.6.1软件构建中药靶点网络,并应用STRING平台构建蛋白相互作用网络,应用R语言软件对关键靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。结果共获得136个活性成分,160个药物与CVA相关靶点,主要活性成分为豆甾醇、β-谷固醇、槲皮素、儿茶素、木犀草素、山奈酚等。PPI网络中核心基因为蛋白激酶B(AKT1)、白细胞介素(IL)-6、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、IL-1β、JUN等;GO功能富集后富集数目较多的有受体-配体活性、细胞因子受体结合、细胞因子活性、血红素结合等;KEGG富集通路分析显示抗支糖浆治疗CVA主要通路有脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路以及IL-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等为主;KEGG通路与基因之间的网络图中关联数量较多的基因主要有IL-1β、NFKBIA、IL-6、CHUK、CXCL8、JUN、CASP3等。结论初步验证了抗支糖浆的药效基础,主要成分及靶点均显示具有较好的结合性能,可为抗支糖浆治疗CVA提供理论基础。