柱前衍生-高效液相色谱-串联质谱法测定鲜茶叶中的春雷霉素

目的建立柱前衍生高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定鲜茶叶中春雷霉素的检测方法。方法样品经甲醇/水溶液提取,MCX SPE阳离子交换柱(mixed-mode cation exchanger SPE column)净化,9-氯甲酸芴甲酯[9-fluorenylmethyloxycarbonyl(Fmoc)chloride,Fmoc-Cl]衍生后测定,内标法定量。结果目标化合物在0.31~20.00μg/L范围内,线性关系良好,相关系数大于0.998(r^(2))。鲜茶叶中春雷霉素的检出限(limit of detection,LOD)、定量限(limit of quantification,LOQ)分别为2.0μg/kg和5.0μg/kg。在LOQ、2×LOQ和10×LOQ水平上加标,平均回收率为95.2%~104.0%,相对标准偏差为7.4%~13.3%。结论基于Fmoc-Cl衍生化的测定法,能有效提高检测的灵敏度、降低基质的干扰;将西马特罗作为内标使用,可以提供更为准确的检测结果,该方法满足鲜茶叶中春雷霉素的监测。

春雷霉素在西瓜中的残留及膳食风险评估

本研究建立了固相萃取结合高效液相色谱-串联质谱(SPE/HPLC-MS/MS)测定西瓜中春雷霉素的痕量检测方法,采用1%甲酸-甲醇提取西瓜样品,用Oasis MCX固相萃取柱净化,以ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离,甲醇-0.2%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,多反应监测(MRM)模式检测。在0.01~1 mg/kg加标范围内,春雷霉素的平均回收率为71.0%~79.0%,相对标准偏差(RSD)为4.7%~4.9%,定量限(LOQ)为0.01 mg/kg。规范田间残留试验结果表明,在施用春雷霉素7 d后,残留中值(STMR)不超过0.01 mg/kg,最高残留值(HR)为0.047 mg/kg。膳食风险评估结果表明,普通人群对春雷霉素的国家估算每日摄入量(NEDI)为0.0703 mg,风险商(RQ)为0.99%,说明其对一般人群产生的膳食风险在可接受范围内。

36%春雷霉素·喹啉铜悬浮剂的配方研制

采用湿法砂磨工艺制备36%春雷霉素·喹啉铜悬浮剂,对其配方中的润湿分散剂、增稠剂、pH调节剂和防冻剂进行了筛选,确定最佳配方为春雷霉素3%、喹啉铜33%、SP-SC3275 4%、润湿分散剂A 3%、润湿分散剂B 1.5%、乙二醇5%、一水柠檬酸1.4%、硅酸镁铝0.5%、黄原胶0.15%、防腐剂S30 0.15%、SAG1522 0.3%、去离子水补至100%。试验结果表明:该产品流动性好、悬浮率高、稳定性好、田间使用效果良好,各项指标符合悬浮剂的要求。

5%大蒜素微乳剂与2%春雷霉素复配对柑橘溃疡病的田间药效试验

[目的]明确植物源农药5%大蒜素微乳剂复配化学农药2%春雷霉素对柑橘溃疡病在田间使用时的减量增效作用,从而指导生产应用。[方法]依照杀菌剂田间药效试验准则进行田间药效试验。[结果] 2%春雷霉素单用对柑橘溃疡病的防效为50.82%,5%大蒜素微乳剂单用可达到2%春雷霉素的防治效果,当两者复配后对柑橘溃疡病防效为81.96%,同时减少2%春雷霉素用量约50%,对柑橘无药害,对环境更加友好。[结论]5%大蒜素微乳剂与2%春雷霉素复配有一定的减量增效作用。

江西省稻瘟病菌对春雷霉素和稻瘟灵的抗药性研究

稻瘟病是水稻生产上潜在威胁最严重的病害,化学防治是目前防治稻瘟病的关键措施之一.采用生长速率法,分别测定2012年从江西省不同稻区分离的40个稻瘟病菌单孢菌株对春雷霉素与稻瘟灵的敏感性.试验结果表明春雷霉素对供试40个稻瘟病菌株的EC50值范围为6.28～333.01 mg/L,其中,敏感菌株有29个,低抗水平菌株有10个,中抗水平菌株有1个；稻瘟灵的EC50值范围为5.63～ 28.96 mg/L,敏感菌株有38个,低抗水平菌株有2个,表明江西省稻瘟病菌株对春雷霉素与稻瘟灵的抗性均表现为较低水平.抗性菌株对春雷霉素与稻瘟灵的抗性分析表明江西省稻瘟病菌对春雷霉素与稻瘟灵未产生交互抗药性或多抗性.

春雷霉素在水稻田水和土壤中的残留及消解动态

采用固相萃取(SPE)和高效液相色谱(HPLC)建立了一种检测水稻田水和土壤中春雷霉素残留的方法。田水样品直接过滤后经阳离子固相萃取(SCX-SPE)柱净化;土壤样品用V(丙酮)∶V(水)=3∶7的混合溶液超声提取后经相同方法净化。以庚烷磺酸钠为离子对试剂,采用离子对反相高效液相色谱法(IP-HPLC)进行检测。方法的线性范围在0.05～5.0 mg/L之间,相关系数(r)为0.999 9。当春雷霉素在田水和土壤中的添加水平分别为0.01～0.5 mg/L和0.01～0.5 mg/kg时,其在田水中的平均回收率在83.8%～92.4%之间,相对标准偏差(RSD)为3.67%～5.21%;土壤中的平均回收率在79.7%～84.5%之间,RSD为4.39%～5.62%。方法的检出限(LOD)在田水和土壤中分别为0.001 mg/L和0.001 mg/kg,定量限(LOQ)分别为0.01 mg/L和0.01 mg/kg。采用所建方法对广东、广西和湖北3地2011年春雷霉素在田水及土壤中的消解动态进行了检测。结果表明:其在水稻田水及土壤中的消解动态曲线均符合一级动力学方程;在田水中消解迅速,半衰期分别为2.88 d(广东)、2.52 d(广西)和2.68 d(湖北);在土壤中的消解速率比水中的慢,半衰期分别为4.12 d(广东)、5.41 d(广西)和4.89 d(湖北),属于易降解农药(t1/2<30 d)。

响应面法优化春雷霉素发酵培养基及培养条件

采用响应面法对春雷霉素发酵培养基成分及培养条件进行了优化。首先应用Plackett-Burman(PB)设计对培养基及培养条件相关因素的显著性进行评价,以春雷霉素效价为响应值,筛选出3个可信度90%以上的因素:黄豆粕粉量、装液量和接种量为重要影响因素。经最陡爬坡实验确定中心点范围后,利用CCD设计及响应面分析,最终确定培养基的最优组合为:黄豆粕粉添加量7.6%、装液量25mL/250mL、接种量18%(V/V)。经优化以后,春日链霉菌发酵产生春雷霉素的效价由原来的2350μg/mL提高到了3670μg/mL,相比优化前效价提高了56.17%。

电动和手动喷雾器水稻田喷雾农药利用率及雾滴分布比较

【目的】比较手动和电动喷雾器在水稻上喷施3种农药的有效利用率及药液雾滴分布效果。【方法】在惠州市惠阳区两个镇和博罗县两个镇开展晚稻农药利用率小区试验,供试药剂为50%吡蚜酮水分散粒剂、5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂和2%春雷霉素水剂,农药药液加入诱惑红示踪剂,采用五点取样法、雾滴卡和分光光度计(501 nm)等方法和仪器。【结果】电动喷雾器喷施吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺和春雷霉素3种药液的农药利用率分别为39.43%、38.03%和38.98%,而手动喷雾器处理的农药利用率分别为29.02%、28.08%和28.50%,电动喷雾器处理比手动喷雾处理分别提高10.41、9.95、10.93个百分点,且电动喷雾器处理的农药利用率均显著高于手动喷雾器处理。雾滴沉积分布试验结果表明:手动和电动喷雾器处理雾滴沉积量在水稻均是自上而下逐渐递减,且水稻不同层间雾滴沉积量差异显著。雾滴粒径分析结果表明:手动喷雾器处理在水稻中层和下层的雾滴粒径均显著大于电动喷雾器处理。雾滴数量分析结果表明:电动喷雾器处理在水稻中层和下层雾滴数量均高于手动喷雾器处理,且下层雾滴数量达到差异显著水平。【结论】电动喷雾器在广东省晚造水稻抽穗期喷施3种药剂的农药利用率均大于38%,比手动喷雾器处理提高9.95~10.41个百分点,且电动喷雾器比手动喷雾器的雾化效果更优。

生物农药和生化复配制剂预防水稻穗颈瘟的效果

为减轻稻瘟病危害的损失,减少化学农药用量、残留和环境污染,确保水稻和粮食生产、农产品质量与贸易和农业生态环境安全,采用测报调查、随机区组设计和统计分析方法,对生物农药井冈·蜡芽菌、生物农药与化学农药复配的春雷·稻瘟灵进行预防穗颈瘟田间药效试验。结果表明:井冈·蜡芽菌的相对防效为78.0%,实际单产为7 702.5kg/hm2,比对照(CK,清水)增产21.3%,增收3349.05元/hm2,在穗颈瘟中等及以下发生区域和轻感稻瘟病品种种植田块可以大力推广,以替代化学农药;春雷·稻瘟灵1 050g/hm2和900g/hm2的相对防效为82.9%和79.9%,与化学农药三环唑的防效(84.6%)接近,实际单产分别为7 959.0kg/hm2和7 902.0kg/hm2,比CK增产25.3%和24.4%,可以大面积推广;化学农药三环唑的实际单产为7 989.0kg/hm2,比CK增产25.8%,最好用于稻瘟病常发、重发和早发区域与高感品种种植田块的穗颈瘟预防;稻瘟灵1 500mL/hm2预防穗颈瘟效果较差,不宜单独使用。三环唑、井冈·蜡芽菌、稻瘟灵和春雷·稻瘟灵处理的实际单产均极显著高于CK。

固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法测定黄瓜及土壤中的春雷霉素残留

建立了测定黄瓜和土壤中春雷霉素残留的固相萃取/高效液相色谱-串联质谱(SPE/HPLC-MS/MS)方法。黄瓜和土壤样品分别经1%甲酸的甲醇、0.5%甲酸水提取后,采用MCX固相萃取柱净化,以Waters Xbridge BEH Amide色谱柱分离,0.2%甲酸水-乙腈溶液进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配标准曲线外标法定量。该方法灵敏、准确、简单快速、重复性好,在2~250μg/L浓度范围内,不同基质中春雷霉素的线性相关系数均大于0.999,检出限为0.002 mg/kg,定量下限为0.008 mg/kg;在0.008、0.040、0.200、0.400 mg/kg 4个加标水平下,春雷霉素在黄瓜和土壤样品中的平均回收率为77.5%~97.0%,相对标准偏差为2.6%~10.7%,能够满足黄瓜及土壤中春雷霉素残留的检测需求。应用该法对田间样品进行检测,结果表明,春雷霉素在黄瓜中的残留量不超过0.053 mg/kg,小于我国规定的黄瓜中最大残留限量(0.2 mg/kg);土壤中春雷霉素的残留量不超过0.013 mg/kg。

春雷霉素与叶枯唑对黄瓜细菌性角斑病菌的联合毒力

为明确春雷霉素(Kasugamycin)与叶枯唑(Bismerthiazol)混配对黄瓜细菌性角斑病菌(Pseudomonas syringe pv.lachrymanas)的增效作用及最佳配比,采用浑浊度法测定了春雷霉素与叶枯唑混配对黄瓜细菌性角斑病菌的毒力。结果表明:春雷霉素、叶枯唑对黄瓜细菌性角斑病菌的EC50分别为8.739、39.227mg·L-1,春雷霉素对黄瓜细菌性角斑病菌的室内生物活性明显高于叶枯唑;春雷霉素与叶枯唑混配对黄瓜细菌性角斑病菌表现为增效作用,5个配比中,1∶5配比的SR为1.71,增效作用最明显。

17种杀菌剂对桃细菌性穿孔病的抑菌作用

采用抑菌圈法测定17种杀菌剂对桃细菌性穿孔病菌的毒力,结果表明:链霉素和春雷霉素的毒力最高,其EC50分别为27.5193g/L和17.2010g/L;链霉素和春雷霉素对桃细菌性穿孔病菌的联合毒力测定,两药以6∶1混配,具有增效作用;抑菌谱试验发现该混剂对6种病原菌也有很好的抑制作用。

亲水作用液相色谱串联质谱法测定糙米中春雷霉素残留量

建立了糙米中春雷霉素残留量的亲水作用色谱–质谱联用测定方法。样品用甲醇+水(体积比为9∶1)提取,经HLB和SCX固相萃取小柱净化,以HWaters HPLC BEH HILIC色谱柱H(50mm×2.1 mm,1.7 m)分离,采用UPLC–MS/MS多反应监测(MRM)正离子模式测定,外标法定量。春雷霉素最低检测浓度为0.005 mg/kg,在0.005,0.050,0.100 mg/kg 3个添加水平下,平均回收率为74.9%～82.7%,相对标准偏差为4.9%～6.9%。

超高效液相色谱-串联质谱法测定桃中春雷霉素残留量

建立了利用超高效液相色谱-串联质谱测定桃中春雷霉素残留量的分析方法。样品经1.0%甲酸-甲醇提取,氯化钠盐析后,取1.0 mL提取液,经Waters ACQUITY UPLC BEH Amide Column分离,乙腈∶0.2%甲酸水为60∶40(V/V)作为流动相进行等度洗脱,经电喷雾离子源正离子化,多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明,春雷霉素在10~1000μg/kg的范围内线性关系良好,相关系数为0.999;10、100、200μg/kg等3个添加水平的平均添加回收率分别为86.2%、91.0%、89.5%,相对标准偏差RSD(n=7)分别为2.2%、3.7%、4.5%,方法检出限为3.0μg/kg,定量限为10.0μg/kg。该方法快速、简便、准确,可满足桃中春雷霉素的残留检测要求,为春雷霉素的科学使用以及在食品中的残留分析和风险评估提供重要依据。

高效液相色谱法同时分析7%春雷霉素·噻霉酮可湿性粉剂

建立用高效液相色谱法同时测定商品中春雷霉素和噻霉酮含量的方法。通过反相色谱对样品进行分离,外标法进行定量。结果表明,春雷霉素和噻霉酮5次平行测定的标准偏差分别为0.8%和2.9%,回收率分别为98.0%~101.8%和98.9%~102.6%。该方法具有快速、简便、灵敏、准确等优点,可用于复配可湿性粉剂中春雷霉素、噻霉酮有效成分的同时检测。

分泌抗春雷霉素单克隆杂交瘤细胞株的建立及免疫学特性鉴定

【目的】制备高灵敏、高特异性的抗春雷霉素单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】采用EDC法将KSM分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫原KSM-BSA和包被原KSM-OVA,经SDS-PAGE鉴定后,免疫Balb/c小鼠,免疫间隔4周,4次免疫后,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗KSM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗KSM的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。【结果】SDS-PAGE鉴定结果显示KSM-BSA成功偶联,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠血清效价均达1:104以上,其中3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为73.9ng.mL-1,融合后筛选出两株杂交瘤细胞株1G7和2C8,亚型均为IgG1型,其细胞上清效价分别为1:5.12×103和1:1.28×103,腹水效价分别为1:5.12×105和1:2.56×105,抗KSM的单克隆抗体对春雷霉素的IC50为8.902ng.mL-1,与其它竞争物的交叉率均小于0.03%。【结论】本试验成功合成了春雷霉素人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体,为春雷霉素免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。

春雷霉素在水稻上的残留与消解动态研究

为了评价春雷霉素在水稻上使用的安全性,建立其使用规范,2010-2011年在河南、黑龙江和江苏3地进行了10%春雷霉素可湿性粉剂在水稻上的消解动态和最终残留试验。消解动态试验结果表明：春雷霉素在水稻田水和植株中的半衰期分别为0.97-2.70 d和1.00-2.18 d。最终残留试验表明：10%春雷霉素可湿性粉剂按推荐剂量（40 g/hm2）和1.5倍推荐剂量（60 g/hm2）在病害发生期施药3-4次,末次施药后14,21,28 d,春雷霉素在糙米中残留量≤0.022 mg/kg,稻壳中≤0.269 mg/kg,植株中≤0.159 mg/kg,土壤中≤0.005 mg/kg。

固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法测定烟叶中春雷霉素残留量

建立了固相萃取/高效液相色谱-串联质谱(SPE/HPLC-MS/MS)测定烟叶中春雷霉素残留量的分析方法。样品经0.1%甲酸的甲醇水溶液(7∶3,v/v)超声提取后,采用混合型阳离子(PCX)小柱净化,以Kinetex PFP色谱柱分离,采用UPLC-MS/MS多反应监测(MRM)正离子模式测定,外标法定量。春雷霉素在烟叶中的最低检测浓度为0.05 mg·kg^-1,在0.05、0.50、2.00 mg·kg^-13个添加水平下,平均回收率为78%~87%,相对标准偏差为3%~8%。

超高效液相色谱串联质谱法测定水中春雷霉素的含量

建立了水中春雷霉素含量的超高效液相色谱质谱联用测定方法。样品用SCX固相萃取小柱净化，以HPLCBEHHILIC色谱柱（2．1×50mm，1．7μm）分离，采用UPLC—MS／MS多反应监测（MRM）正离子模式测定，外标法定量。春雷霉素检出限为0．01mg／kg。在0．01、0．05、0．1mg／kg3个浓度添加水平，回收率为86．4％-93．9％，相对标准偏差N2．5％～4．8％（n=5）。

春雷霉素WP和常规农药防治粳稻主要病害的比较研究

为了进行春雷霉素WP和常规化学农药在防治粳稻主要病害的比较研究,在水稻不同生育期分别施用春雷霉素WP和常规化学农药,进而研究春雷霉素WP和常规化学农药防治粳稻主要病害的效果。结果表明,2%春雷霉素WP在稻瘟病和稻曲病的防效均高于其他药剂,在纹枯病的防效低于拿敌稳75%WG和300g/L爱苗EC。施用药剂小区的产量比较中,2%春雷霉素WP略低于拿敌稳75%WG和300g/L爱苗EC。春雷霉素WP在粳稻各病害的防效上不亚于常规化学农药,由于春雷霉素WP对环境及人畜危害较低,具有很高的利用价值。