人增殖抑制基因(HSG)对肿瘤细胞系化疗敏感性的作用

目的:将人增殖抑制基因 (hHSG)用电子穿孔的转基因方式转染到体外培养的人肿瘤细胞系中,观察hHSG基因对内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系的化疗敏感性的影响。方法:首先用免疫组化方法检测不同组织来源的肿瘤细胞系中hHSG的表达水平,然后选择内源性hHSG表达水平较低的肺腺癌 (A549 )和内源性hHSG表达水平较高的宫颈癌(HeLaS3)细胞系,用电穿孔方法转染含有hHSG的真核表达载体 (pEGFP hHSG) 24h后,加入放线菌酮(CHX),采用细胞计数、MTT法观察hHSG对肿瘤细胞增殖抑制作用及对CHX的化疗敏感性的影响。结果:hHSG在不同组织来源的肿瘤细胞系都有不同程度的表达, pEGFP hHSG转染到两种内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系后,这两种肿瘤细胞的生长增殖都明显受到抑制,同时外源性的hHSG也增强了这些肿瘤细胞系对CHX的敏感性。结论:外源性hHSG可不依赖其内源性表达水平而抑制肿瘤细胞的增殖,与CHX并用可增强肿瘤细胞对CHX的敏感性,具有协同作用。

吉西他滨区域性动脉灌注联合全身化疗治疗晚期胰腺癌

目的评价吉西他滨区域性动脉灌注联合全身化疗对晚期胰腺癌的治疗效果。方法对13例经手术病理或临床证实的晚期胰腺癌患者采用5-FU+MMC行静脉化疗,以介入方法用吉西他滨作区域性动脉灌注化疗。结果13例可评价疗效者中部分缓解(PR)4例,病情进展(SD)6例,PD3例;临床受益反应评价有效率为76.9%;疼痛缓解率75.0%。中位生存时间为6.3个月,所有患者未出现严重毒副反应。结论吉西他滨区域性动脉灌注联合全身化疗可缓解晚期胰腺癌患者癌性疼痛,改善患者一般状态,提高生存质量,延长生存期,且患者耐受良好。

晚期乳腺癌术前局部灌注化疗的疗效观察

目的 探讨术前动脉灌注化疗对晚期乳腺癌临床治疗效果及病理特征的影响。方法 回顾性分析 5 2例晚期乳腺癌患者的临床资料 ,其中 2 2例术前行动脉内灌注化疗 (治疗组 ) ,3 0例术前未行动脉内灌注化疗 (对照组 )。结果 治疗组灌注化疗后 ,症状减轻 ,肿瘤缩小 ,有效率 (CR +PR )为 86.4%。术后病理检查均发现癌细胞核固缩、碎裂 ,胞浆凝固、坏死 ;细胞间质水肿、炎性细胞浸润、纤维组织增生 ;血管出现内膜增生 ,血栓形成。对照组癌细胞改变不明显。随访时间 2～ 7年。局部复发率治疗组 13 .6% ,对照组 3 3 .3 % (P <0 .0 1)。治疗组 5年生存率 5 9.1% ,对照组 2 6.7%(P <0 .0 5 )。结论 晚期乳腺癌术前动脉灌注化疗可以缩小肿瘤 ,降低肿瘤分期 ,改变癌细胞的组织学形态 ,提高生存率。

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究和临床研究

目的 观察5 -氟尿嘧啶( 5 FU)缓释剂对荷胰腺癌裸鼠肿瘤细胞及胰腺癌患者血清肿瘤标记物和细胞免疫的影响。方法 ( 1 ) 5 FU缓释剂的体外释放实验和体外抑瘤实验:测定浸出液药物的浓度,计算释放量;检测其浸出液对人胰腺癌细胞株PC3的抑制作用。( 2 )将荷胰腺癌细胞株PC3裸鼠6 0只,随机分成静脉对照组(A组)、5 FU静注组(B组)、基质植入组(C组)、大剂量5 FU缓释剂植入组(D组)和小剂量5 FU缓释剂植入组(E组)。治疗前及治疗后1 4 d测肿瘤大小。治疗2周后观察肿瘤组织学变化。免疫组化法测定bcl 2和Bax的蛋白表达水平;TUNEL法检测凋亡指数(AI)。( 3 )手术探查不能切除之胰腺癌6 9例随机分成3组。将5 FU缓释剂瘤内植入治疗组(治疗组)、术后行5 FU静脉化疗组(化疗组)和对照组。分别于术前1d和术后第1 4天采血,测定各组血清中NK细胞,T细胞亚群和CEA,CA5 0,CA1 9 9,CA1 2 5,CA2 4 2血清肿瘤标记物水平。结果 ( 1 ) 5 mg5 FU缓释剂第1天释放量最大,为0. 8 5 mg,第3天为0. 4 5 mg,其后在0. 2 5 mg水平维持稳定的缓慢释放;释放时间长达1 4 d以上。( 2 ) 5 FU缓释剂第1天的浸出液对人胰腺癌细胞株PC 3的抑制率达6 0. 2 7% ,第3天为3 4. 2 5% ,以后稳定在2 5. 0 0%左右。5 FU缓释剂瘤内注射治疗组裸鼠移植瘤生长速?

细胞因子诱导的杀伤细胞降低乳腺癌耐药细胞系对阿霉素的耐受效应

目的 :探讨细胞因子诱导的杀伤细胞 (cytokine inducedkiller,CIK)与化疗药物对多药耐药 (multidrugre sistance,MDR)肿瘤细胞产生协同杀伤效应的机制。方法 :用细胞培养法加细胞因子在体外诱导并扩增CIK细胞 ,应用MTT法测定CIK细胞、阿霉素及二者联合对靶细胞的杀伤活性 ,用流式细胞术检测靶细胞上P糖蛋白 (P gp)的表达和细胞内药物积累 ,用细胞免疫组化方法检测P gp在MDR靶细胞MCF7adr内的分布。结果 :CIK细胞可使MCF7adr细胞P gp的表达活性下降 82 .5 % ,耐药靶细胞内阿霉素积累增加 3.2倍 ,使联合杀伤率比单纯加阿霉素(同等剂量 )组增加 7.8倍 ,比单纯加CIK细胞 (相同效靶比 )组增加 1.3倍。结论 :CIK细胞可明显抑制MCF7adr肿瘤细胞系的P gp表达 ,可协同阿霉素提高对MCF7adr肿瘤细胞系的杀伤活性。

抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定。结果 :成功构建抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,并实现其真核表达。初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力。结论 :构建的抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想。

温热灌洗化疗及动脉插管化疗在胃肠道肿瘤中的应用

目的 探讨胃肠道癌手术切除后腹腔及肝转移的防治方法。方法 将 2 82例胃肠道癌切除术后患者分成术中腹腔温热低渗灌洗化疗加术后动脉灌注化疗组 1 69例 (治疗组 )和单纯术后静脉化疗组 1 1 3例 (对照组 ) ,对比两组局部复发率、肝转移率及 3年生存率。结果 治疗组腹腔转移率、肝脏转移率、和 3年生存率依次为 2 1 .9% ,1 2 .4 %和 74.6 % ;对照组依次为 46 .0 % ,2 7.4 %和 46 .8%(均P <0 .0 5)。结论 术中温热低渗灌洗化疗及术后动脉灌注化疗对进展期胃肠道肿瘤术后腹腔复发和肝转移有良好的防治作用。

人绒毛膜癌甲氨蝶呤耐药细胞株的建立及其特性的研究

目的 :建立耐甲氨蝶呤 (MTX)的人绒毛膜癌细胞株 ,并检测其生物学特性。方法 :采用剂量递增间歇诱导的方法 ,对人绒毛膜癌细胞株 JAR进行长期诱导培养 ,建立耐药细胞株 JAR/ MTX。比较两种细胞倍增时间、绒毛膜促性腺激素 (HCG)分泌量、对 MTX和一些常用化疗药的敏感性 ,P-糖蛋白、谷胱甘肽 S转移酶、核增殖抗原的表达 ,以及细胞自发和 MTX诱导调亡率。结果 :历时 1年建成 JAR/ MTX细胞株 ,耐药性稳定 ,耐药指数 7.3,对紫杉醇、长春新碱有交叉耐药。 JAR/ MTX细胞增殖缓慢 ,核增殖抗原表达低于 JAR细胞 (3.0 9± 0 .4 2 vs 3.72±0 .35 ,P<0 .0 5 )。谷胱甘肽 S转移酶表达高于 JAR,P-糖蛋白的表达两者无差异。 HCG分泌高于 JAR细胞 ,培养4 8h后每 10 5个细胞分泌 HCG分别为 (95 .7± 5 .4 vs 4 1.3± 2 .8) m IU(P<0 .0 1)。 JAR/ MTX细胞的自发凋亡及MTX诱导的凋亡均明显少于其母系 JAR细胞 (P<0 .0 5 )。结论 :JAR/ MTX细胞对 MTX耐药性稳定 ,具有独特的细胞形态、染色体核型、增殖与凋亡等特征 ,为进一步研究绒癌的耐药机制提供了理想的细胞模型。

反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的探讨反义HIF-1α基因对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7 7 2 1建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。待肿瘤生长至直径约0.4cm时,将荷瘤裸鼠随机分为3组,分别注射生理盐水、质粒PcDNA 3和HIF-1α/PcDNA 3 B,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线;取肿瘤标本作免疫组织化学检查(SABC法)及蛋白质印迹检查,检测各组肿瘤的VEGF和HIF-1α表达及微血管密度(MVD)和细胞凋亡。结果HIF-1α/PcDNA 3 B治疗组各时点的肿瘤体积,以及肿瘤组织中HIF-1α蛋白、MVD,VEGF表达均低于对照组,而细胞凋亡指数高于对照组,差异均有显著性(P<0.0 5)。结论通过阻断癌细胞的缺氧适应途径,反义HIF-1α基因治疗肝癌有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤血管生成及诱导细胞凋亡的作用。

联合应用华蟾素与氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的探讨单一华蟾素体外对人胃癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用以及与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对胃癌细胞的影响。方法实验分为对照组;华蟾素(cino)组;5-FU组和cino+5-FU组。利用体外细胞培养、倒置显微镜和荧光显微镜、MTT比色技术及流式细胞仪等方法,观察细胞形态,检测cino和5-FU对人胃癌细胞株BGC823细胞抑制率、细胞凋亡和细胞周期。结果cino对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性。cino+5-FU对BGC-823细胞的增殖抑制率显著高于单独使用组(P<0.05)。定量分析显示cino+5-FU组的凋亡细胞发生率显著高于cino组和5-FU组(P<0.05)。cino+5-FU可使G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,且大多数被阻滞于S期。结论cino对胃癌BGC-823细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,与5-FU联用可显著提高后者的化疗效果,且呈时间剂量依赖关系。

宫颈癌新辅助化疗的临床病理观察

目的 :评价宫颈癌新辅助化疗的临床和组织学疗效。方法 :对 3 1例肿块直径≥ 4cm的 IB- B 期宫颈癌患者给予以顺铂为基础的新辅助化疗和手术治疗 ,观察其临床疗效 ,并对其中 2 8例化疗后组织学变化进行分析。结果 :3 1例化疗后临床完全缓解 7例 ,部分缓解 1 4例 ,总有效率为67.7% (2 1 / 3 1 ) ;盆腔淋巴结转移 1 0例 ,转移率 3 2 .3 % (1 0 / 3 1 )。组织学观察发现 ,2 8例患者化疗后宫颈癌原发灶内组织学变化达 、 者 1 3例 ,组织学有效率 46.4%。盆腔淋巴结转移灶内组织学变化达 、 者 5例 ,组织学有效率 5 0 .0 %。化疗后宫颈癌患者原发灶内癌周纤维结缔组织增生与化疗前相比有非常显著的差异 (P<0 .0 0 5 ) ,癌周间质细胞反应与化疗前相比也有显著差异 (P<0 .0 5 )。结论 :新辅助化疗近期临床疗效良好 ,对宫颈癌原发灶和转移灶均有一定的组织学疗效。

奥曲肽对胰腺癌细胞转染SST 2后的作用

目的 将生长抑素二型受体 (somatostatinreceptortype 2 ,SST 2 )基因转染至胰腺癌细胞株PC 3细胞 ,探索奥曲肽对阳性表达SST 2的PC 3细胞凋亡影响。方法 采用脂质体 (Liposome)将SST 2基因转染至PC 3细胞 ,免疫组织化学染色检测其转染效果。MTT比色法及流式细胞术检测不同浓度梯度奥曲肽对PC 3细胞转染SST 2基因前后凋亡的影响。结果 胰腺癌细胞转染SST 2后 ,不同浓度奥曲肽 (0 .2 ,0 .4,0 .8μg/ml)杀伤已转染SST 2的PC 3细胞的能力较杀伤未转染SST 2的PC 3细胞的能力均有明显增强 (均P <0 .0 5 )。结论 生长抑素用于治疗PC 3细胞效果不佳可能与SST 2下调有关 ,转染SST 2后可增加奥曲肽对PC 3细胞的杀伤能力 ,这为临床利用SST 2基因转染加生长抑素类似物治疗胰腺癌提供了实验基础。

胃癌手术后局部灌注化疗预防局部复发和肝转移的临床研究

目的探讨胃癌术后局部灌注化疗预防局部复发和肝转移的价值.方法将收治的352例胃癌术前随机分为两组,治疗组术后行局部动脉灌注化疗(184例);对照组术后行全身静脉化疗(168例),对两组的疗效进行比较.结果随访时间3～6年,随访328例,失访24例,随访率93.2%.治疗组1,3,5年生存率分别为95.7%,78.3%, 46.3%;对照组是86.8%,48.2%,21.4%.局部复发率和肝转移率治疗组为9.2%,12.5%,对照组为22.0%,26.8%.两组上述各项指标差异均有显著意义(均P<0.01).结论局部灌注化疗是胃癌术后预防局部复发和肝转移的一种有效方法,其疗效明显优于术后全身静脉化疗,且毒副作用小.

硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的建立及其差异表达蛋白的飞行时间质谱分析

目的:建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株,探讨硼替佐米敏感和耐药多发性骨髓瘤细胞株在蛋白质组水平上的差异。方法:采用硼替佐米浓度递增法诱导NCI-H929细胞株产生耐药株。采用流式细胞术比较亲本NCI-H929和NCI-H929B的细胞周期,双向电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析两者间的差异蛋白表达情况。采用Westernblot方法对部分鉴定结果进行验证。结果:采用浓度递增法自骨髓瘤细胞系NCI-H929建立了硼替佐米耐药株NCI-H929B。MTT法检测硼替佐米对亲本NCI-H929和NCI-H929B 24 h的IC50,其分别为20.7 nmol/L和487.4 nmol/L,耐药倍数为23.5。生长曲线及流式细胞术分析显示NCI-H929亲本和NCI-H929B的生长曲线和细胞周期分布无显著性差异。与亲本NCI-H929细胞的2-DE相比,NCI-H929B细胞中有11个蛋白点表达明显上调,6个明显下调。对这17个蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了17个肽质量指纹图谱(PMF)。将PMF质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出14种蛋白质。Western blot验证其中一种蛋白质(蛋白DJ-1),结果与双向电泳鉴定结果基本一致。结论:通过浓度递增法可建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株。双向电泳结果提示这些差异表达的蛋白质可能与多发性骨髓瘤对硼替佐米耐药的机制有关。

槐耳清膏治疗肝癌的实验研究

目的 探讨槐耳清膏对人胎脐静脉内皮细胞的作用 ,以及其对裸鼠皮下接种肝癌细胞形成肝癌的抑制作用及其可能机制。方法 用不同浓度的槐耳清膏作用于人胎脐静脉血管内皮细胞 ,观察其对细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成的影响 ,同时观察其对裸鼠皮下接种肝癌细胞形成肝癌过程的影响。结果 槐耳清膏≥ 2mg/ml时可显著降低肿瘤组织的血管内皮细胞增殖能力 ,减少血管形成 ,抑制血管内皮细胞的迁移、黏附 ,从而降低微血管密度。槐耳清膏 ( 3g/kg) +MMC( 5 0 0 μg/kg)同时作用于裸鼠的肝癌组织 ,其抑瘤作用最强 ,后依次为MMC组 ,槐耳清膏 ( 3g/kg)组。结论 槐耳清膏对肝癌有抑制作用 ,其可能机制是作用于血管内皮细胞 ,影响血管内皮细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成 ,从而抑制肝癌组织的血管生成 。

进展期胃癌新辅助化疗效果的临床观察

目的评估新辅助化疗对进展期胃癌的治疗效果。方法选取48例进展期胃癌(IIIb和IV期)患者,术前行氟尿嘧啶+甲酰四氢叶酸钙+乐沙定化疗,采用双周疗法;经2～3个疗程后,行CT,超声内镜复查,分期。对可切除者行手术治疗。结果新辅助化疗总有效率为58.4%;其中IIIb期为64.1%,IV期为22.2%。39例III期患者中,手术根治率达71.8%。9例IV期患者中,2例行姑息手术切除,1例行探腹术。结论新辅助化疗可有效提高IIIb期胃癌患者的手术根治率,而对IV期患者疗效不显著。

奥沙利铂与5-FU同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌

目的回顾性分析奥沙利铂与5-FU同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌的治疗结果,探讨局部晚期胰腺癌的治疗策略。方法对局部晚期胰腺癌56例,予以三维适形放疗同步配合5-FU＋奥沙利铂化疗,放疗剂量为56-60 Gy/28-30次/38-50天,5-FU 250 mg/（m2.d-1）持续静脉给药直至放疗结束,奥沙利铂40-50 mg/m^2,第1、8、15、22、29天。用Kaplan-Meier法估算患者的生存率。结果（1）全组患者中位无进展生存时间及总生存时间分别为5.1月及15.2月,无进展生存率（PFS）、总生存率（OS）分别为1年：42.8%、64.3%,2年：14.7%、21.6%。（2）完全缓解（CR）2例（3.6%）,部分缓解（PR）25例（44.6%）,有效率（RR=CR＋PR）为48.2%。（3）总的临床获益率（CBR）为66.1%,其中92.5%（37/40）疼痛减轻,73.2%（41/56）Karnofsky评分提高,14.3%（8/56）体重增加。（4）急性毒副反应主要为1~2级的骨髓抑制、消化道反应和感觉性神经炎,3级毒副反应只见于中性粒细胞下降（5.4%）和恶心呕吐（19.6%）,未发现4级毒副反应。未发现消化道出血、梗阻和放射性肝炎等远期并发症。（5）死亡的首位原因为远处转移,占59.6%（28/47）。结论（1）奥沙利铂与5-FU同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌疗效较好,且安全可行,是个很有前途的治疗方案。（2）由于死亡的首位原因为远处转移,放化疗前予以诱导化疗可能会提高局部晚期胰腺癌的生存期。

三氧化二砷与阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中survivin表达的影响

目的探讨三氧化二砷与阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的可能机制。方法用不同浓度的As2O3或/和ADM干预人肝癌细胞株HepG2不同时间,以免疫细胞化学和RTPCR方法检测HepG2细胞中survivin表达的改变。结果(1)未加药物干预之前,HepG2细胞中可见survivin强烈表达;(2)不同浓度的As2O3或ADM均可降低HepG2细胞survivin表达程度,并且随药物浓度的增加或作用时相的延长,降低程度更明显;浓度与时相之间存在交互作用;(3)ADM降低HepG2细胞survivin表达的作用比As2O3更明显,两者联用后,作用进一步增强。结论(1)单用As2O3或ADM均可降低HepG2细胞中survivin表达,并呈浓度和时间依赖性;(2)相同浓度下,ADM对HepG2细胞中survivin表达的减弱作用较As2O3更强,但两者的联用较单用者能更显著降低survivin表达;(3)As2O3和ADM可能通过下调survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡,从而发挥其抗癌作用;两者联用有叠加抗癌作用,从而可降低各自的临床使用剂量。

磁靶纳米化疗药物治疗胆管癌移植瘤的对比研究

目的比较纳米磁靶向性药囊与其他化疗药物治疗裸鼠人胆管癌移植瘤的效果并探讨其机制。方法以在体外培养的人胆管癌细胞QBC939接种裸鼠。20d后将裸鼠随机分为4组(每组8只)生理盐水对照组(A组),5-FU治疗组(B组),纳米磁靶向性药囊+内磁化支架治疗组(C组),健择治疗组(D组)。记录各组各时段肿瘤体积变化和抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线。于治疗后35d处死裸鼠,取肿瘤组织观察超微结构改变。结果A,B,C,D组于治疗后35d肿瘤体积分别为(2256.1±267.1)mm3,(2096.5±237.9)mm3,(1392.2±189)mm3,(1534.9±115)mm3,其中C,D组与A,B组之间的肿瘤体积比较有明显差异(P<0.05)。B,C,D组抑瘤率为7.4%,39.6%和33%。电境观察C组和D组均有凋亡细胞出现。结论同等剂量下,纳米磁靶向性药囊治疗效果优于5-FU,但与健择无明显差异。

小剂量米非司酮治疗子宫肌瘤

目的：了解小剂量米非司酮治疗子宫肌瘤的效果和安全性。方法：有症状的子宫肌瘤患者２８例，口服米非司酮每日１０ｍｇ，连续３个月；治疗期间每月用Ｂ超测量子宫和肌瘤体积，并测血红蛋白、肝肾功能及询问一般情况。结果：治疗后所有病人均闭经，腹痛消失，肌瘤体积缩小４２．６％，贫血均得以纠正，病人一般情况明显好转，无明显副作用。结论：每日１０ｍｇ剂量米非司酮治疗子宫肌瘤是一种安全、有效的方法，适用于手术前和围绝经期子宫肌瘤患者。