吉林地区朝、满、汉3个民族KIR基因的分布频率研究

目的通过分析吉林地区汉族、满族及朝鲜族的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的频率与多态性,为探究KIR基因与疾病关联提供基础数据支持。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对吉林地区129名满族、198名朝鲜族及201名汉族人群的KIR基因进行分型。结果KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DP1及KIR2DL4在所有检测对象中均为100%检出。KIR2DL1、KIR2DL3、KIR2DS4、KIR3DL1及KIR2DP1等基因在这3个民族中的检出频率较高,介于93%~98%之间。相比之下,KIR2DL2、KIR2DL5、KIR3DS1、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3及KIR2DS5的检出率较低,分布在13%~45%。特别是满族KIR2DL5(17.83%)与KIR2DS1(17.83%)的基因检出频率显著低于吉林地区朝鲜族(42.93%、47.47%)和汉族(33.83%、33.33%);吉林地区朝鲜族KIR2DL5(42.93%)与KIR2DS1(47.47%)的检出频率显著高于汉族(33.83%、33.33%)和满族(17.83%、17.83%);吉林地区汉族单体型KIRAA的频率在吉林3个受检民族中是最高的为61.19%,显著高于朝鲜族(42.93%),以上各组差异比较P<0.05,经Bonferroni校正后,Pc<0.05。结论吉林地区的朝鲜族、满族与汉族在KIR基因分布方面既体现了中国人群KIR基因多态性,又各自展示了独特的民族遗传特性和地域性。

应用Q-PCR定性检测KIR基因有无方法的建立

目的建立定性检测KIR基因有无的Q-PCR方法。方法根据高分辨水平中国人群KIR等位基因的多态性,并参考国际IPD-KIR数据库,针对16种KIR基因及2DS4-Normal、2DS4-Deleted两种亚型,设计KIR基因特异性引物用于Q-PCR扩增反应;同时设置一孔阴性对照、一孔阳性对照(特异性扩增人体生长激素HGH基因片段),以监控假阳性、假阴性的结果。为验证Q-PCR方法的可靠性,随机选择302份已采用KIR PCR-SSP商品化试剂盒检测的标本,采用Q-PCR方法盲检和对比。结果300人份的Q-PCR检测结果与已知的PCR-SSP检测结果相符,有2份标本结果不一致,其中1例标本的2DS5基因Q-PCR检测结果为阴性,而PCR-SSP检测结果为阳性;另一例标本2DS1基因Q-PCR检测结果为阳性,而PCR-SSP检测结果为阴性。对2份标本分别进行2DS5、2DS1基因测序分型,证实Q-PCR定性检测结果正确。结论本文建立的KIR Q-PCR方法结果准确、可靠,可用于KIR基因有无的定性检测。

NK细胞表面免疫球蛋白受体KIR基因的分析

目的为了探讨人类自然杀伤(NK)细胞的自然杀伤作用机制。方法采用PCR-SSP技术,调查和分析67例国人的KIR基因型和组合型频率。结果在表达出16个KIR基因中,87.5%的KIR基因的频率>0.35;由14个KIR功能基因组成的KIR基因组合型25个,其中仅KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373,而其余频率均≤0.09。比较本文、日本人群、韩国人群和高加索人群中已报道的56个KIR基因组合型,4个民族和地区间基因组合型共享率为8.93%;本文、韩国人群和高加索人群间为5.36%;本文和高加索人群间为1.79%;28.58%为本文首先报道的基因组合型。结论本文证实单个KIR基因多态性有较高的分布频率;在25个KIR基因组合型中,仅有以传导抑制信号为主的组合型KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率达到0.373(4%),远低于87.5%的单个KIR基因的频率。但是,KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布频率在四个民族和地区人群中均列第一,提示KIR基因组合型以抑制性信号通路为主是一种常态,使自身细胞不会遭受自然杀伤。研究为可能探讨改变肾移植术通过KIR基因调节NK自然杀伤作用活性的增强或抑制功能,改变终生使用免疫抑制药物的相关研究提供可利用的数据。

山东地区汉族人群KIR基因多态性分析

目的分析山东地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性及基因型和单倍型多态性,为进一步研究KIRs与疾病的关系奠定基础。方法采用序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)对412例山东地区无血缘关系的汉族健康志愿者进行KIR基因频率检测及基因型和单倍型分析。结果①KIR基因频率:可检测到目前已知的18种KIR基因;所有个体均检测到3个框架基因(2DL43、DL2、3DL3)以及KIRZ,其基因频率均为100%。3DP12、DL3、2DL1、3DL1和2DS4基因较为常见,频率分别为99.03%、98.79%、98.79%、98.79%、96.84%;而2DL2、2DS23、DP1v基因频率较低。②KIR基因型频率:共检出基因型28种,以AJ(2,2)、AF(1,2)型最常见,其次为AH(5,2)、G(4,5)、AI(1,5);另外有11种基因型在白人中尚未见报道。③KIR基因单倍型频率:共检出单倍型16种,最常见的是单倍型2,频率为46.36%;其次为单倍型1,频率为25.61%。结论山东地区汉族人群有其独特的KIRs基因频率、基因型频率和单倍型频率分布;本研究可为进一步研究KIRs与疾病的相关性提供依据。

Real-time PCR分型法检测苏南地区汉族人群KIR基因多态性

目的利用SYBR Green I Real-time PCR分型方法检测杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-likereceptor,KIR)基因,探讨苏南地区汉族人群KIR基因的分布特点。方法应用SYBR Green I Real-time PCR法对191名苏南地区汉族非亲缘健康人群进行KIR基因分型。结果 SYBR Green I Real-time PCR法有效地进行了KIR基因分型。已知的16种KIR基因在苏南地区汉族人群均被检出。框架基因2DL4、3DL2、3DL3和假基因3DP1存在于所有受检个体中。最常见的非框架基因为2DL1、2DL3、3DL1、2DS4以及假基因2DP1。共检出33种KIR基因型,最常见的为AA1(39.27%),其次为BX2、BX4和BX8。发现仅在新加坡华人报道的罕见基因型BX331和BX337,及仅在墨西哥人群罕见的基因型BX427。结论苏南汉族人群中检测出已知的16种KIR基因,共发现33种基因型,最常见的为AA1,并见到3个罕见基因型BX331、BX337和BX427。

新疆地区哈萨克族人群KIR基因多态性及单体型研究

目的分析新疆地区哈萨克族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性及基因型和单体型特点。方法采用序列特异性引物PCR方法(PCR-SSP),对随机选取新疆哈萨克族志愿者99(人)份标本做KIR基因检测,采用标准方法做基因型和单体型分析。结果 1)共检测出已知的16个KIR基因,其中KIR 3DL3、2DL4、3DP1、3DL2基因存在于所有个体,其基因频率为100%(99/99);2DL1、2DP1基因较为常见,基因频率为97.98%(97/99)、96.97%(96/99);2DS4、2DL3、3DL1基因频率为90.91%(90/99)、90.91%(90/99)、89.90%(89/99);3DS1基因频率最低为23.23%(23/99)。2)共检出23种基因型,其中以AF(1,2)最常见,频率为43.43%(43/99);发现有5种基因型共5例按Hsu的方法无法判定基因型别,其基因频率较低均为1.01%(1/99);比对分析发现:AB(3,13)和V(16,17)基因型各2例共4例在国内文献已研究的其他民族人群中未见报道,其频率为3.03%(3/99)和1.01%(1/99);U(17,21)型1例,在汉族人群中未见报道,仅见维吾尔族人群有2例报道。3)共检出14种单体型,最常见单体型占32.50%(61/188),其次是单体型1(n=59),占31.4%(59/188);而未检出的单体型有7、10、11、12、18、19、20、22、23;另有5例标本无法按标准方法分析出单体型,或提示存在新的单体型。结论新疆地区哈萨克族人群KIR基因多态性具有不同种族人群间的共同特性,又具有其自身独特的基因型及单体型分布特征。

慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+ T细胞的KIR3DL1表达的探讨

目的:检测慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T细胞的KIR3DL1表达情况。方法::采用流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T细胞的KIR3DL1分子表达,并与正常对照组比较。结果:慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T细胞的KIR3DL1分子表达明显高于对照组。结论:慢性乙型肝炎患者CD8+T细胞的KIR3DL1表达显著增加。

供者KIR基因型B／X对无关HLA全相合造血干细胞移植的影响

目的分析NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）B／X基因型对无关供者HLA全相合造血干细胞移植患者预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP．PCR）和序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应（SSOP-PCR）的方法，对52对HLA全相合供．受者进行KIR与HLA分型．患者中急性淋巴细胞白血病（ALL）22例，急性髓系自血病（AML）13例，慢性粒细胞白血病（CML）15例，骨髓增生异常综合征（MDS）l例，急性杂合型白血病（HAL）l例。结果①28例供者KIR基因型为B／X，24例供者KIR基因型为A／A。②KIR基因型B／X组患者移植后中性粒细胞和血小板的重建时间与A／A基因型组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；两者的Ⅲ^。-Ⅳ^。急性GVHD（10．7％VS20．8％，P=-0．266）和慢性GVHD（53．6％Vs29．2％，P=0．067）之间的差异无统计学意义。B／X基因型组患者移植后3年持续缓解率（70．7％VS62．5％．P=0．414）和3年总生存率（75．5％VS62．5％，P=0．194）高于A／A组，但差异无统计学意义。结论在无关供者HLA全相合造血干细胞移植中，供者KIR基因型B／X可能增加了患者慢性GVHD的发生率，对持续缓解率和总生存率无明显影响。

KIR多态性及其对AIDS疾病进程的影响

人类杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin like receptor,KIR)是主要表达于 NK 细胞和部分 T 细胞表面的一组免疫球蛋白样超家族成员,具有高度多态性。近年来随着对分子生物学方面研究的深入,人们发现其在自身免疫性疾病、妊娠、移植排斥反应、血液系统疾病等的发生发展中起重要作用。

新疆地区汉族人群KIR基因型和单体型检测分析

目的探讨新疆地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型和单体型分布特点及与内地汉族之间的差别,为进一步开展KIR基因在遗传学方面以及与某些疾病发生的关系等研究奠定基础。方法选取新疆汉族志愿者184例,使用PCR-SSP方法进行KIR基因检测,采用Hsu等建立的标准进行基因型和单体型分析。结果 (1)共检测已知的16个KIR基因,其中3DL3、2DL4、3DP1、3DL2基因存在于所有个体,其基因检测频率为100%;2DL1、2DP1、2DL3基因较为常见,检测频率为99.46%、99.46%、98.91%;3DL1、2DS4检测频率分别为91.30%、89.13%;3DS1和2DS1检测频率分别为44.0%和45.7%;2DS2基因检测频率最低为21.74%。(2)共检出21种基因型,其中以AJ(2,2)最常见,检测频率为42.39%;其次为AH(5,2)、AE(2,8)和H(2,4)型,检测频率分别为17.39%、11.96%和8.15%;发现有6种基因型共11例按Hsu的方法无法判定基因型别,这6种基因型在中国其他地区人群有报道,其ID分别为75、64、68、11、7、6。比对发现,J(1,21)、B(3,6)、R(6,9)、AA(4,4)基因型共5例在国内文献汉族人群研究中未见报道,其中J(1,21)检测频率为1.09%,后3种检测频率均为0.54%。(3)共检出9种单体型,最常见单体型2占61.3%;其次是单体型5占12.7%;另有11例样本共6种基因型,根据Hsu的方法无法判定其单体型组成,提示可能存在新的单体型。结论新疆地区汉族人群KIR基因与内地汉族人群具有相同点,同时也具有自身的基因型、单体型分布特征。

慢性乙型肝炎干扰素治疗与KIR基因多态性及干扰素抗体的相关性研究

目的:为观察KIR基因对干扰素疗效的作用及其与干扰素抗体产生的相关性,将慢性乙型肝炎干扰素治疗的患者进行KIR基因多态性、血清干扰素抗体进行综合分析。方法:随机选取应用干扰素治疗的慢乙肝患者60例,检测KIR基因分型、相关生化免疫指标及HBV-DNA载量以及干扰素抗体。根据研究对象对干扰素的治疗情况,将其分为治疗有效组和治疗无效组,将两组患者的KIR分型结果进行统计学处理;另外根据是否产生干扰素抗体,将研究对象分为抗体生成组和非抗体生成组,并分别对KIR分型的结果及其疗效进行统计学处理,分析两组KIR分型的差异性及对干扰素治疗效果的影响。结果:(1)在60例研究对象中共检出17种KIR基因的24个等位基因,其中假基因3DP、框架基因2DL4、3DL2、3DL3在两组研究对象中出现的频率为100%,KIR2DL2*001-005、2DS2*001-005、3DP1*001/002/004、2DL5等位基因在干扰素治疗有效组表达频率明显高于治疗无效组,KIR2DS4*003-007等位基因在治疗有效组频率明显低于治疗无效组,差异均有统计学意义(P<0.05),其他等位基因分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)60例研究对象治疗后血清抗-干扰素抗体阳性者有8例(13.33%),其中包括治疗有效组6例(20.00%),治疗无效组2例(6.67%),差异无统计学意义(P=0.254)。(3)2DL5B*002/004/007、3DL1*001-009/015-020及3DP1*003与干扰素抗体的产生均有相关性(P<0.05)。结论:(1)可能同慢乙肝患者干扰素应答有关的KIR基因有:KIR2DL2*001-005、2DS2*001-005、3DP1*001/002/004、2DL5,可能同干扰素治疗无效有关的KIR基因为KIR2DS4*003-007。(2)抗干扰素抗体对干扰素疗效影响较小,且阳性率较低。(3)KIR基因型中可能与抗-干扰素抗体产生有关的包括:2DL5B*002/004/007、3DL1*001-009/015-020及3DP1*003。

浙南地区强直性脊柱炎患者KIR基因多态性分析

目的分析浙南地区强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIRs)基因多态性,并分析其在AS形成中的作用。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)的方法检测浙南地区无血缘关系的99名AS患者的KIR基因型和单倍体型,并与100例浙南地区健康对照的KIR基因分布特点进行比较。结果所有AS患者均存在2DL1、2DL3、2DL4、3DL2、3DL3基因及假基因2DP1和3DP1。共有28种基因型,其中AA1型比例最高(35.35%),BX2其次(13.13%)。AS患者活化性基因KIR2DS3的表型频率明显高于健康人群(P<0.01)。AS患者抑制性基因型(AA型)频率明显低于健康人群(P<0.05),但两组之间单倍体型比例差异无统计学意义(P=0.256)。结论活化型基因KIR2DS3在AS患者中的表型频率明显升高,且AS患者活化型和抑制性KIR基因比例出现免疫活化的倾向,可能与AS的发生有一定的关系。

PCR-SSP/PCR-SSO两种KIR基因分型方法的比较

目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)两种方法,试图建立一个高效便捷检测KIR基因分型的方法学体系。方法从2018年到2019年已外送到第三方检测实验室(北京博富瑞医学检验实验室有限公司)做过KIR基因分型检测的脐带血样本中随机取出12份,分别用PCR-SSP及PCR-SSO商品化试剂盒进行KIR基因分型检测,并通过凝胶电泳分析或MATCH IT!DNA软件分析,获取KIR基因分型结果。结果12例脐带血样本中,PCR-SSO方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果完全一致,PCR-SSP方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果9例相同,有2例因出现漏孔而无法判读,有1例出现了假阳性带。结论PCR-SSO方法学检测KIR基因效果优于PCR-SSP,但是PCR-SSO方法学也存在当微珠的荧光校准值接近于临界值时,结果出现错判的现象;为保证KIR基因分型的准确度,建议PCR-SSP方法出现漏孔或者PCR-SSO方法荧光校准值接近于临界值时两种方法相互验证。

NK细胞对人鼻咽癌细胞CNE2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的研究同种异体NK细胞对人鼻咽癌细胞(CNE2)裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),磁珠分离法分离NK细胞并进行体外培养扩增,LDH释放法测定NK细胞对CNE2细胞的体外杀伤活性。12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只,对照组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,治疗组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,同时每只经尾静脉注入3×107NK细胞,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化、计算抑瘤率。结果CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7,3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR3DL2。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时,NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为(9.37±2.14)%、(27.14±1.82)%、(36.40±4.28)%and(54.67±2.80)%。对照组和NK细胞治疗组肿瘤出现时间分别为(10.00±2.68)d、(18.80±1.64)d,(P<0.01),成瘤率分别为100%(6/6)、83.33%(5/6),对照组和NK细胞治疗组裸鼠的瘤重分别为(2.22±0.09)g、(1.42±0.09)g,(P<0.01),NK治疗组的抑瘤率为36.04%。肿瘤组织石蜡切片病理学鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌,NK细胞治疗组可见角化肿瘤细胞,较多的淋巴细胞浸润和大量细胞坏死区。结论NK细胞对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,有希望成为治疗鼻咽癌的新方法。

HLA-Cw在广东汉族人群中的分布频率及其意义的初步分析

目的 :检测HLA Cw在广东汉族人群的分布频率 ,初步分析该人群中KIR与HLA Cw之间识别方式的特点及意义。方法 :骨髓移植供者 12 2例 ,ACD抗凝血提取DNA ,半量全自动PCR RSSO分型检测Cw。结果 :广东汉族人群HLA Cw基因频率分布由高至低依次为 :Cw 0 3(0 2 371) >Cw 0 7(0 2 15 9) >Cw 0 1(0 175 2 ) >Cw 0 8(0 112 9) >Cw 0 4 (0 0 5 0 5 ) >Cw 14、15(0 0 4 19) >Cw 12 (0 0 376 ) >Cw 0 6 (0 0 333) >Cw 0 5 (0 0 0 82 ) >Cw 16 (0 0 0 4 1)。第一组Cw 0 2 ,0 4 ,0 5 ,0 6识别KIR分子中2DL 2DSI;第二组Cw 0 1,0 3,0 7,0 8识别KIR分子中 2DL2 2DL3;2DS2 2DS3。两组分布频率相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :广东汉族人群HLA Cw 0 1,0 3,0 7,0 8出现频率较高 ,其与KIR的识别方式均属第二组。

活化性及抑制性免疫球蛋白样受体对非去T细胞异基因造血干细胞移植预后的影响

本研究探讨异源反应性NK细胞免疫球蛋白样受体(KIR)与HLA配体的关系对非去T细胞异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)预后的影响。应用序列特异性引物分型技术检测供受者的KIR及HLA基因型,并对我院67例接受非去T细胞allo-HSCT的病例资料进行回顾性分析。根据供者KIR及受者HLA关系及供者是否表达活化性KIR进行分组,通过单因素及多因素分析确定抑制性及活化性KIR基因对移植预后的影响。结果表明,抑制性KIR/配体相合组无事件生存率(EFS)略高于不合组,其中KIR2DL1/C2相合组3年EFS显著高于C2不相合组(69.2%vs 44.8%,P=0.043),而抑制性KIR/配体相合组的复发率、急性GVHD发生率及移植相关死亡率(TRM)与不合组无显著差异。供者表达活化性KIR2DS2的患者,其3年EFS更高(81.3%vs 52.6%,P=0.05),且复发率显著减低(7.7%vs 34.2%,P=0.05)。而受者不表达C2组配体时,供者表达活化性KIR2DS1的患者,即KIR2DS1阳性/HLA-C2阴性组,其3年EFS明显下降(P=0.028),急性GVHD发生率明显上升(P=0.028)。多因素分析表明,疾病进展期、活化受体数目增多、供者不表达KIR2DS2表型是生存率下降的独立危险因素(HR=3.34、2.19、3.18;95%CI=1.43-7.82、0.99-4.83、0.93-11;P=0.005,0.053,0.066)。此外,疾病进展期、供者不表达KIR2DS2表型也是高复发率的独立危险因素(HR=6.72,9.43;95%CI为1.36-33.16,1.03-8.33;P=0.019,0.047)。而供者KIR2DS1阳性/受者HLA-C2阴性是移植相关死亡的唯一危险因素(HR=3.27,95%CI1.78-9.06,P=0.023)。结论:在非去T细胞allo-HSCT中,抑制性KIR/HLA不合对移植后患者生存率、疾病复发率及TRM的影响较小,但可能干扰移植早期抗病毒免疫。抑制性KIR2DL1/HLA C2不合组EFS显著低于相合组,这可能与该组患者TRM上升、急性GVHD发生率升高有关。而活化性KIR对患者EFS、复发及急性GVHD发生率都有影响。供者不表达KIR2DS2预示着生存期延长,这与复发率低有关,而供者KIR2DS1阳性/受者HLA-C2阴性组,预示着生存期缩短及急性GVHD发生率增高,TRM增高。因此,在非去T allo-HSCT中,分析供受者KIR及其配体可以为供者优化选择提供分子生物学依据。

江苏汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其特异性配体HLA分析

目的:分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其特异性配体HLAⅠ类分子在江苏地区汉族人群的分布特点。方法:分别利用real-time PCR法和PCR-SSP方法对173例无血缘关系的江苏汉族健康人群进行KIR和HLA-Cw,HLA-Bw4分型,并分析KIR/HLA配对组合的类型和数量。结果:江苏汉族人群中,>92%的个体同时表达四种抑制性KIR(iKIR)(2DL1,2DL2/3,3DL1,3DL2)。2DL2/HLA-C1,2DL3/HLA-C1,2DL1/HLA-C2,3DL1/Bw4的频率分别依次分别为0.243,0.971,0.457,0.590;2DS1/HLA-C2,2DS2/HLA-C1的频率为0.162,0.231。54.3%的个体只表达2DL1而不表达相应的配体HLA-C2,32.9%的个体只表达3DL1而缺乏配体HLA-Bw4,另有5.8%的个体只表达HLA-Bw4而不表达3DL1。27.7%的个体同时表达3种iKIR/HLA,26%的个体同时表达两种iKIR/HLA,25.4%的个体只遗传一个iKIR/HLA配对,未发现3种iKIR/HLA同时缺失的个体。结论:在江苏汉族人群中,存在KIR与HLA表型分离现象,抑制性KIR/HLA配对表达高于刺激性KIR/HLA配对,约1/4个体只表达单个iKIR/HLA配对。

同种异体NK细胞对人多药耐药鼻咽癌细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:研究同种异体自然杀伤(natural killer,NK)细胞对人多药耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,探讨异体间的免疫治疗。方法:PCR-SSP法分析CNE2/DDP细胞人白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)基因型和健康人NK细胞表面的抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(inhibitory killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)基因型,用磁珠分离法从3例健康人外周静脉血中分离NK细胞并进行体外培养扩增。12只BALB/c裸鼠,随机分为2组,每组6只。每只裸鼠皮下接种1×106个CNE2/DDP细胞,治疗组裸鼠同时每只经尾静脉注入3×107个NK细胞,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率及肿瘤体积变化。成瘤后3周,眼眶取血,流式细胞术检测人NK细胞;处死裸鼠,取肿瘤块称重,计算抑瘤率,观察肿瘤病理特点。结果:3例健康者KIR与CNE2/DDP细胞表面的HLA-Ⅰ类分子之间存在错配。对照组和NK细胞治疗组成瘤率均为100%,肿瘤出现时间分别为(17.17±1.17)d、(24.83±1.47)d,两者差异有统计学意义(P<0.01);成瘤后3周,治疗组外周血可检测到人NK细胞;对照组和NK细胞治疗组裸鼠的瘤重分别为(1.60±0.22)g、(1.28±0.52)g(P<0·01),NK细胞治疗组的抑瘤率为20%;肿瘤病理学鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌,NK细胞治疗组可见明显淋巴细胞浸润和肿瘤坏死。结论:同种异体NK细胞对CNE2/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,有希望成为治疗鼻咽癌的免疫效应细胞。

自然杀伤细胞表面杀伤免疫球蛋白样受体和CD57分子的表达及其功能

目的:通过研究自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)表面表达杀伤免疫球蛋白样受体(killer immunologublin receptor,KIR,包括CD158a,CD158b,CD158e)及CD57分子的NK细胞亚群功能的异同,探讨具有不同功能状态的NK细胞亚群。方法:收集于北京大学血液病研究所行造血干细胞移植的健康供者10例,基于CD107a表达及细胞内因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的分泌,采用6色流式细胞学检测技术,检测不同NK细胞亚群NK细胞毒性及胞内细胞因子IFN-γ分泌功能的异同。结果:(1)表达CD57分子的NK细胞亚群占NK细胞的比例明显高于表达KIR分子的NK细胞亚群[(60.71%±5.71%)vs.(24.47%±3.95%),P<0.001)],进一步用KIR分子及CD57分子将NK细胞亚群区分为KIR+CD57-,KIR+CD57+,KIR-CD57+,KIR-CD57-四群NK细胞亚群,KIR-CD57+(43.03%±5.70%)及KIR-CD57-(32.45%±5.50%)所占比例相近(P=0.189),占NK比例最高,其次为KIR+CD57+(17.67%±3.39%)及KIR+CD57-(6.69%±0.95%);(2)进一步功能试验提示:表达CD57分子的NK细胞亚群与表达KIR分子的NK细胞亚群的杀伤活性及细胞因子IFN-γ分泌能力相近,二者差异无统计学意义,但明显低于CD56briNK细胞(P=0.046,P=0.035),但与CD56dimNK细胞亚群杀伤活性及IFN-γ分泌能力相近;无论从NK亚群杀伤活性还是从NK亚群IFN-γ分泌活性排列,KIR-CD57-细胞最高(46.22%±9.24%和23.41%±5.82%),其杀伤活性与细胞因子分泌功能与CD56briNK细胞亚群相近(49.60%±9.26%和30.67%±8.0%),其次依次为KIR+CD57-细胞,KIR-CD57+细胞和KIR+CD57+细胞,后二者功能上差异无统计学意义。结论:CD57分子及KIR受体均与NK细胞功能密切相关,提示KIR-CD57-为早期NK细胞,CD57阳性细胞可能为终末分化NK细胞,而KIR+CD57-细胞为中间型NK细胞。

同步扩增和鉴定中国人群KIR基因有无的PCR-SSP方法的建立

目的探讨建立同步扩增中国人群全部KIR基因和鉴定KIR基因有无的序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法。方法选取2015年1月至2015年11月在深圳市血液中心无偿献血的132份健康受试者的血样为研究对象。基于中国人群精细水平KIR等位基因的多态性和单核苷酸多态性(SNP)信息,参考IPD-KIR数据库,设计KIR基因特异性引物用于扩增16种KIR基因及2DS4-Normal、2DS4-Deleted 2种亚型;并采用KIR基因型已知样本,对每对PCR引物的特异性进行验证。在KIR基因的PCR扩增反应中,复合扩增人体生长激素(HGH)基因片段作为内对照,以防止PCR扩增出现假阴性结果。随机选取132份KIR基因型已知的健康受试者DNA样本进行盲检,验证该方法的可靠性。结果本研究设计和筛选出的KIR特异性引物,可鉴定相应的KIR基因,而且内对照条带和特异性扩增条带均清晰、明亮;采用本研究建立的鉴定KIR基因有无的PCR-SSP方法检测纳入研究的132份样本的盲检结果,与已知KIR基因型完全一致。结论本实验建立的KIR PCR-SSP方法,鉴定中国人群KIR基因的有无可获得准确、可靠的结果。