基于生信分析探索KIN17表达对非小细胞肺癌的影响

目的探讨KIN17在体内的表达对非小细胞肺癌及肿瘤微环境的影响。方法从公共数据库中获取相关数据,分析KIN17在肿瘤组织与正常肺组织中的表达差异,并通过生存分析,评估KIN17表达量对非小细胞肺癌患者预后的影响。整理分析与KIN17表达高度相关的基因,并进行进一步富集分析。对KIN17表达与免疫细胞浸润水平进行相关性预测,以评价KIN17表达水平对肿瘤微环境的影响。结果与正常肺组织相比,在非小细胞肺癌肿瘤组织中KIN17表达增加(P<0.01)。富集分析结果显示,在肺腺癌和肺鳞癌中与KIN17高度相关的差异性基因在多个影响肿瘤细胞增殖和转移的通路上高度富集。通过免疫细胞浸润分析结果得出,KIN17在肺腺癌中和肺鳞癌中与多种免疫细胞呈正相关。结论KIN17与其相关基因在非小细胞肺癌中可能存在协同作用,从而影响非小细胞肺癌的发展和肿瘤细胞的转移,在非小细胞肺癌的早期诊断和治疗中有一定的临床价值。

Kin17表达促进乳腺上皮细胞MCF-10A增殖

Kin17是一个与DNA复制、DNA修复有关的蛋白质,在人类的各种组织中表达均很低.目前乳腺上皮细胞生长增殖的分子机制尚未阐明.为了探讨Kin17与乳腺上皮细胞增殖的关系,检测了Kin17在不同增殖状况下的MCF-10A细胞中的表达情况,并把KIN17基因插入真核表达载体pcDNA3.1-(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1-Kin17,通过转染MCF-10A细胞,检测Kin17的表达对MCF-10A细胞的增殖、DNA复制活性及信号分子表达的影响;同时,在转染Kin17特异性小干扰RNA(siRNA_Kin17)后,分析MCF-10A细胞的Kin17表达及细胞生长状况.实验结果显示,经高浓度血清刺激后,细胞中Kin17表达升高,而且生长越快的细胞,Kin17表达越强;转染重组质粒pcDNA3.1-Kin17明显提高了MCF-10A细胞中Kin17的表达,同时Kin17的上调表达促进了细胞的增殖速度与DNA复制活性,增强了cyclin D1的表达水平.当转染siRNA_Kin17时使Kin17含量下调,MCF-10A细胞生长速度的抑制不显著.实验结果表明,Kin17与乳腺上皮细胞的DNA复制及生长增殖密切相关.对Kin17在乳腺上皮细胞增殖中的作用及分子调控机制的深入探讨,将有助于揭示乳腺癌细胞快速增殖的潜在机制.

KIN17在28例肺癌标本中的表达分析

明确肿瘤发病机制与分子机制,发现理想的早期筛查指标与治疗靶标对肿瘤诊断及治疗极为重要。肺癌细胞具有持续的DNA复制潜能和蓄积的DNA损伤,而KIN17蛋白与DNA复制及修复有关[1-2],因此考虑KIN17可能与肺癌细胞功能有关。本文通过免疫组化技术分析KIN17在肺癌组织中的表达情况,以期为深入探讨KIN17在肺癌发病机制与治疗中的作用奠定基础。

真核表达载体pEGFP-N1-kin17的构建及其在Zmpste24^(-/-)小鼠胚胎成纤维细胞内的表达

目的构建人kin17基因真核表达载体pEGFP-N1-kin17,将载体转染至野生型及Zmpste24基因缺失的小鼠胚胎成纤维上皮细胞,荧光显微镜观察kin17蛋白表达情况。方法用高保真DNA聚合酶,从pCMV-kin17载体中扩增获取人kin17 cDNA编码序列,将其克隆至pEGFP-N1载体中,经酶切、连接、转化后,挑取阳性克隆进行菌液进行PCR、菌液质粒双酶切及测序鉴定;将成功构建的GFP-kin17表达载体转染Zmpste24-/-MEFs,荧光显微镜观察kin17蛋白的核定位情况。结果 pEGFP-N1-kin17转化细菌克隆测序结果完全正确;将载体转入MEFs后,可以通过荧光显微镜观察到kin17蛋白的表达。结论成功构建GFP融合的kin17真核表达载体,该载体为kin17蛋白的研究提供工具。本实验中载体pEGFP-N1-kin17在野生型和Zmpste24-/-MEFs中均成功表达。

沉默Kin17表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的探讨沉默Kin17表达对乳腺癌细胞生长增殖的影响,为评估该分子作为未来药物靶点的潜能提供依据。方法分别用携带Kin17基因特异性si RNA与正常对照si RNA的慢病毒重组载体感染MDA-MB-231细胞,再用嘌呤霉素进行抗性筛选,然后在荧光显微镜下观察阳性细胞的比例;用Real-time PCR与Western blot方法检测稳定转染了慢病毒重组载体的MDA-MB-231细胞中的Kin17m RNA与蛋白表达水平;CCK-8实验检测细胞生长增殖状况。结果通过感染携带Kin17特异性si RNA的病毒重组载体,稳定、明显敲减了MDA-MB-231细胞中的Kin17 m RNA与蛋白表达水平,而且显著减缓了该乳腺癌细胞的生长增殖速度。结论沉默Kin17表达能抑制三阴表型乳腺癌细胞的增殖,并有可能成为一种潜在的乳腺癌治疗新策略。

沉默Kin17基因的表达对乳腺癌细胞MCF-7生长增殖的影响

目的探讨沉默Kin17基因的表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法利用携带Kin17基因的特异性siRNA的慢病毒载体感染MCF-7细胞,经嘌呤霉素筛选纯化后,采用RT-PCR和Westernblot方法检测细胞中Kin17mRNA和蛋白表达水平;再采用CCK-8实验来检测细胞生产增殖状况。结果转染GV-siRNA-Kin17的MCF-7-KD细胞中Kin17mRNA的表达水平比正常MCF-7细胞中Kin17的表达水平下降了75.8%(P<0.05);Kin17的蛋白表达水平显著低于正常MCF-7细胞中Kin17的蛋白表达水平(P<0.05);CCK-8实验结果表明,MCF-7-KD细胞的生长增殖速度显著低于正常MCF-7细胞的生长增殖速度(P<0.05)。结论沉默kin17表达能抑制乳腺癌细胞MCF-7的生长增殖,并有可能成为治疗乳腺癌治疗新策略。

Kin17在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨Kin17在宫颈鳞状细胞癌及癌前病变组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法(Envision法)检测宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者(n=88)、宫颈高级别上皮内病变(HSIL)患者(n=8)、宫颈低级别上皮内病变(LSIL)和慢性宫颈炎患者(n=16)中Kin17的表达情况。结果 SCC组、HSIL组和LSIL及慢性宫颈炎组的Kin17阳性表达率分别为72.72%(64/88)、37.50%(3/8)和18.75%(3/16),SCC组阳性表达率明显高于HSIL组、LSIL和慢性宫颈炎组(P<0.05);Kin17表达与SCC患者淋巴结转移相关(P<0.05),即有淋巴结转移组中Kin17表达明显高于无淋巴结转移组;而与患者年龄、FIGO分期、肿瘤分化程度无相关性(P>0.05)。结论 Kin17在宫颈癌的异常表达可能与肿瘤的发生、发展有关,检测Kin17蛋白表达水平可作为监测宫颈癌发生的辅助手段之一。

人Kin17蛋白的原核表达及纯化

目的:构建重组质粒,在原核系统中表达带His标签的人Kin17融合蛋白,并对表达产物进行纯化及鉴定。方法:以PK3质粒为模板,PCR扩增出全长的KIN17基因,并将PCR产物插入到原核表达载体pET32a中,构建的重组质粒经BamHⅠ/HindⅢ双酶切及DNA测序方法鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21,并用丙基-β-硫代半乳糖苷诱导表达His-Kin17融合蛋白,最后应用Ni-NTA柱亲和层析方法来纯化融合蛋白及经Western免疫印迹鉴定纯化的重组蛋白。结果:双酶切及DNA测序方法证实pET32a-KIN17质粒构建正确,融合蛋白经诱导表达、纯化、鉴定后,得到纯度达到95%以上的His-Kin17重组蛋白。结论:成功构建携带KIN17基因的重组载体,并获得了高纯度的His-Kin17重组蛋白,为深入研究Kin17蛋白的分子结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

Kin17基因在斑马鱼胚胎发育过程中的表达特性分析

Kin17是一种在物种进化中较保守的、在各种组织中普遍表达的蛋白。为明确Kin17基因在斑马鱼发育中的表达特性及在斑马鱼胚胎发育过程中的功能,利用RT-PCR和Q-PCR方法检测Kin17 mRNA在斑马鱼中的表达情况,运用免疫组织化学技术检测Kin17蛋白在成鱼各组织中的表达特性。采用胚胎整体原位杂交(WISH)方法观察Kin17 mRNA在斑马鱼胚胎内的表达分布情况。利用吗啉反义寡核苷酸介导的基因敲降技术降低Kin17的表达水平,并观测斑马鱼胚胎发育情况。结果表明:Kin17转录本母源存在,Kin17 mRNA的表达水平在原肠期前表达较低,到体节期迅速上升且稳定在较高水平。Kin17基因在斑马鱼成鱼多个组织中均有表达,高表达于卵巢、精巢、肠道组织。原位杂交结果显示,Kin17基因在斑马鱼胚胎的原始生殖细胞、脑部、眼部中的表达量较高。注射Kin17吗啉反义寡核苷酸使Kin17基因表达受到抑制,导致斑马鱼胚胎发育迟缓,出现眼部缺失、腹腔肿大、尾部缺失等不同程度的畸形。上述结果提示,Kin17在斑马鱼胚胎发育过程中发挥重要作用。