成纤维细胞生长因子2、成纤维细胞生长因子受体4蛋白在人甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和成纤维细胞生长因子受体4(FGFR-4)的表达及其是否存在相关性。方法收集89例甲状腺乳头状癌及30例癌旁正常甲状腺组织标本,采用免疫组织化学和免疫印迹法(Western blotting)检测FGF-2和FGFR-4蛋白在标本中的表达,并进行统计学分析。结果免疫组织化学方法结果显示,与癌旁正常组织相比,FGF-2及FGFR-4在人类甲状腺乳头状癌组织中均高表达(P<0.01,P<0.01),两者差异有统计学意义;FGF-2和FGFR-4在甲状腺乳头状癌中的表达与淋巴结转移(χ2=14.798,P<0.01;χ2=7.27,P<0.01)和分化程度(χ2=13.824,P<0.01;χ2=16.921,P<0.01)相关,而与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);通过Western blotting技术分析,FGF-2和FGFR-4癌组织中的表达明显高于正常组织,随着癌组织分化程度的降低,表达明显上调(P<0.05),其结果和免疫组织化学染色的检测结果一致;并且两者在甲状腺乳头状癌中的表达呈正相关(rs=0.434,P<0.01)。结论 FGF-2和FGFR-4与甲状腺乳头状癌的发生、侵袭和转移有关,两者具有正协同作用,联合检测对判断甲状腺乳头状癌的恶性程度及生物学行为是一项有意义的综合性指标。

OCT4与EMT相关因子在浸润性乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关因子E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)以及干细胞因子八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)在浸润性乳腺癌中的表达情况及OCT4与E-钙黏着蛋白和波形蛋白的相关性。方法:收集河北医科大学第四医院2009年手术切除的浸润性乳腺癌组织标本40例,实时荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测OCT4、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的mRNA和蛋白的表达,分析其与临床病理特征的关系、OCT4和EMT相关蛋白之间的相关性以及与浸润性乳腺癌患者生存率之间的关系。结果:在浸润性乳腺癌组织中,OCT4、E-钙黏着蛋白和波形蛋白表达率分别为30%(12/40)、55%(22/40)和65%(26/40)。OCT4表达与浸润性乳腺癌患者的年龄、组织学分级、淋巴结转移以及Her-2的表达有关,E-钙黏着蛋白表达与淋巴结转移有关,波形蛋白表达与组织学分级和淋巴结转移有关。OCT4 mRNA和蛋白的表达与E-钙黏着蛋白和mRNA蛋白的表达呈负相关,与波形蛋白mRNA和蛋白的表达呈正相关,而E-钙黏着蛋白mRNA和蛋白的表达与波形蛋白mRNA和蛋白的表达也呈负相关。OCT4表达阳性患者的生存率明显低于表达阴性患者,差异具有统计学意义(P<0.05);而E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达与患者生存率之间未见明显相关性(P>0.05)。结论:干细胞因子OCT4可能通过EMT促进浸润性乳腺癌细胞的转移,可能是影响浸润性乳腺癌预后的因素。

E-cadherin和KLF 4表达对胃癌侵袭转移的作用

观察E-cadherin,Krüppel-like factor 4(KLF4)蛋白在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达,分析其与胃癌浸润、转移的关系.应用免疫组织化学SP法检测84例手术切除的胃癌标本及对应正常胃黏膜组织中E-cadherin,KLF4蛋白的表达.各指标之间相关因素的差异性比较采用χ2检验,E-cadherin,KLF4相关性研究采用Spearman相关分析.结果显示,与正常胃组织相比,E-cadherin、KLF4蛋白在胃癌组织中均呈低表达或者缺失(分别42.9%vs.95.24%,8.3%vs 81%,P<0.05).E-cadherin、KLF4蛋白的阳性表达率与组织分级(P<0.05)、肿瘤浸润深度(P<0.05)、淋巴转移(P<0.05)明确相关.Spearman相关分析显示KLF4蛋白与E-cadherin蛋白的表达呈正相关(P<0.05).因此,E-cadherin,KLF4蛋白水平低表达可能与胃癌浸润和转移有关,而联合检测更能有效判断胃癌这一生物学行为.

KLF4与原发性肝细胞癌关系的研究进展

KLFs家族是一类具有锌指结构的转录因子,参与多个生理活动的调控,在细胞增殖、凋亡、分化以及胚胎发育等过程中扮演了关键的角色,与真核基因转录调控密切相关.Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)作为KLFs家族中重要的一员,KLF4在原发性肝癌组织中呈现高表达,但是KLF4在原发性肝细胞癌的作用机制仍需要进一步的探讨,本文就KLF4在原发性肝细胞癌中的生物学功能进行综述.

成纤维细胞生长因子19和成纤维细胞生长因子受体4在食管鳞癌中的表达及其意义

目的:探讨成纤维细胞生长因子19(fibroblast growth factor 19,FGF19)和成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growthfactor receptor 4,FGFR4)在食管鳞癌中的表达及其是否存在相关性。方法:利用免疫组织化学法检测我院2009-2012年间34例食管鳞癌术后病理标本中肿瘤组织和正常食管组织中FGF19和FGFR4蛋白的表达,并进行统计学分析。结果:FGF19和FGFR4在人类食管鳞癌组织中均高表达(P=0.000,P=0.000),FGFR4和FGF19在食管鳞癌中的表达与淋巴结转移(rs=0.401,P=0.019;rs=0.404,P=0.018)和病理分期(rs=0.495,P=0.003;rs=0.439,P=0.009)呈正相关,并且在食管鳞癌中FGFR4与FGF19的表达呈正直线相关(rs=0.483;P=0.004)。结论:FGF19和FGFR4与食管鳞癌的发生有关,并参与其侵袭转移过程。

MST4通过激活MAPK-ERK信号通路调节炎症因子释放促进肝癌的侵袭和转移的机制研究

背景与目的:丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(mammalian Ste20-like kinase 4,MST4)促进肿瘤的侵袭和转移,前期研究发现,MST4可以通过上皮间质转化促进肝癌细胞的侵袭和转移。该研究旨在探讨MST4通过激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路-细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinaseextracellular signal-regulated kinase,MAPK-ERK)信号通路影响炎症因子释放调节炎症微环境,促进肝癌的侵袭和转移。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)方法对MST4高表达的肝癌细胞中白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和趋化因子2(CC chemokine ligand-2,CCL2)的转录水平进行检查,通过蛋白[质]印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)研究MST4对肝癌细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和CCL2蛋白量的表达及活性的影响。结果:MST4高表达的肝癌细胞,其IL-1β、IL-6、TNF-α和CCL2的转录水平、蛋白水平和分泌水平显著高于MST4低表达的肝癌细胞系(P<0.05)。同时发现MST4可以通过改变ERK磷酸化的水平,促进细胞因子释放的改变。结论:MST4可以通过MAPK-ERK信号通路活化完成对肿瘤细胞分泌炎症因子的调节,促进炎症因子的分泌,增强肝癌细胞侵袭和转移的能力。

神经母细胞瘤中八聚体结合转录因子4的表达及与瘤细胞侵袭转移的关系初探

目的:观察八聚体结合转录因子4(Oct4)在神经母细胞瘤中的表达情况,并探讨其与神经母细胞瘤转移和侵袭的关系。方法:采用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测神经母细胞瘤组织及癌旁组织中Oct4的表达情况。收集患者临床病理参数,分析Oct4表达与神经母细胞瘤临床病理参数之间的关系。采用电穿孔转染法,将Oct4 si RNA转入神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中,通过伤口愈合实验和Boyden小室检测Oct4对神经母细胞瘤SK-N-MC细胞转移和侵袭能力的影响。结果:神经母细胞瘤组织中Oct4的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。Oct4的阳性表达率与患者有无淋巴结转移和分化程度密切相关(P<0.01),但与患者性别、年龄、肿瘤大小和临床病理分期均无明显关系(P>0.05);转染Oct4 si RNA可显著抑制神经母细胞瘤SKN-MC细胞的转移和侵袭能力(P<0.01)。结论:Oct4具有促进神经母细胞瘤转移和侵袭的作用,其高表达可能与神经母细胞瘤的发生和发展密切相关。

2-甲氧基雌二醇对乳腺癌MCF-7细胞HIF-1α、CXCR4、VEGF表达的影响

目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2ME2)对乳腺癌MCF-7细胞生长及缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-induciblefactor1α,HIF-1α)、趋化因子受体-4(CXC chemokine receptor-4,CXCR4)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度2ME2对MCF-7细胞的增殖抑制作用;Hoechest 33258染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR、Western blot分别检测不同浓度2ME2对乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白表达水平的影响。结果:2ME2可较强的抑制MCF-7细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;经2ME2作用48h后MCF-7细胞表现出典型的凋亡形态特征;不同浓度2ME2作用于MCF-7细胞48小时后,随着药物浓度的增加细胞中HIF-1α、CXCR4、VEGF在mRNA及蛋白表达水平逐渐降低,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:2ME2可通过降低HIF-1α、CXCR4、VEGFmRNA及蛋白表达,抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及肿瘤血管生成和侵袭转移相关因子的表达。

Krüppel样因子4对HeLa细胞生物学行为的影响

目的探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对HeLa细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 HeLa细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E细胞采用Western blot法检测KLF4蛋白相对表达量。对数生长期人HeLa细胞分为对照组、HeLa/KLF4组和阴性对照组,其中对照组细胞正常培养,不进行转染;HeLa/KLF4组和阴性对照组细胞分别转染人KLF4表达质粒和KLF4空载质粒;采用CCK-8增殖实验检测转染24、48、72 h后3组细胞生长抑制率,采用CCK-8黏附实验检测细胞黏附能力,采用Transwell侵袭和迁移实验检测3组细胞侵袭细胞数和迁移细胞数。结果 HeLa细胞中KLF4蛋白相对表达量(0.22±0.03)低于正常宫颈上皮Ect1/E6E细胞(0.78±0.10)(P<0.05),HeLa/KLF4组细胞中KLF4蛋白相对表达量(0.75±0.09)高于阴性对照组(0.32±0.04)和对照组(0.34±0.05)(P<0.05),阴性对照组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染24、48、72 h,HeLa/KLF4组细胞生长抑制率均高于阴性对照组和对照组(P<0.05),阴性对照组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);培养1、2 h后,HeLa/KLF4组细胞黏附能力低于阴性对照组和对照组(P<0.05),培养3、4 h后3组细胞黏附能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养24 h后,HeLa/KLF4组侵袭细胞数[(28.48±4.33)个]和迁移细胞数[(97.73±17.88)个]明显低于对照组[(69.34±8.58)、(220.68±34.25)个]和阴性对照组[(62.25±6.78)、(208.14±25.83)个](P<0.05),对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 KLF4在宫颈癌中可能起抑癌基因的作用,对宫颈癌细胞增殖、生长有抑制效果,并可降低癌细胞的黏附能力、侵袭和迁移能力,KLF4有可能成为宫颈癌发生、发展研究的新靶点。

CXCR4/CXCL12信号途径在食管鳞癌浸润转移中的作用机制

目的研究趋化因子受体4(CXCR4)/趋化因子12(CXCL12)信号途径在食管鳞癌浸润转移中的作用机制,为探讨CXCR4成为食管癌治疗新的靶点提供理论依据。方法取对数生长期的食管鳞癌EC9706细胞,添加趋化因子CXCL12,通过侵袭转移实验、黏附实验分别检测食管鳞癌EC9706细胞株的细胞侵袭、移动和黏附能力。采用RT-PCR和Western Blot技术检测表皮生长因子受体(EGFR)mRNA及蛋白的表达水平。结果添加不同浓度趋化因子CXCL12(终浓度为5、10μg/ml),食管鳞癌EC9706细胞株的细胞侵袭、移动和黏附能力均较空白对照组高,并且存在剂量依存关系,即CXCL12浓度越高,细胞的侵袭、移动、黏附能力越强,差异均有统计学意义(P<0.01)。添加不同浓度趋化因子CXCL12,食管鳞癌细胞的EGFR mRNA和蛋白表达水平均较对照组高,并且存在剂量依存关系,即CXCL12浓度越高,EGFR mRNA和蛋白表达水平越高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论CXCR4/CXCL12信号途径与食管鳞癌细胞的侵袭、转移相关,并且存在剂量依存关系,有可能通过调控EGFR的表达参与食管鳞癌的浸润转移。

EGFR和CXCR4表达在肺癌中的相关研究

目前，从分子水平了解肺癌发病机制、判断预后和明确生物靶点有助于提高其疗效。在多种恶性肿瘤中EGFR、CXCR4均有异常表达，并与肿瘤的侵袭、转移和预后密切相关。本研究通过对EGFR、CXCR4的检测和相关的研究，探讨二者在肺癌中的表达情况及对判断预后的意义，为肺癌的侵袭和转移的确诊及治疗提供新靶点。

KLF4通过Wnt信号通路抑制甲状腺癌细胞EMT及侵袭迁移的实验研究

目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)对甲状腺癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移的影响及机制。方法免疫组织化学(IHC)检测45份甲状腺癌标本中KLF4的表达情况。常规体外人甲状腺乳头状癌细胞株KTC1培养,将其分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染LipofectamineTM 2000)、KLF4过表达组(转染LipofectamineTM 2000+KLF4)、siRNA-NC组(转染LipofectamineTM 2000+NC-siRNA)和KLF4-siRNA组(转染LipofectamineTM 2000+KLF4-siRNA)。免疫荧光检测细胞中KLF4与β-catenin的分布和共表达;Transwell检测癌细胞侵袭和迁移的能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测EMT和Wnt信号通路相关的基因和蛋白质表达水平。蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)检测KLF4和β-catenin间的互作情况。结果免疫荧光标记显示,KLF4和β-catenin在KTC1细胞质中共定位。qRT-PCR结果显示,KLF4过表达组上皮型钙黏蛋白(E-cad)mRNA表达明显高于其他组(P<0.05),神经型钙黏蛋白(N-cad)和基质金属蛋白酶7(MMP7)mRNA表达水平明显低于其他组(P<0.05);沉默干扰KLF4后,与其他组相比,KLF4-siRNA组中的E-cad mRNA明显降低(P<0.05),N-cad和MMP7 mRNA明显升高(P<0.05)。Western blot结果显示,KLF4过表达组中E-cad表达较其他组明显升高(P<0.05),而N-cad、MMP7表达则明显低于其他组(P<0.05);当沉默干扰KLF4时,上皮标志物减少(P<0.05),间质标志物增加(P<0.05)。Transwell结果显示,过表达KLF4可以抑制KTC1细胞的迁移和侵袭,干扰沉默KLF4可增强KTC1细胞的迁移和侵袭。Co-IP结果显示,KLF4与β-catenin之间存在相互作用。KLF4在甲状腺癌及癌旁组织中的阳性表达率分别为24.44%(11/45)和71.11%(32/45),二者比较差异有统计学意义(χ2=19.639,P<0.001)。45份甲状腺癌标本中,伴淋巴结转移18份标本中KLF4表达4份阳性,而不伴淋巴结转移27份标本中,KLF4表达15份阳性,二者比较差异有统计学意义(22.22%vs.55.56%,χ2=4.919,P=0.027)。结论KLF4通过Wnt信号通路调节相关下游靶基因的表达,从而影响了甲状腺癌的侵袭和迁移能力。