Kunitz抑制剂家族成员抑肽酶对纤溶酶原活化的抑制作用(英文)

抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水解活性.用u_PA研究了上述作用的机制,发现抑肽酶与u_PA的丝氨酸蛋白酶功能区特异性结合,而与纤溶酶原没有相互作用.抑肽酶与u_PA的结合并不阻断u_PA的活性位点,因为u_PA对小分子底物的水解活性仍然保持.上述发现提示抑肽酶可能存在另一种抑制作用模式,该模式不同于以前报道的关于Kunitz抑制剂或纤溶酶原激活酶抑制剂的作用.由于人体内的Kunitz抑制剂与抑肽酶在结构上非常相似,根据研究结果,推测体内纤溶酶原的激活作用并非仅受丝氨酸蛋白酶抑制剂的控制.

交联琼脂糖珠固定化蛋白酶在纯化牛肺Kunitz抑制剂中的应用

本文介绍了珠状交联琼脂糖及以此作为载体,经氯代环氧丙烷活化后与蛋白酶(胰蛋白酶或糜蛋白酶)结合,制成固定化蛋白酶亲和吸附剂,进而用以亲和层析牛肺提取液中的Kunitz抑制剂的方法。纯化出的抑制剂在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现单一条带,与参照物Trasytol(商品Kunitz抑制剂)具有相对应的电泳迁移率,其分子量也相符。纯化产品每毫克蛋白的抑制活力相当于16 000胰蛋白酶BAEE单位。纯化效果为90倍,收率约85％。