L-NMMA对过量氟暴露引起的小鼠MC3T3E1成骨细胞中NO/iNOS表达的影响

目的探讨L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)与过量氟化钠(NaF)共培养对小鼠颅顶前成骨(MC3T3E1)细胞中一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将MC3T3E1成骨细胞分为空白组(只含培养基)、NaF染毒组(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)及L-NMMA染毒组(0、5、10、20、40、80 mol/L),采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞存活率,并筛选最佳染氟浓度和最佳L-NMMA用药浓度;再将MC3T3E1成骨细胞分为对照组(0.0 mmol/L NaF)、低氟组(1.0 mmol/L NaF)、高氟组(4.0 mmol/L NaF)、低氟+L-NMMA组(1.0 mmol/L NaF+20μmol/L L-NMMA)、高氟+L-NMMA组(4.0 mmol/L NaF+20μmol/L L-NMMA)、L-NMMA组(20μmol/L L-NMMA),处理24 h,采用硝酸还原酶法检测细胞中NO含量,蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法分别检测iNOS蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L NaF染毒组及80μmol/L L-NMMA染毒组MC3T3E1成骨细胞存活率降低(P<0.05),选择1.0 mmol/L和4.0 mmol/LNaF为染氟浓度、20μmol/LL-NMMA用药浓度进行后续实验;与对照组比较,低氟组、高氟组MC3T3E1成骨细胞中NO含量增加(P<0.05),低氟+L-NMMA组中NO含量低于低氟组(P<0.05),高氟+L-NMMA组细胞中NO含量低于高氟组(P<0.05);与对照组相比,高氟组MC3T3E1成骨细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);与高氟组比较,高氟+L-NMMA组细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论过量氟可致MC3T3E1成骨细胞损伤、iNOS蛋白和mRNA表达增强、细胞中NO含量增加,L-NMMA与氟共培养后可减弱这一效应,提示L-NMMA对过量氟所致MC3T3E1成骨细胞损伤有一定的保护作用。

L-NMMA对阿尔茨海默病模型大鼠海马齿状回区谷氨酸含量的影响

目的观察一氧化氮(NO)合成酶抑制剂L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的海马齿状回(DG)区的谷氨酸(Glu)含量,以及对其空间学习记忆能力的影响。方法 18只雌性SD大鼠随机分为sham组、AD组、L-NMMA组,每组6只。AD组和L-NMMA组应用双侧卵巢摘除术结合腹腔注射D-半乳糖法制备AD模型,之后在每次Morris水迷宫(MWM)训练前向L-NMMA组腹腔注射L-NMMA。利用高效液相色谱分析法及脑部微量透析法,检测大鼠海马DG区Glu的含量,通过MWM检测大鼠的空间学习记忆能力。向大鼠DG区注射L-NMMA,观察其对AD大鼠的学习记忆行为及大鼠DG区Glu含量的影响。结果 3组大鼠Glu的基础含量差异无统计学意义(均P>0.05)。AD组逃避潜伏期显著延长,AD组穿越原平台区次数明显减少(均P<0.05);L-NMMA组与AD组比较穿越原站台区的次数明显增加,逃避潜伏期明显缩短,大鼠空间学习记忆能力明显改善(均P<0.05)。sham组和L-NMMA组Glu含量,在训练的第2、3天明显增加(均P<0.05),其后又回到训练前水平;AD组Glu含量在训练过程中均明显增加(均P<0.05)。结论 L-NMMA可通过恢复空间学习过程中的海马DG区Glu的反应,改善AD大鼠的空间学习记忆功能。

L-NMMA对颞下颌关节骨关节病软骨细胞凋亡的影响

目的:研究L-NMMA在TMJOA发生发展过程中对关节软骨细胞凋亡的影响,探讨其对TMJOA的治疗作用。方法:采用山羊作为实验动物,以关节上腔内注射胶原酶制造TMJOA动物模型,制造模型后第4周起,在左侧关节注射L-NMMA,右侧注射生理盐水作为对照。8周时取关节标本,TUNEL染色观察软骨细胞凋亡。结果:两侧软骨细胞凋亡率有明显差异,实验侧细胞凋亡率低于对照侧。结论:L-NMMA在TMJOA发生发展过程中,对软骨细胞的凋亡起着明显的抑制作用。

L-NMMA对大鼠单侧睾丸扭转后对侧睾丸生精功能的保护作用

目的:探讨N-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)对大鼠单侧睾丸扭转后对侧睾丸生精功能的保护作用。方法:42只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术组、安慰剂组和L-NMMA组。建立左侧睾丸扭转模型。安慰剂组和L-NMMA组大鼠分别于扭转复位前30min通过尾静脉缓慢推注生理盐水和L-NMMA。三组大鼠分别于术后1周、2个月时处死7只,即刻采集各组大鼠未扭转侧睾丸标本,测定睾丸组织丙二醛(MDA)水平,同时进行组织病理学观察。结果:与安慰剂组相比,L-NMMA组1周时MDA值明显下降,平均曲细精管直径明显升高,而睾丸结构评分则明显偏低(P<0.05);2个月时主要表现在生精上皮层数和平均曲细精管直径较高,睾丸结构评分较低,两组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论:L-NMMA可以减轻大鼠单侧睾丸扭转后对侧睾丸的早期损害,对晚期对侧睾丸的生精功能具有一定的保护作用。

单侧睾丸扭转对未扭转侧睾丸的影响及L-NMMA的保护作用

目的:探讨大鼠单侧睾丸扭转对未扭转侧睾丸生精功能的影响及N-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)对未扭转侧睾丸早期损伤的保护作用。方法:21只健康雄性青春期前SD大鼠随机均分为假手术对照组(A组,n=7)、睾丸扭转复位组(B组,n=7)和睾丸扭转复位+静脉注射L-NMMA组(C组,n=7)。按Turner法建立睾丸扭转模型,喂养至术后7 d时处死,即刻采集各组大鼠未扭转侧睾丸标本,测定睾丸组织丙二醛(MDA)水平、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和白细胞介素-6(IL-6)含量,同时进行组织病理学观察。结果:与B组相比,C组MDA值、NO、NOS、IL-6含量明显下降,病理学上表现为平均曲细精管直径明显升高,而睾丸结构评分则明显偏低,两组间比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:L-NMMA通过抑制NO及NOS的产生,减轻大鼠单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸的早期损害。

L-NMMA对鸡球虫早熟弱毒疫苗免疫鸡增重的影响

为了研究鸡球虫早熟弱毒疫苗对免疫鸡增重的影响及一氧化氮合成酶抑制剂(L-NMMA)对免疫鸡增重和免疫效果的影响。取40只SPF雏鸡,分为空白对照组(C1、C2)和单剂量重复接种组(T1、T2),T1、T2组按推荐免疫剂量单剂量重复接种鸡球虫早熟弱毒疫苗,C1和T1、C2和T2分别于二次接种后第7、14天逐只空腹称重,剖检记录十二指肠、空肠和盲肠病变记分,取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、肌胃、十二指肠、空肠和盲肠进行病理组织学检查。另选取40只SPF雏鸡,分为空白对照组C20、攻毒对照组T21、免疫对照组T22和免疫加药组T23,T22和T23按推荐免疫剂量两次免疫鸡球虫早熟弱毒疫苗,T23在免疫的同时腹腔注射L-NMMA,二免后第14天T21、T22和T23均接种鸡球虫混合强毒,测定SPF雏鸡平均增重、相对增重、肠道(十二指肠、空肠和盲肠)病变记分、病变记分减少率(RLS)、血便记分、死亡率及卵囊产量等指标。结果显示,接种组的平均增重显著低于未接种组(P<0.05),接种组的十二指肠、空肠和盲肠有轻微病变且黏膜上皮细胞均有不同程度损伤和脱落;免疫加L-NMMA组一免、二免后及攻毒后试验鸡的平均增重均极显著高于免疫攻毒对照组(P<0.01),且与空白对照组鸡的平均增重无显著差异(P>0.05),且免疫对照组和免疫加药组肠道病变记分和卵囊产量无显著差异(P>0.05)。说明鸡球虫早熟弱毒疫苗对雏鸡肠道有轻微损伤,且对鸡增重有一定影响;L-NMMA可降低鸡球虫早熟弱毒疫苗对试验鸡增重的影响,且不影响疫苗的免疫效果。

L-单甲基-精氨酸对兔实验性膝关节骨关节炎Caspases-3、Bax和Bcl-2的影响

目的:阐明L-单甲基-精氨酸(L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA)对兔实验性膝关节骨关节炎关节软骨细胞凋亡的影响机制。方法:选取30只实验性大白兔随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、L-NMMA低剂量治疗组(C组)、L-NMMA中剂量治疗组(D组)和L-NMMA高剂量治疗组(E组),总共5个组,每组6只。采用原位凋亡染色(TUNEL)和流式细胞术检测软骨细胞的凋亡状况;采用蛋白质印迹(western-bloting)法检测各组软骨组织半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspases-3)的表达;采用免疫组织化学方法检测软骨组织Bcl-2相关X蛋白(Human Bcl-2 associated X protein,Bax)和重组人B细胞淋巴瘤因子2(B-Cell Lymphoma-2,Bcl-2)的表达。结果:(1)模型组兔关节软骨细胞的凋亡率和凋亡指数明显高于正常组(P<0.01),且随着L-NMMA治疗浓度的提高,凋亡率和凋亡指数明显下降(P<0.05);(2)模型组兔关节软骨组织Caspases-3的表达水平明显高于正常组(P<0.01),随着L-NMMA治疗浓度提高,Caspases-3表达水平明显下降(P<0.05);(3)模型组兔关节软骨组织Bax的表达水平明显高于正常组(P<0.01),随着L-NMMA治疗浓度提高,Bax的表达水平明显下降(P<0.05);模型组兔关节软骨组织Bcl-2的表达水平与正常组无明显差异性(P>0.05),随着L-NMMA治疗浓度的提高,Bcl-2的表达水平明显上升(P<0.05);随着L-NMMA治疗浓度的提高,Bcl-2/Bax数值明显上升(P<0.05)。结论:L-NMMA可明显降低关节软骨组织Caspases-3的表达水平,可能通过上调Bcl-2/Bax的数值而抑制关节软骨细胞的凋亡,从而为发现阻止OA病变进展的新治疗方法提供实验依据。

氮甲基左旋精氨酸对大鼠油酸型急性肺损伤时一氧化氮与丙二醛的影响及其保护作用的实验研究

目的 研究氮甲基左旋精氨酸 (N -momonethyi -L -arginine ,L -NMMA)对大鼠油酸型急性肺损伤 (ALI)时一氧化氮 (NitricOxide ,NO)与丙二醛 (Malondialdehyde ,MDA)的影响及其保护作用。方法 以 30只Wistar大鼠为实验动物 ,用油酸建立ALI的动物模型。把实验动物随机分为 3组 :正常组、损伤组和L -NMMA组 (以下简称为用药组 )。观察肺组织病理组织学改变、动脉血氧分压 (PaO2 )、肺水含量及动脉血浆中NO与MDA的变化。结果 用药组与损伤组比较 ,肺间质充血、出血、炎症、肺泡水肿明显减轻 ,而且未见透明膜形成 ;用药组与损伤组比较 ,动脉PaO2 明显提高 (P <0 0 1) ,而肺水含量明显减少(P <0 0 5 ) ;血浆中NO与MDA水平用药组与损伤组比较明显降低 (P <0 0 1)。结论 L -NMMA是通过抑制大量的NO和氧自由基的产生而对油酸型ALI起保护作用。

IL—1及L—NMMA对兔髁状突软骨细胞NO生成和iNOS表达的影响

目的 观察白细胞介素-1(IL-1)和L-单甲基精氨酸(L-NMMA)对兔髁状突软骨细胞一氧化氮(NO)合成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响。方法 用硝酸还原酶法和RT-PCR反应分别检测软骨细胞培养上清液中NO浓度和细胞内iNOS mRNA表达的变化。结果 单独使用IL-1,软骨细胞培养液中NO水平和iNOS表达水平显著升高,配伍加入L-NMMA能有效降低由于IL-1刺激引起的NO水平升高,但不能降低iNOS表达的升高幅度。结论 IL-1能显著增加体外培养的兔髁状突软骨细胞iNOS的表达而促进NO的生成,而L-NMMA对这种效应有明显抑制作用。

一氧化氮对肿瘤细胞辐射敏感性的影响研究

调节肿瘤细胞中一氧化氮(Nitrogenmonoxide,NO)的合成量,观察NO对细胞辐射敏感性的影响。结果显示乏氧和L-甲基盐酸精氨酸(L-NG-Monomethylargininehydrochloride,L-NMMA)作用均可显著抑制NO的合成,但对一氧化氮合酶(Induciblenitrogenmonoxidesynthase,iNOS)活性无显著影响;NO可以增强肿瘤细胞对射线的敏感性也增强,但两者变化并非线性相关;乏氧和L-NMMA作用抑制肿瘤细胞中NO的合成,会降低细胞对射线的敏感性;同母本细胞相比,基因转染建立NO含量较高的肿瘤细胞,氧增比(OxygenEnhancementRatio,ORE)下降,提示NO参与射线引起的细胞损伤。

豚鼠耳蜗外毛细胞的一氧化氮定量分析

目的:为了观察一氧化氮底物左旋精氨酸(L-arginie)和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对豚鼠耳蜗外毛细胞一氧化氮的影响。方法:应用新的荧光染料4,5二氨基乙酰乙酸荧光素(4,5-diaminofluorescein diacetate,DAF-2DA)测定豚鼠耳蜗外毛细胞内一氧化氮的含量。结果:发现加左旋精氨酸后外毛细胞的荧光灰度值比正常外毛细胞的灰度值升高。而加左旋硝基精氨酸甲酯后,外毛细胞的荧光灰度值比正常外毛细胞的灰度值降低。结论:进一步证明豚鼠耳蜗外毛细胞内存在一氧化氮。

神经组织NO状况与其兴奋过程的强度和时间的关系

应用NOS抑制剂(L-NMMA)阻断牛蛙坐骨神经干的NO合成代谢使神经组织NO缺落后,观察不同手段处理对神经组织兴奋过程的强度因素和时间因素的影响规律。用不同浓度L-NMMA液浸泡牛蛙坐骨神经干30min后,以改变波宽的选频法,观察其对动作电位幅值、上升斜率及下降斜率的影响。结果表明,改变波宽的选频法,其坐骨神经干动作电位的削弱程度与L-NMMA浓度呈正相关。

药物对青春期前大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸生精功能的影响

目的探讨药物对青春期前大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸在青春期后的组织学以及附睾精子生成的影响。方法将28只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(A组,n=7)、睾丸扭转复位组(B组,n=7)、N-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)组(C组,n=7)和环孢素组(D组,n=7)。按Turner法建立左侧睾丸扭转模型,并做相应的药物处理,喂养至术后8周时处死,取右侧睾丸标本行组织病理学观察,同时取右侧附睾尾部行精子计数及活动率测定。结果与B组相比,C组和D组生精上皮层数增多,平均曲细精管直径(MSTD)增大,睾丸组织结构评分降低,同时附睾精子密度与活动率明显升高,其差异有显著性(P<0.05)。结论 L-NMMA和环孢素能够减轻青春期前大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸组织损害,使附睾精子生成显著增多。

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α表达的信号通路研究

目的研究体外常氧环境下脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的相关信号通路。方法以LPS单独或联合NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶(SSZ)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-单甲基精氨酸(L-NMMA)作用于BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1αmRNA的变化,用免疫细胞化学法检测HIF-1α蛋白的变化,用Griess反应检测培养上清中亚硝酸盐浓度的变化。结果LPS作用于小鼠巨噬细胞10h后,HIF-1αmRNA水平无明显变化(P>0.05),HIF-1α蛋白水平则明显增加(P<0.05)。SSZ和L-NMMA组HIF-1α蛋白的表达则明显低于LPS组(P均<0.05)。与对照组相比,LPS可明显增加巨噬细胞NO的生成(P<0.05),SSZ则可明显抑制LPS诱导的NO的产生(P<0.05)。结论LPS可通过NF-κB及iNOS等转录后信号途径上调HIF-1α的表达。

一氧化氮合酶抑制剂对cobratoxin镇痛作用的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与cobratoxin(CTX)镇痛作用间的关系。方法采用小鼠醋酸致痛和热板致痛实验方法,观察NOS抑制剂氮-单甲基-左旋精氨酸(L-NMMA)对CTX镇痛作用的影响。结果在小鼠醋酸致痛和热板致痛实验中,腹腔注射(ip)CTX(30、45、68μg/kg)呈剂量依赖性的镇痛作用,L-NMMA(5、10mg/kg,ip)与CTX(45μg/kg)合用,对后者表现出剂量依赖性的镇痛促进作用。结论CTX(ip)的镇痛作用呈剂量依赖性,L-NMMA(ip)与CTX合用,对CTX表现剂量依赖性的镇痛促进作用,提示CTX的镇痛和NOS抑制剂之间存在一定的相互作用。