2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的酶法合成及其应用研究进展

2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(2-O-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid,AA-2G)不仅稳定性强且保留了L-抗坏血酸(L-ascorbic acid,L-AA)的大部分生理活性,是L-AA最好的替代品。体外酶法合成AA-2G具有经济、快速、绿色和安全等显著优势,是规模化生产AA-2G的可行方法。该文综述体外酶法合成AA-2G的研究进展,重点梳理环糊精糖基转移酶和蔗糖磷酸化酶合成AA-2G的研究现状,并对AA-2G的功能及应用前景进行讨论和展望。

苯丙氨酸解氨酶合成L-2-氯苯丙氨酸的研究

L-2-氯苯丙氨酸要求旋光对映体过量(ee)≥98%,导致使用化学拆分法合成L-2-氯苯丙氨酸的收率不足50%。为提高收率,文章采用具有立体专一性的苯丙氨酸解氨酶(PAL),催化邻氯肉桂酸与氨合成L-2-氯苯丙氨酸,旋光对映体过量(ee)>99%。通过考察不同形态PAL酶的稳定性,研究得出全细胞冻融法制作的PAL酶稳定性较好,结合氮气保护,反应80 h依然能保留62%的酶活。同时,优化PAL酶催化反应的pH、温度、酶用量,确定最佳条件后,结合分段补料的方式进行酶催化反应,最终使L-2-氯苯丙氨酸的累积量达到了68.5 g/L,转化率达到了97.8%。该技术合成L-2-氯苯丙氨酸的产量和收率较高,有效降低了成本,提升了L-2-氯苯丙氨酸的市场价值。

新组合菌系SCB329-SCB933利用L-山梨糖发酵产生维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸的研究 Ⅰ.新组合菌系SCB329-SCB933的生物学特性

采用紫外照射、化学诱变和原生质融合等方法选育到一株性状更优良的突变株SCB329,并与新筛选的一株芽孢杆菌SCB933搭配组成新的组合菌系。产酸小菌SCB329与其亲本菌株氧化葡萄糖酸杆菌性状相似。伴生大菌SCB933属苏芸金芽孢杆菌（B.thuringiensis）。新组合菌系利用L-山梨糖的发酵液提取后经纸层析,元素分析和红外吸收光谱等项鉴定,其发酵产物确系2-酮基-L-古龙酸,对新组合菌系的生物学特性也进行了研究。

丝瓜叶成分L-6a对BALB/C鼠产生IL-1、TNF_α及IL-2的影响

目的 :研究丝瓜叶成分L 6a对BALB/C小鼠产生IL 1、TNFα 及IL 2的影响。方法 :IL 1采用胸腺细胞生物法测定 ;TNFα 采用L92 9细胞生物法测定 ;IL 2采用CTLL细胞生物法测定。结果 :丝瓜叶成分L 6a对LPS刺激BALB/C小鼠PM产生IL 1及TNFα。 2～ 5 0 μg·ml 1范围内 ,促进IL 1及TNFα 的产生 ,促进IL 1作用在 10 μg·ml 1时达高峰 (P <0 0 1) ;L 6a在 0 2～ 5 0 μg·ml 1范围内 ,对于PHA刺激BALB/C小鼠脾细胞产生IL 2有促进作用 ,在 2 μg·ml 1时达高峰 (P <0 0 1)。结论 :L 6a在体外对BALB/C小鼠产生IL 1、TNFα 及IL

L-肉碱对H_2O_2诱导氧化应激FHM细胞的影响

[目的]本文旨在研究L-肉碱对氧化应激状态下胖头鱥肌肉细胞系(fathead minnow muscle cell line,FHM)细胞活力、脂质过氧化及抗氧化功能的影响。[方法]以FHM细胞为研究对象,以H_2O_2为氧化应激因子,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度L-肉碱(0.001、0.01、0.1、0.5、1.0和5.0 mmol·L^(-1))预处理6 h分别对0.2和0.6 mmol·L^(-1)H_2O_2诱导的细胞氧化应激活力的影响,并采用生物化学方法检测L-肉碱预处理对氧化应激FHM细胞中脂质过氧化程度及抗氧化酶的变化。[结果]0.2和0.6 mmol·L^(-1)H_2O_2刺激FHM细胞1 h,细胞活力分别降低至72%和58%。与H_2O_2组相比,0.001~1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱预处理使低氧化水平(0.6 mmol·L^(-1)H_2O_2)的FHM细胞活力显著升高;且0.001、0.5和1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱均显著降低不同氧化水平细胞中MDA含量。与0.2 mmol·L^(-1)H_2O_2组相比,0.001、0.01、0.1和1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提高细胞T-GSH含量;0.001、0.01和1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提高细胞中T-SOD活性;0.5~5.0 mmol·L^(-1)L-肉碱组细胞中CAT活性显著增加;添加0.001~1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提高细胞GPx活性,但γ-GCS活性只有0.5 mmol·L^(-1)L-肉碱组显著升高。与0.6 mmol·L^(-1)H_2O_2组相比,0.001~1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提高细胞中T-GSH含量,0.01~5.0 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提高细胞中CAT活性,0.001 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提高细胞T-SOD活性,0.01 mmol·L^(-1)L-肉碱显著提升细胞γ-GCS活性;同时,L-肉碱的处理显著增强细胞GPx活性。[结论]高浓度(0.6 mmol·L^(-1))H_2O_2对FHM细胞的损害较大;0.001~1.0 mmol·L^(-1)L-肉碱可提高FHM细胞活力和抗氧化能力,并对细胞抵抗H_2O_2诱导的不同程度氧化应激有积极作用。

MicroRNA-1在心肌肥大中对L-型钙通道β_2亚基的负性调控作用

目的:研究微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)在心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)的负性调控作用及机制。方法:应用异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;采用HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用数据库microCosm预测miR-1的靶基因;构建含Cavβ23’UTR报告基因质粒和miR-1瞬时共转染HEK293细胞,验证Cavβ2为miR-1靶基因;应用qRT-PCR或Western blot方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、miR-1和Cavβ2mRNA和蛋白表达水平;转染miR-1模拟物上调miR-1或应用Cavβ2RNAi干扰Cavβ2蛋白的表达,观察对心肌细胞肥大的影响。结果:①在ISO诱导的心肌细胞肥大中,miR-1表达显著下降;应用miR-1 mimic转染心肌细胞使miR-1表达上调,心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达均显著低于ISO组(P<0.05)。②网络数据库预测显示Cavβ2为miR-1的潜在靶点;将miR-1和含Cavβ23’UTR报告基因质粒共转染HEK293细胞,其萤光值显著降低(P<0.01)。转染miR-1 mimic使心肌细胞miR-1表达上调,可以明显抑制Cavβ2蛋白的表达。③在ISO诱导心肌细胞肥大中Cavβ2表达较对照组显著增加;应用RNAi技术下调Cavβ2表达可明显抑制心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加。结论:预测并验证L-型钙通道β2亚基为miR-1的靶基因。miR-1可能通过抑制其靶基因Cavβ2蛋白的表达,降低细胞内钙离子浓度,抑制心肌细胞肥大。

基于自组装L-半胱氨酸与纳米金的H_2O_2生物传感器

通过在金电极表面自组装L-半胱氨酸，再分别吸附纳米金与辣根过氧化物酶（HRP）的方法，成功的制备了H2O2生物传感器。采用循环伏安法考察了传感器的电化学特性，电极对H202在浓度为2．1×10^-6～3．6×10^-3mol／L的范围内呈线性，检出限为8．9×10^-7mol／L（S／N=3）。该传感器具有稳定性好，线性范围宽，检出限低等优点，同时具有一定的抗干扰能力。

L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁的合成

以Ｌ抗坏血酸为基本原料合成Ｌ抗坏血酸２磷酸酯镁。对两种合成方法直接酰化法和基团保护法作实验比较和改进。直接酰化法中，采用混合碱（ 包括氧化镁） 可使磷酰化与成盐反应合并为一步进行，并能提高产率，而采用基团保护法能取得最佳的合成效果。

β_2整合素及L-选择素粘附分子在恶性血液病表达特征的研究

目的 :观察β2 整合素 (CD11a、CD11b)及选择素 (CD62L)在恶性血液病的表达及其与细胞分型 ,临床特征的关系。方法 :用流式细胞仪检测 2 5例急性髓系白血病 (acutemyeloidleukemia ,AML) ,18例急性淋巴系白血病(acutelymphocyticleukemia ,ALL) ,10例慢性粒细胞性白血病 (chronicmyelocyticleukemia ,CML) ,15例多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma ,MM ) ,15例非何杰金氏淋巴瘤 (non Hodgkinslymphoma ,NHL)及 15例正常人骨髓单个核细胞CD11a、CD11b及CD62L的表达。结果 :(1)与正常人骨髓单个核细胞相比 ,多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤三种粘附分子表达无明显改变。急性髓性白血病细胞表面粘附分子CD11b、CD62L表达下降 ,急性淋巴细胞白血病细胞CD11a、CD11b表达下降而CD62L表达则增加 ,慢性粒细胞性白血病细胞CD11b增加。 (2 )部分粘附分子与细胞类型有关 ,CD11b、CD62L在M1～M3 的表达低于在M4 、M5型表达 ,CD11a在B ALL表达明显低于T ALL表达。 (3)对于AML细胞三种粘附分子CD62L、CD11a、CD11b之间的有明显相关性 (P <0 0 5 )。 (4)粘附分子与部分临床特征有相关性。结论 :不同的恶性血液病粘附分子CD11a、CD11b、CD62L的表达存在不同的改变并与细胞类型、临床特征有关。

L-阿拉伯糖对2型糖尿病大鼠肝损伤的干预作用

采用饲喂高糖高脂饲料结合注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法制作2型糖尿病大鼠的模型,灌胃L-阿拉伯糖4周后,通过测定实验大鼠肝质量、肝脏指数、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平、血清中丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)的活力,观察L-阿拉伯糖对2型糖尿病大鼠肝脏损伤的干预效果.结果表明:L-阿拉伯糖可明显改善糖尿病大鼠的空腹血糖(FBG),显著降低血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活力,且降低程度与灌胃剂量具有正相关性;说明L-阿拉伯糖可以减轻糖尿病大鼠肝脏组织的损伤,具有一定的护肝作用.

胆红素对L-02细胞凋亡以及Bcl-2及Bax体外表达影响的研究

目的探讨胆红素对健康人肝细胞系L-02凋亡的影响及Bcl-2、Bax基因对凋亡过程的调节。方法将不同浓度的胆红素(终浓度分别为0、100、150、200、250、300mg/L)作用于体外培养的健康人肝细胞L-02,采用流式细胞仪和碘化丙啶(PI)双标等技术观察细胞的凋亡率和免疫组织化学方法检测细胞凋亡状态及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 Bcl-2蛋白的表达,对照组为阴性表达,低浓度组弱阳性表达,高浓度组强阳性表达。Bax蛋白的表达,对照组可见表达,低浓度组表达增多,高浓度组明显增多,强阳性表达。表明Bcl-2蛋白表达越强,凋亡指数越少;Bax蛋白表达越强,凋亡指数越强。结论 Bcl-2、Bax蛋白均参与了胆红素所诱导的L-02细胞凋亡的调节,并在细胞凋亡的发生、发展中起重要作用。

地黄煎剂消退L-甲状腺素诱发的大鼠心肌肥厚并抑制其升高的心、脑线粒体Ca^(2+),Mg^(2+)-ATP酶活力

Ｌ甲状腺素４ｍｇ／ｋｇ·ｄ连续ｐｏ７ｄ诱发大鼠心肌肥厚和心、脑线粒体Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活力显著升高。经地黄４ｇ／ｋｇ·ｄｐｏ治疗３ｄ后，心肌肥厚及其心、脑升高的Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活力显著降低，但未恢复至正常。结论：地黄消退Ｌ甲状腺素诱发的大鼠缺血性心肌肥厚并抑制升高的心脑线粒体Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活力，保护心脑组织避免ＡＴＰ耗竭和缺血损伤。

L-选择素 整合素αL及整合素β2的表达与TA2小鼠乳腺癌多器官转移的关系研究

目的:探讨L-选择素、整合素αL及整合素β2的表达与TA2小鼠乳腺癌多器官转移的关系。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院病理科保存的高转移性(可发生多器官转移,A组)、低转移性(无远处转移,B组)TA2小鼠乳腺癌及A组肺、肝和脾转移瘤标本,观察肿瘤特征,利用免疫组化方法检测原发瘤及转移瘤组织中整合素αL、整合素β2、L-选择素的表达情况,并利用Real-time PCR方法检测A组和B组原发瘤组织中上述分子mRNA的相对表达水平。结果:A组全组原发肿瘤均见明显出血和坏死,均为低分化或未分化癌,可观察到血管生成拟态,均出现了明显的肺、肝和脾转移。A组和B组原发肿瘤组织中整合素αL和L-选择素的平均阳性细胞百分比分别为24.81% vs 10.47%和39.81%vs 16.75%,二者在A组中的表达均显著高于B组(Z=-2.31,Z=-2.14;P<0.05),而整合素β2的表达在A组与B组间无显著性差异;A组原发瘤及其肺、肝和脾转移瘤中L-选择素平均阳性细胞百分比分别为39.81%、39.07%、62.09%和55.51%,其中肝转移瘤中平均阳性细胞百分比显著高于原发瘤(Z=-2.24,P=0.025),而整合素αL、β2平均阳性细胞百分比在转移瘤与原发瘤间均无显著性差异。整合素αL和L-选择素mRNA的相对表达水平在A组原发瘤显著高于B组(Z=-3.47,Z=-3.32;P<0.01)。结论:TA2小鼠乳腺癌细胞可表达L-选择素、整合素αL和β2,其中L-选择素的表达可能与其肝转移有关。

[Cu(L-Ile)(Phen)(H_2O)(ClO_4)]的合成、结构及稳定性研究

合成了三元混配配合物[Cu(L-Ile)(Phen)(H_2O)(ClO_4)](L-Ile=L=异亮氨酸,phen=1,10-邻菲咯啉),通过红外光谱、紫外-可见光谱、摩尔电导率、X射线单晶结构分析,对配合物进行了表征。该晶体属单斜晶系,P2_1空间群,晶胞参数:a=1.1704(5)nm,b=0.8090(5)nm,c=2.1822(5)nm,β=98.061(5)°,Z=2,D_x=1.60Mg·m^(-3),R_1=0.0462,wR_2=0.1225。每个配合物分子中Cu(Ⅱ)离子与一个L-Ile(N,O)配体、一个Phen(N,N)配体、一个H_2O(O)配体及一个Cl_O^-(O)形成六配位的畸变八面体构型。本文还用电位滴定法测定了配合物的稳定常数,结果表明,配合物具有高的稳定性。

L-半胱氨酸辅助CuGaS2微球的溶剂热合成与表征

以二水氯化铜（CuCl2.2H2O）和三氯化镓（GaCl3）为先驱体,生物分子L-半胱氨酸（C3H7NO2S）为硫源和模板剂,通过溶剂热法合成了CuGaS2微球。所得样品用XRD,FESEM,EDS,XPS,TEM,HRTEM和SAED进行表征。结果表明,在190℃反应24 h可得到结晶良好、形貌规整的四方晶系CuGaS2微球,直径为2-4μm。经计算,其晶胞参数为a=0.5355 nm和c=1.0478 nm。根据实验结果,提出了CuGaS2微球可能的生长机理。

L-2-氨基丁酸大肠杆菌生产菌株的构建

L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli) THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilv A2和ilv A4在THRD中过表达,菌株THRD/p Trc99a-ilv A2在5 L发酵罐中分批补料发酵,2-酮基丁酸积累量达到18 g/L。然后,分别与ilv A2串联表达酪氨酸转氨酶、谷氨酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶编码基因tyr B、gdh和bcdBS,将L-2-酮基丁酸转化为L-2-氨基丁酸,菌株THRD/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量达到19 g/L。最后,研究了阻断L-苏氨酸输出途径对发酵的影响,菌株THRDΔrht C/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量提升至22 g/L。因此,通过代谢途径延伸可以有效地将L-苏氨酸生产菌株转变为L-2-氨基丁酸生产菌株。该研究为L-2-氨基丁酸高产菌株的构建奠定了基础,且对其他延伸代谢途径获得新产品的代谢工程研究提供了参考。

两相体系生物转化L-苯丙氨酸生成2-苯乙醇

研究了水/有机溶剂两相体系中,酵母细胞转化L-苯丙氨酸(L-phe)生成2-苯乙醇(PEA)的过程。菌种选择表明酿酒酵母CICIM Y0086(T)的转化能力要高于马克斯克鲁维酵母AS.2.1440,有机溶剂的选择表明,在实验使用的4种有机溶剂中,油酸为该反应最适有机溶剂。当初始底物浓度为6 g/L、水和油酸的相体积比为1∶1、反应温度30℃和pH值4.0、装液量20 mL/250 mL的条件下,转化48 h,产物浓度达到3.0 g/L,比单水相提高了50%。

二(2-乙基己基)磷酸萃取L-异亮氨酸的研究

以二(2-乙基己基)磷酸(D2EHPA)-正辛烷及D2EHPA-正辛醇萃取L-异亮氨酸为对象，研究了D2EHPA浓度、L-异亮氨酸初始浓度以及pH值对萃取平衡分配系数的影响。结果表明，在实验研究涉及的pH值范围内，分配系数先随pH的增加而增大，在3.5<pH<5区域，pH值对分配系数的影响较小。分配系数还随D2EHPA浓度的增加而增大。正辛醇加入有机相，萃取分配系数增大。D2EHPA与L-异亮氨酸生成萃合比为1∶1或2∶1的萃合物。证实了在D2EHPA萃取L-异亮氨酸的过程中存在着质子转移反应。建立的萃取平衡分配系数关联式的拟合精度是令人满意的。