大鼠脑干面口部运动神经元与5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样和Gly样阳性终末间的突触联系

为了观察５－羟色胺（５－ＨＴ）样、Ｐ物质（ＳＰ）样、亮氨酸－脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）样、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）样和甘氨酸（Ｇｌｙ）样阳性终末与脑干面口部运动核（三叉神经运动核、面神经核和舌下神经核）间的突触联系，用ＨＲＰ逆行追踪与免疫组织化学染色相结合的双标技术，在电镜下对５－ＨＴ样、ＳＰ样、Ｌ－ＥＮＫ样、ＧＡＢＡ样和Ｇｌｙ样阳性终末与ＨＲＰ逆标面口部运动神经元间的突触联系进行了观察。５－ＨＴ样、ＳＰ样、Ｌ－ＥＮＫ样、ＧＡＢＡ样和Ｇｌｙ样阳性终末在脑干面口部运动核内呈均匀分布，没有区域特异性。将ＨＲＰ注入面口部肌肉或相应的周围神经后，ＨＲＰ逆标神经元见于脑干运动核不同部位内支配相应肌肉的运动神经元。５－ＨＴ样、ＳＰ样和Ｌ－ＥＮＫ样阳性终末主要与ＨＲＰ逆标运动神经元的树突形成非对称性的轴－树突触；ＧＡＢＡ样和Ｇｌｙ样阳性终末则主要与ＨＲＰ逆标运动神经元的树突形成对称性的轴－树突触；偶见上述阳性轴突终末与ＨＲＰ逆标运动神经元的胞体形成轴－体突触。结果提示：主要来自脑干运动前神经元的５－ＨＴ样。

慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用。方法:用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢(海马CA1区、齿状回、大脑皮层)L-ENK的变化。结果:大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响。结论:逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优。

外周炎性刺激条件下大鼠脊髓背角PPE mRNA及L-ENK样品和μ阿片受体样阳性结构的变化

以鹿角菜胶（ＣＡＲ）注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型，分别于ＣＡＲ刺激后６、１２ｈ和１、３ｄ处死动物，对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下，用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ阳性神经元、亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和μ阿片受体（ＭＯＲ）样阳性结构在大鼠脊髓背角（ＳＤＨ）的分布和变化。对照组大鼠ＳＤＨ内可见到大量ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元，这些阳性神经元主要分布于Ⅰ、Ⅱ层和Ⅴ、Ⅵ层，ＣＡＲ刺激后６ｈ，刺激侧ＳＤＨ中ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元的数量明显增多，１２ｈ和１ｄ达到最高水平，３ｄ时略有下降，但仍高于正常水平。Ｌ－ＥＮＫ样阳性纤维和终末主要分布于正常大鼠ＳＤＨ的Ⅰ、Ⅱ层，ＣＡＲ刺激后１ｄ，Ｌ－ＥＮＫ样阳性结构在刺激侧ＳＤＨ中的密度略有升高，３ｄ后下降直至低于正常水平。ＭＯＲ阳性胞体和纤维主要分布于ＳＤＨ的Ⅱ层，ＣＡＲ刺激后１ｄ，刺激侧Ⅱ层中ＭＯＲ阳性结构明显增加，并持续到刺激后３ｄ。上述结果提示阿片类物质在伤害性信息调控中具有重要作用。

大鼠脑桥背侧被盖区含L-ENK和SP的神经元

本实验用成年雄性Wistar大鼠,以免疫细胞化学法、计算机图象分析法研究了大鼠脑桥背侧被盖区含亮氨酸脑啡肽(L-ENK)和P物质(SP)神经元的分布和形态。含L-ENK的神经元分布于Gudden背侧被盖核的背部和腹部(DDT、VDT),以及外背侧被盖核(LDT)。DDT内含L-ENK的细胞多而密集,周围有深染的神经纤维。胞体形态以圆形和卵圆形为主。随机测量免疫反应阳性细胞,平均等效径为12.18μm。VDT和LDT内含L-ENK细胞少,染色较浅。VDT的胞体为圆形和卵圆形,平均等效径为12.24μm。LDT的胞体为多边形,平均等效径为15.67μm。含SP的神经元仅见于LDT,细胞数量较多,胞体较大,呈多边形,平均等效径是20.39μm。本研究的结果显示:DDT,VDT和LDT各核内含L-ENK神经元的分布密度,细胞形态和大小均有所不同。DDT较密集,LDT细胞较大。LDT内含SP和L-ENK神经元多数可归为两类,含SP的胞体较大含L—ENK的胞体较小。DDT,VDT和LDT不同形态的含肽细胞可能与它们不同的中枢联系和功能有关。

大鼠孤束核中P物质和亮氨酸-脑啡肽样神经元对咽肌运动神经元的调控——PRV和SP及L-ENK免疫荧光双标记法研究

用PRV和SP或L-ENK免疫荧光双标记法研究了大鼠孤束核中SP及L-ENK样神经元对咽肌运动神经元的调控.PRV注射大鼠咽肌后,在孤束核的中介亚核和中间亚核中可见少量PRV和SP或L-ENK双标记.首次证明了大鼠孤束核中的SP及L-ENK样神经元对咽肌运动元的调控.推测孤束核中的SP及L-ENK可能对咽肌运动的精确调控有关.

猫骶髓“内脏面”和Onuf核L-ENK样成分的分布及其来源探讨——免疫组织化学方法研究

本文应用免疫组织化学(PAP)方法,对猫骶髓“内脏面”(后连合核及其两侧的中间带)和Onuf核的L—ENK佯阳性成分的分布进行了观察。发现L—ENK样阳性纤维和终末布满于“内脏面”,特别是密布于后连合核、中间带内侧核、中间带外侧核及与其相邻的侧索。此外Onuf核也可见密布的纤维和终末。在经秋水仙素予处理的动物,L—ENK样细胞也出现于“内脏面”,但以中间带外侧核和后连合核两处较多。Onuf核及后根节均未见L—ENK样细胞。分别横断预、胸、腰髓后,后连合核、中间带外侧核及与其相邻的侧索等处L-ENK样阳性纤维和终末略有减少。切断一侧腰骶神经后根,L—ENK样阳性纤维和终末的分布未见变化。综合本文结果和文献资料,提示骶髓“内脏面”和Onuf核的L—ENK纤维和终末主要来源于脊髓内部固有的L—ENK样神经元;小部分来源于上位脑结构的下行投射。本文不支持来自后根节的周围性来源。

海洛因依赖大鼠中脑腹侧被盖区和伏隔核内L-ENK和生长抑素表达的变化

目的:探讨海洛因依赖大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)和伏隔核(NAc)内亮氨酸脑啡肽(L-ENK)和生长抑素(SS)表达的变化及其可能的机制。方法:成年雄性SD大鼠55只,随机分为正常对照组、盐水对照组及海洛因依赖组。皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,分别于模型建立的第10、17、24、31、38 d取脑组织,应用免疫组织化学SABC法、图像分析法检测VTA和NAc内L-ENK和SS的表达。结果:海洛因依赖组大鼠VTA和NAc中L-ENK和SS阳性细胞免疫反应明显减弱,与正常及盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05);图像分析显示海洛因依赖组L-ENK和SS阳性细胞的平均灰度值增高(P<0.05)。结论:在海洛因依赖期间,大鼠VTA和NAc内L-ENK和SS免疫阳性物质的表达均明显减少,提示海洛因依赖对神经元的神经内分泌功能造成了损伤。

人和鼠脊髓中CCK样、L-Enk样与SP样阳性结构的研究——PAP法

选用雌性Wistar大鼠12只,年龄在2个月以内,体重200g左右;新生儿2例(死亡后2h以内取材)。以过氧化酶-抗过氧化酶法(PAP法),研究了人和鼠脊髓中胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、亮脑啡肽(leucine-enkephalin,L-Enk)和P物质(Substance P,SP)阳性反应结构的分布。

猫骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布和定位投射

应用免疫组织化学和HRP与免疫组织化学双重标记的方法,对骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布及其与副交感节前神经元和向臂旁外侧核及Barrington核投射的二级传入神经元的关系进行了研究。L-ENK样神经元分布于整个“内脏面”上,尤以中间带外侧核和后连合核为密集。在中间带外侧核内,L-ENK样神经元的分布与向盆神经注入HRP后逆行标记的副交感节前神经元的分布位置重叠,能明显地划分为背侧带和外侧带。在Onuf核及其与骶髓副交感核之间的联系细胞桥上首次发现有L-ENK样神经元存在。将HRP注入盆神经结合L-ENK免疫组织化学反应,在骶髓副交感核外侧带和背侧带均发现大量HRP/L-ENK双标细胞。几乎全部HRP标记细胞均为HRP/L-ENK双标细胞,个别双标细胞出现于中间带外侧核的中间带(interband)内。将HRP注入臂旁外侧核或Barrington核结合L-ENK样免疫组织化学反应,在“内脏面”的中间带外侧核、中介核和后连合核处都发现HRP/L-ENK样双标细胞。上述结果证明猫骶髓“内脏面”、Onuf核及联系细胞桥上均有L-ENK样神经元分布,其中“内脏面”向臂旁外侧核或Barrington核投射的二级神经元有一部分含有L-ENK样活性物质,骶髓副交感核的外侧带、背侧带和中间带均有L-ENK样副交感节前神经元。

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核浅层内GABA样、L-ENK样、GlyT2样阳性末梢与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系

应用GFP基因重组病毒标记技术和免疫荧光组织化学技术 ,在荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜下观察了大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核 (Vc)浅层内GABA样、L ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系。结果显示 :①将GFP基因重组Sindibis病毒注入一侧Vc浅层后 ,仅在同侧Vc注射部位附近的Ⅰ～Ⅲ层内观察到 4～ 8个逆标的GFP神经元 ,这些神经元的胞体为小型 (直径≤ 15 μm)圆形、梭形或不规则形 ;②Vc浅层内均可见大量的GABA样、L ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢 ,以Ⅰ和Ⅱ层分布最为密集 ;③GABA样、L ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢分别聚集于GFP标记神经元的胞体或树突周围 ,并与之形成密切接触。以上结果表明 :Vc浅层内GFP神经元可能与GABA能、L ENK能、Gly能阳性纤维和末梢形成突触联系并接受这些抑制性神经末梢的调控。

体复康对运动性疲劳大鼠脑组织L-ENK、DYNA_(1-13)动态变化的影响

采用ABC免疫组织化学法结合图象分析 ,观察中药复方“体复康”对运动性疲劳大鼠不同脑区L ENK、DYNA1 - 1 3的动态变化。结果 :高强度长期 (共 7周 )运动的大鼠 ,安静状态下尾壳核L ENK下降 ;而在此基础上末次急性运动的大鼠 ,L ENK被迅速激活而升高。中药复方“体复康”具有调节L ENK的作用 ,表现在对急性运动中的下调 ,在对慢性运动应激中的上调。运动能激活下丘脑DYNA1 - 1 3,以运动结束后 3 0min最为明显 ;该方药在此强度下对疲劳大鼠恢复过程中的下丘脑DYNA1 - 1 3有一定的下调作用 ,但作用不甚明显。

大鼠小肠血管活性肠肽、P 物质、亮氨酸-脑啡肽和生长抑素的正常分布

本文用免疫细胞化学法(ICC)和放射免疫测定(RIA),对成年大白鼠小肠内血管活性肠肽(VIP)、P 物质(SP)、亮氨酸-脑啡肽(L-Enk)和生长抑素(SOM)进行定性、定位和定量的分析。ICC 结果显示4种肽在小肠分布于肠神经丛和肠道内分泌细胞中。VIP、SP 和 L-Enk 免疫反应性神经元胞体位于肠神经节内,未见 SOM 能神经元。VIP 和 SP 能神经纤维分布于小肠各层。L-Enk 能纤维主要分布在肌间神经丛和环肌层。SOM 免疫阳性纤维主要见于肌间神经丛。除VIP 外,其余3种肽均见于相应的内分泌细胞,后者位于肠绒毛上皮和肠腺上皮细胞之间。4种肽的 RIA(ng/g)分别为:VIP 150.8;SP 60.7;L-Enk 14.1;SOM 4.2。其含量与 ICC阳性反应结构的分布密度相吻合,以 VIP 最高,SP、L-Enk 次之,SOM 仅少量存在于小肠。

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核及三叉神经节内PPTA、CGRP和PPEmRNA及其相应蛋白在面口部炎性刺激时的变化

利用原位杂交技术和免疫组化技术，观察完全福氏佐剂致炎大鼠的三叉神经脊柬核尾侧亚核和／或三叉神经节内SP、CGRP和L-ENK样阳性结构及它们相应的前体PPTAmRNA、CGRPmRNA和PPEmRNA分布状况的动态变化。原位杂交结果显示：PPTAmRNA在三叉神经节与三叉神经脊束核尾侧亚核浅层神经元中的表达于致炎刺激后12h明显增强，分别于1d和4d时达到高峰，21d后恢复正常;CGRPmRNA在三叉神经节神经元中的表达变化与PPTAmRNA者相似;在三叉神经脊束核尾侧亚核浅层PPEmRNA阳性神经元的数量于刺激后12d明显增多，8d到达高速，28d时仍高于正常水平.免疫组织化学结果显示：尾侧亚核浅层SP样阳性纤维和终末的密度在致炎刺激后12h至4d降低，然后逐渐回升到正常水平;而CGRP样阳性纤维和终末的密度在佐剂注射后1d明显降低，8d后恢复正常，14d后又明显高于正常水平;佐剂刺激后1d，L-ENK样阳性纤维和终末的密度明显增加，以后维持正常水平，21d和28d时又低于正常水平.在三叉神经节，SP和CGRP样阳性神经元的数量在致炎刺激后早期明显减少，以后恢复至正常水平且再无明显变化。上述结果表明，在完全福氏佐剂的致炎条件下，SP、CGRP和L-ENK样阳性结构及其相应的mRNA在尾侧亚核浅层和／或三叉神经节存在着不同的时程变化。

足底伤害性刺激条件下大鼠腰骶髓SP、CGRP、L－ENK样神经成分的变化

将１０％福尔马林１５０～２００μｌ注入大鼠一侧后肢足底，用注入等量０．９％生理盐水作为对照，分别于刺激后５、１５、３０、６０、９０、１２０ｍｉｎ和１２、２４、４８ｈ取材，进行免疫组化反应（ＡＢＣ法），观察脊髓腰骶段后角浅层及后连合核区的ＳＰ、ＣＧＲＰ、Ｌ－ＥＮＫ样纤维和终末的分布，并随机抽样进行图像分析．结果显示：在福尔马林刺激后，脊髓后角浅层和后连合核区的ＳＰ、ＣＧＲＰ样阳性纤维和终末在５～６０ｍｉｎ明显减少，而到１．５～１２ｈ却呈增加趋势，１２ｈ后逐渐恢复正常．而Ｌ－ＥＮＫ样纤维和终末始终无明显变化．本文结合文献讨论了上述变化与痛与镇痛机制的关系。

脑干六种神经递质纤维向中缝大核的投射——双重标记法研究

脑干中缝大核是针刺镇痛的重要中枢部位之一。我们过去的工作已证明了其传入纤维的起源，为了继续探讨其传入纤维的递质性质，本实验用大白鼠17只，将微量的WGA-HRP注入中缝大核内，存活24-48小时，向侧脑室注入秋水仙素，24小时后灌注固定，冰冻切片，TMB成色，再经DAB-CoCl2稳定，然后用PAP法分别显示5-HT神经元、P物质神经元，M-ENK神经元，L-ENK神经元，β-EP神经元及SRIF神经元。

大鼠脊髓后角浅层内六种肽类和5-羟色胺的来源及其功能探讨

分别切断大鼠一侧坐骨神经和半横切颈髓上段,用免疫组织化学技术观察了L_(4-6)后角浅层内SP、CCK、SOM、VIP、L-ENK、NT、5-HT等的量的改变。并半横切L_(5)节段的吻、尾侧,观察了NT在同节段内的含量改变。1.切断坐骨神经后,术侧L_(4-6)后角浅层的坐骨神经占位区内SP、CCK、SOM、VIP有不同程度的脱失,SP、CCK最明显。结合文献,作者认为后根节中SP、CCK、SOM、VIP阳性神经元外周突部分分布于外周躯体神经。2.半横切颈髓后,术侧L_(4-5)后角浅层的5-HT阳性反应物基本消失,而L_(6)后角浅层内有少量存留。CCK、L-ENK阳性反庆物在L_(4-6)节段背外侧索中明显减少,但后角浅层只有轻微减少。SOM在术侧后角浅层中也似有轻微减少。这些提示脑结构到脊髓后角浅层的下行纤维中除含有5-HT外还含有一些神经肽。3.L—ENK阳性反应物在切断坐骨神经后轻度增高;SOM无论在切断坐骨神经或半横切劲髓例均变比不大;NT在此两组实验中均无变化,且在L_(5)节段吻、尾侧半切腰髓后L_(5)后角浅层内仍无变化。以上提示分布于后角浅层的某些肽类有一部分直接来自脊髓内甚至同节段内的固有神经元。

亮氨酸脑啡肽样和P物质样免疫反应物在大鼠延髓迷走神经背核簇和网状结构内的分布

用PAP法研究亮氨酸脑啡肽样(L—ENK—LI)和P物质样(SP—LI)免疫反应物在大鼠延髓迷走神经背核簇和网状结构内的分布。证明在孤束核、迷走神经背核、外侧网状核外侧部及其外侧的区域内有大量的L-ENK样终末和纤维,在背侧和腹侧网状核之间的移行区内有中等量的分布,其余区内为少量。L-ENK样胞体在孤束核、咀侧腹外侧网状核、巨细胞网状核的腹侧部和α部、外侧旁巨细胞核以及中缝大核内均有许多分布,在迷走神经背核的尾侧部、背侧和腹侧网状核之间的移行区有中等量,其余区内为少量。SP样反应物的分布与L-ENK样物类似,但其终末和纤维的数量较L-ENK者略少,阳性胞体的数量除了在中缝核及外侧旁巨细胞核内侧端中的量较L-ENK样胞体多以外,在其余区内均较少。

实验性肝硬化血浆内源性阿片肽含量的变化及其意义

目的:通过检测实验性肝硬化各阶段三种内源性阿片肽(EOP)血浆浓度变化,探讨其与肝硬化高动力循环状态及腹水形成的关系.方法:应用放射免疫法测定了四氯化碳(CCl_4)诱发大鼠肝硬化过程中血浆三种EOP的含量变化.结果:结果显示肝硬化腹水组及肝硬化无腹水组血浆亮啡肽(L-ENK)、强啡肽(Dyn Al-13)含量均显著高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),而且升高的水平与肝功能损害的程度呈显著正相关,但血浆β内啡肽(β-EP)的含量在三组中无显著差异(P>0.05).结论:提示肝脏灭活功能受损导致大鼠血浆小分子阿片肽含量升高,后者又是引起实验性肝硬化高动力循环及腹水形成的原因之一.

P物质样、亮氨酸-脑啡肽样及5-羟色胺样免疫反应成分在人胎儿及新生儿Gudden被盖背核的分布及在发育过程中的变化——免疫组织化学技术研究

应用免疫组织化学方法,研究了P物质(SP样)、亮氨酸-脑啡肽(L-Enk)样及5-羟色胺(5-HT)样免疫反应成分在人胎儿(胎龄11.5周至35周)及新生儿(生后2天)脑干Gudden被盖背核的分布及发育过程中的变化。结果发现,SP样、L-Enk样及5-HT样免疫反应成分在Gudden被盖背核内最早出现的时间不同,SP样成分出现最早,SP样免疫反应纤维及终末分布非常密集,且主要分布在核中段的中心部;L-Enk样免疫反应胞体、纤维及终末主要分布在核的周围部,纤维及终末的密度中等,L-Enk样免疫反应细胞量较少;5-HT样免疫反应细胞主要分布在核周围部的内侧区,细胞数量中等。随胎龄的增长,SP样、L-Enk样及5-HT样免疫反应成分在Gudden被盖背核内的分布显示出不同的变化规律。

温针对类风湿关节炎患者血清亮脑啡肽、白细胞介素Ⅱ、NK细胞活性影响

本文采用温针疗法治疗类风湿关节炎（ＲＡ）１６例观察对其血浆亮脑啡肽、白细胞介素Ⅱ、自然杀伤（ＮＫ）细胞活性的影响，探讨温针对ＲＡ疗效与神经内分泌免疫调节机制。温针治疗后，临床取得较满意疗效，证实温针能温通经络、活血化瘀、疏风散寒、消肿止痛。温针治疗前后血浆亮脑啡肽、白细胞介素Ⅱ、ＮＫ细胞活性均有显著性变化，且与临床疗效呈正相关。说明温针的疗效可能与其调节外周血亮脑啡肽和ＲＡ患者机体免疫功能有关。