酶法制备甘油磷酸胆碱的研究

研究了水相体系中磷脂酶A1水解大豆粉末磷脂制备甘油磷酸胆碱(GPC)的可行性,探讨了反应条件对磷脂酰胆碱(PC)转化率和GPC得率的影响。确定磷脂酶A1催化制备GPC的最佳反应条件为:在pH 7的150 mL磷酸盐缓冲溶液中,粉末磷脂添加量5 g、CaC l2添加量0.50 g、酶添加量0.50 mL,温度55℃,反应时间6 h;利用LC-MS分析最佳条件下的反应液,得到PC转化率为98%,GPC得率达到95%;同时验证了在磷脂酶A1催化制备GPC的过程中生成的溶血磷脂(LPC)Sn-2位不饱和脂肪酸发生了酰基转移,转移到Sn-1位。

非水电位滴定法测定甘油磷脂酰胆碱

建立了非水电位滴定测定甘油磷脂酰胆碱(GPC)含量的方法。采用高氯酸标准溶液对GPC样品进行电位滴定,利用二级微商法确定电位滴定终点消耗的高氯酸标准溶液体积从而得出GPC含量,用建立的方法测得自制GPC样品含量为78.73%,其方法精密度RSD为0.048%。该法操作方便、准确度高,适合GPC的快速检测。

大豆粉末磷脂同时制备甘油磷脂酰胆碱和甘油磷脂酰乙醇胺的研究

以大豆粉末磷脂为原料,研究了甲醇钠催化其醇解反应,同时制备含有甘油磷脂酰胆碱(GPC)和甘油磷脂酰乙醇胺(GPE)的混合物。通过探讨大豆粉末磷脂与无水甲醇料液比、催化剂甲醇钠添加量、反应温度、反应时间对反应产物中GPC和GPE得率的影响规律,确定了甲醇钠催化醇解大豆粉末磷脂的最佳反应条件:料液比1∶4,催化剂甲醇钠添加量5%(以大豆粉末磷脂质量计),反应温度35℃,反应时间6 h。在最佳反应条件下,GPC得率为93.60%,GPE得率为88.69%。

醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究

探讨了在醇相体系中甲醇钠催化制备甘油磷脂酰胆碱(L-alpha glycerylphosphorylcholine)的可行性,建立了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)和L-α-GPC的HPLC-ELSD检测方法,研究了温度、料液比、甲醇钠添加量、反应时间对PC转化率和GPC得率的影响。利用Design Expert软件对工艺参数进行优化,得最佳条件:温度35℃、料液比3/20(g/mL)、甲醇钠添加量2 mL、反应时间1.5 h,GPC得率为88.2%。极差分析结果,反应条件对GPC得率影响的顺序为:甲醇钠添加量>温度>反应时间>料液比。大豆粉末磷脂的醇解反应液经过硅胶柱色谱纯化,最终可以得到纯度为99.8%的L-α-GPC,回收率78.4%,这为工业级规模制备高纯L-α-GPC提供了一种好的思路和方法。

硅胶吸附甘油磷脂酰胆碱的动力学和焓变的研究

主要研究硅胶吸附L-α-GPC的动力学和热力学特性对吸附过程的控制,发现界面扩散控制速率模型1-3(1-X)2/3+2(1-X)能很好的拟合硅胶的吸附过程。通过Freundlich方程和Langmuir方程对吸附平衡模拟,得到了Langmiur方程拟合硅胶吸附L-α-GPC的吸附等温线,计算出不同温度条件下的回归方程,相关系数均在0.99以上,并证实了硅胶的吸附为放热反应。同时,利用Clausius-Clapeyron方程计算出3个吸附量的硅胶吸附热力学参数分别为80、160和240 mg/g,焓变(ΔHAm)分别为24.85、23.82、22.72 k J/mol。研究结果为进一步探讨工业化硅胶柱色谱制备高纯L-α-GPC提供了基础数据和理论参考。

L-a-甘油磷脂酰胆碱的研发进展

人口老龄化是当今社会的发展趋势,老年痴呆症已成为危及老年人生命的"第四大杀手",抗痴呆药物的研究是近年来的热点。本文对治疗阿尔茨海默病等痴呆症的药物——L-a-甘油磷脂酰胆碱作一介绍,包括近年来的市场状况及前景、临床应用、分离及其纯化方法等。以进一步促进L-a-甘油磷脂酰胆碱类药物的制备与应用,填补国内该类药物制备的空白。

磷脂酶A_1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱的动力学方程和热力学研究

研究了磷脂酶A1(Lecitase Ultra)在水相体系中水解磷脂酰胆碱(PC)的动力学和热力学性质。依据Arrhenius经验方程式,计算出了催化水解反应的活化能为5.96 k J/mol;并进行了Lecitase Ultra水解PC的Briggs-Haldane稳态法酶催化模型动力学模拟,利用底物抑制原理进行了模型修正;采用Lineweaver-Burk作图法,计算出反应的动力学参数Km,Vmax和kI分别为4.02×10^(-2)mol/L、10.05 mol/(L·min)和1.33×10~2mol/L。研究结果为探讨Lecitase Ultra催化机理及其变性机理提供了参考。

核磁共振氢谱法测定卵磷脂、溶血磷脂和甘油磷脂酰胆碱含量

利用核磁共振氢谱测定磷脂酶A1催化水解大豆卵磷脂后的样品中卵磷脂（PC）、溶血磷脂（LPC）、甘油磷脂酰胆碱（GPC）的相对含量。分别选取化学位移δ=4.40～4.50、4.14～4.16、3.76～3.83处的信号峰作为PC、LPC和GPC的特征性质子峰,并根据质子峰相对面积与物质的量的对应关系计算三者的相对含量。结果表明,PC、LPC、GPC的加标回收率分别为101.6%～107.0%、79.8%～92.4%、102.0%～107.1%,相对标准偏差（RSD）分别为1.6%～2.5%、3.6%～6.5%、5.6%～6.7%;精密度试验中PC、LPC、GPC的RSD分别为4.2%、3.5%、2.3%;对磷脂酶A1催化水解大豆卵磷脂4 h与8 h的两个样品进行检测,结果表明样品中PC、LPC、GPC的相对含量分别为71.2%、22.1%、6.7%;22.4%、0、77.6%。

复合磷脂酶水相体系酶法制备甘油磷脂酰胆碱的研究

采用复合磷脂酶在水相体系中酶解大豆卵磷脂制备甘油磷脂酰胆碱(GPC),磷脂酶A1和磷脂酶A2复合酶解作用,不仅有效地缩短了酶解时间,更能提高GPC的得率。通过响应面优化试验确定最佳酶解条件为:底物质量浓度61 g/L,酶解温度45.2℃,磷脂酶A1添加量16.86 U/m L,磷脂酶A2添加量21.98 U/m L,Ca Cl2添加量5.18 g/L。在最佳酶解条件下酶解2 h,GPC得率平均值为96.25%。

HPLC-ELSD法测定酶解磷脂中甘油磷脂酰胆碱含量的研究

本研究建立了高效液相色谱-蒸发光散射法酶催化水解磷脂样品中的甘油磷脂酰胆碱(GPC)的方法。检测条件为:使用Alltech Silica色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,甲醇为流动相,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器漂移管温度65℃,空气流速1.7 L/min。GPC为最后出峰的强极性组分,其保留时间为4.97 min,所得GPC标准曲线为Y=2.048 3 X+7.774 4,线性相关系数R2为0.991 4。检测限为6.3μg/mL(S/N=3),定量限为13.0μg/mL(S/N=10)。GPC的平均加标回收率为102.5%,RSD是2.2%(n=3),分析时间小于6 min。结果表明本方法分离效果好,检测结果准确、稳定,适用于酶催化水解磷脂样品中甘油磷脂酰胆碱的定量测定。

高效亲水作用色谱-蒸发光散检测应用于甘油磷酸胆碱含量测定

本研究建立了用高效液相色谱-蒸发光散射测定甘油磷酸胆碱(GPC)的方法。检测条件为:用Venusil HILIC色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,流动相为0.05 mol/L乙酸铵水溶液-(乙腈-甲醇=6∶4)=2∶8,流速1.0 mL/min,ELSD检测器,漂移管温度70℃。供试品中各组分分离度良好,相关系数为0.9999,结果表明GPC在0.1~1.4 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。GPC的加标回收率平均值为99.2%,相对标准偏差(RSD)为0.29%,分析时间小于15 min。结果表明本方法能准确、快速地测定批量样品中甘油磷酸胆碱含量。