HPLC法同时测定固本益肠片中5种成分含量

目的:建立HPLC同时测定固本益肠片中儿茶素、表儿茶素、芍药苷、补骨脂素及异补骨脂素含量的方法并为监测该药风险成分提供参考。方法:色谱柱采用依利特Hypersil ODS2柱(4.6 mm×300 mm,5μm);流动相:乙腈(B)-水(A),梯度洗脱,检测波长:240 nm;流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:30℃。结果:5种成分均能达到基线分离,且在相应范围内线性关系良好;儿茶素、表儿茶素、芍药苷、补骨脂素及异补骨脂素的平均加样回收率分别为98.22%、96.93%、101.46%、98.60%和100.24%,RSD分别为1.5%、2.1%、2.0%、1.4%和1.0%(n=6)。结论:经方法学验证,本法可为进一步完善固本益肠片质量控制标准,并为监测该药风险成分提供参考。

分子印迹固相萃取技术对六堡茶中表儿茶素的分离特性

以表儿茶素为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,偶氮二异丁腈作为引发剂,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,通过原位聚合法制备分子印迹聚合物。首先考察不同模板分子、功能单体、交联剂比例条件下表儿茶素分子印迹聚合物的特异性吸附能力。结果表明表儿茶素与丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯物质的量比为1∶6∶40时,分子印迹聚合物的吸附效果最佳,其模板分子回收率KMIPs为84.62%,特异性识别因子Q为4.55;然后利用扫描电子显微镜和红外光谱技术对制备的印迹聚合材料进行表征;最后在毛细管电泳最优条件下对加载过固相萃取柱的过柱液与洗脱液进行检测,建立分子印迹固相萃取-毛细管电泳联用检测表儿茶素的方法。实验结果表明,分子印迹聚合物成功聚合,形貌良好且具有专一吸附特性。该方法适用于六堡茶中表儿茶素的检测。

RP-HPLC法测定猕猴桃根中儿茶素和表儿茶素含量

建立用反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定猕猴桃根中儿茶素和表儿茶素含量的方法,并分析不同采挖季节猕猴桃根中儿茶素和表儿茶素含量的变化。采用Agilent TCC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-1%乙酸水溶液为流动相,以1.0 m L/min的流速梯度洗脱,检测波长280 nm,柱温30℃,进样量10μL。结果显示,儿茶素和表儿茶素的浓度线性范围分别为1.0μg/m L^198.6μg/m L(r2=0.999 9)和1.0μg/m L^201.0μg/m L(r2=0.999 9),儿茶素平均加样回收率为99.16%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.66%(n=9),表儿茶素平均加样回收率为100.99%,RSD为0.74%(n=9)。本法适用于猕猴桃根中儿茶素和表儿茶素的精确定量,检测结果表明,初春采收的猕猴桃根中的儿茶素和表儿茶素含量明显高于秋冬。

山竹抗细菌内毒素有效成分的研究

研究山竹Garcinia mangostana L.果壳中具有拮抗细菌内毒素(endotoxin/lipopo-lysaccharide,LPS)作用的化学成分。以LPS生物学活性中心lipid A为靶点导向分离有效成分,根据波谱数据鉴定化合物结构,亲和生物传感器测定化合物与lipid A的亲和力常数,鲎试验检测内毒素对LPS的体外中和作用,酶联免疫吸附法检测内毒素对LPS诱导RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的抑制作用。结果表明:从山竹果壳中分离得到3个化合物,经鉴定为表儿茶素(Ⅰ)、α-mangostin(Ⅱ)和γ-mangostin(Ⅲ);化合物Ⅰ与lipid A具有直接结合作用,可显著抑制LPS介导的鲎试剂凝集反应;化合物Ⅰ～Ⅲ均能选择性抑制LPS诱导RAW264.7细胞释放TNF-α,显示出抗LPS活性;首次发现化合物Ⅰ体外对LPS具有拮抗作用,是山竹中一种新的抗LPS活性物质。

双波长高效液相色谱梯度洗脱法同时测定黎峒丸中4种成分含量

目的建立双波长高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法同时测定黎峒丸中新藤黄酸、藤黄酸、儿茶素和表儿茶素含量。方法采用HPLC法,C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相A为甲醇-乙腈（4∶1）,流动相B为0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;流速1.1 m L·min^-1;检测波长360 nm（新藤黄酸和藤黄酸）,280 nm（儿茶素和表儿茶素）。结果根据回归方程,4种成分线性范围分别为新藤黄酸5.85-117.00μg·mL^-1（r=0.999 5）、藤黄酸8.95-179.00μg·mL^-1（r=0.999 8）、儿茶素6.90-138.00μg·mL^-1（r=0.999 7）、表儿茶素5.30-106.00μg·mL^-1（r=0.999 9）;平均加样回收率（n=6）分别为新藤黄酸97.82%（RSD=1.21%）、藤黄酸98.72%（RSD=1.30%）、儿茶素96.96%（RSD=0.84%）、表儿茶素99.26%（RSD=1.46%）。结论该方法操作简便、准确,重复性好,可用于黎峒丸的质量控制。

中药茅莓根、茎、叶中表儿茶素的含量测定

目的:比较中药茅莓不同部位中表儿茶素的含量,为临床用药提供参考。方法:采用HPLC法测定茅莓根、茎、叶中表儿茶素的含量,从化学成分上考察茅莓不同药用部位有效成分的分布。结果:不同产地茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有一定差异,以广西产地的含量稍高;茅莓根、茎、叶等部位均含有表儿茶素,三者含量有明显差异,含量的大小顺序依次为:叶>根>茎。结论:茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有显著差异,临床上作为药用应有所区别。

高效液相色谱法测定过岗龙药材中表儿茶素的含量

建立过岗龙药材中表儿茶素的高效液相色谱测定法,并对3批过岗龙药材进行表儿茶素含量测定分析。色谱柱为YMC C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05%磷酸(10∶90,V/V);检测波长:280 nm;流速:0.8 m L·min-1;柱温:30℃。结果表明,表儿茶素含量在0.2534~1.2595μg范围内与峰面积积分值线性关系良好,r=1.0000。平均回收率为105.88%,RSD为1.79%(n=6);3批样品中表儿茶素含量在1.7332~2.6634 mg/g范围内。本研究建立的方法简便快速、准确可靠,可用于过岗龙药材含量测定和质量监控。

湿加松针叶儿茶素和表儿茶素总量近红外光谱预测模型的建立

【目的】松针为松科植物松属植物的针形叶,其含有丰富的营养成分和化学活性物质,其中含有的黄酮类物质儿茶素和表儿茶素具有抗氧化、抗癌、抑菌、抗心血管疾病等作用,在食品、医学等领域研究广泛。利用近红外光谱技术建立一种准确、快速、高效测定湿加松针叶儿茶素(Catechin)和表儿茶素(L-Epicatechin)总量的模型,为湿加松高含量活性成分的筛选提供理论依据。【方法】以111份湿加松松针粉为试验材料,用瑞典波通仪器公司的型号为DA7200的近红外光谱分析仪收集光谱范围在950~1650 nm的湿加松松针粉样本的光谱数据,其中随机选取96份样品作校正集,利用The Unscrambler软件采用偏最小二乘法(PLS)构建回归模型,通过预处理及剔除异常值,得到最优模型。剩下的15份样品作外部验证集,对已建立的近红外模型进行外部验证。【结果】表明湿加松针叶儿茶素和表儿茶素总量预测的最佳模型预处理方法为Smoothing S.Golay+Derivatives S.Golay,当主成分数为16时,儿茶素和表儿茶素总量预测模型的校正相关系数R^(2)为0.9352,校正均方根误差(RMSEC)为2.1458,交互验证相关系数R^(2)_(cv)=0.7545,交互验证均方根误差(RMSEV)为4.3134。对已建立的近红外模型进行外部验证,儿茶素和表儿茶素总量验证相关系数外部验证集测定值和模型预测值之间相关系数R为0.8339,预测均方根误差(RMSEP)为3.7391,模型预测准确度较高。【结论】本研究构建的NIRS模型校正和交互验证相关系数均较大,校正和交互验证均方根误差均较低,说明模型预测性能较好,建立的模型有助于湿加松高含量活性成分的筛选。

叉分蓼全草化学成分研究

目的:对叉分蓼Polygonum divaricatum L.全草的化学成分进行研究。方法:采用各种色谱方法进行分离纯化,通过测定理化常数和光谱分析鉴定化合物的结构。结果:从叉分蓼全草中分离得到10个化合物,分别鉴定为:表儿茶素(1)、没食子酸(2)、原儿茶酸(3)、表儿茶素没食子酸酯(4)、表没食子儿茶素没食子酸酯(5)、儿茶素(6)、没食子酸乙酯(7)、胡萝卜苷(8)、阿魏酸(9)、丁二酸(10)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

4种余甘子功能成分的分析

利用高效液相、气相／质谱、原子荧光等方法，测定了产自广东的柿饼、双鹅、甜种和土种4种余甘子果肉中的几种核苷、绿原酸、表儿茶素、芦丁、维生素C和微量元素。结果表明：余甘子果肉中含有微量的硒，含量（鲜重）为0．0014-0．0027mg／kg；余甘子果肉中的甲醇提取液中气相／质谱仅测出饱和脂肪酸；余甘子果肉中含有少量的核苷类物质肌苷、鸟苷和腺苷，含量（鲜重）分别为：3．7990-15．3600、1．1335-2．8935、0．0000-4．1768μg／g，土种中含有少量胸苷，含量为3．3199／μg／g；余甘子果肉中还含有绿原酸、表儿茶素和芦丁，含量（鲜重）分别为0．1123-0．2631、0．9486-2．2451、0．0467-0．2907mg／g，表儿茶素含量最高。

茅莓中表儿茶素的含量测定研究

目的:建立茅莓中表儿茶素的高效液相色谱含量测定方法。方法:样品以50%甲醇溶液超声30 min,6 000 r·min^(-1)离心3 min,取上清液过0.45μm的微孔滤膜后进行HPLC分析。采用Alltima C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm)色谱柱,柱温为35℃;流动相为0.01 mol·L^(-1)枸椽酸-甲醇(80∶20),流速为1.0 mL·min^(-1);检测波长为280 nm。结果:表儿茶素浓度在0.09～2.22μg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9);平均回收率在99.12%;RSD=1.29%。10批不同批次的样品测得的含量结果分别为:0.445%、0.461%、0.281%、0.635%、0.662%、0.585%、0.407%、0.371%、0.292%、0.336%。结论:本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于茅莓中表儿茶素的含量检测。

HPLC法同时测定和评价“黔中金荞麦”中4种成分含量

“黔中金荞麦”是贵州省农业科学院畜牧兽医研究所选育的优质牧草(品种登记号:2019581),为建立同时测定该药材中表儿茶素、原花青素B、芦丁和槲皮素的检测方法,考察其含量多样性,采用高效液相色谱法测定并分析其含量与野生金荞麦的差异。C柱(250×4.6 mm,5μm),乙腈-0.4%磷酸水梯度洗脱,进样量10μL,流速0.7 mL/min,检测波长254 nm,温度30℃;原花青素B、表儿茶素、芦丁和槲皮素分别在5~85(r^(2)=0.9998)、5~80(r^(2)=0.9998)、0.5~8(r^(2)=0.9996)、0.125~2.0μg/mL(r^(2)=0.9999)范围内呈现良好线性关系,加样回收率高;黔西和麦坪的“黔中金荞麦”4种成分总含量高达1189.70、1108.01μg/g,其中原花青素B、芦丁和槲皮素含量最高,丹寨野生金荞麦表儿茶素含量最高。结果表明,本法准确可靠,适合“黔中金荞麦”的内控质量监测,“黔中金荞麦”中活性物质含量高且质量稳定,优于野生金荞麦。

儿茶中表儿茶素提取工艺研究

目的优选儿茶中有效成分表儿茶素的提取工艺。方法以甲醇为流动相A,以0.04mol/L柠檬酸溶液-N,N-二甲基甲酰胺(45∶8)为流动相B,在phenomenex C18柱(4.6mm×250mm,5μm)上进行等度洗脱,容积比为15∶85。柱温:35℃;流速:1.0mL/min;检测波长:280nm;进样量20μL。以干膏得率和表儿茶素提取率为考察指标,考察提取溶剂、提取温度、提取次数和提取时间等因素,采用正交试验优选最佳提取工艺。结果优选工艺为药材加10倍量甲基叔丁基醚,70℃回流提取2次,每次1.0h。结论优选所得的工艺稳定可行,可作为儿茶中表儿茶素的提取工艺。

HPLC波长切换法同时测定参麦颗粒中6种成分的含量

目的建立HPLC波长切换法同时测定参麦颗粒中的尿囊素、原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B的含量。方法采用Agilent C_(18)(4. 6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0. 5%冰醋酸溶液为流动相,梯度洗脱;柱温30℃。结果尿囊素、原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B的线性范围分别为3. 87～96. 75μg/ml (r=0. 999 9)、1. 29～32. 25μg/ml(r=0. 999 3)、0. 73～18. 25μg/ml (r=0. 999 2)、1. 56～39. 00μg/ml (r=0. 999 8)、1. 19～29. 75μg/ml (r=0. 999 6)和0. 86～21. 50μg/ml (r=0. 999 5),平均加样回收率分别为99. 46%、98. 28%、96. 97%、98. 55%、97. 99%、97. 26%,RSD分别为1. 10%、0. 96%、1. 43%、1. 29%、0. 77%、1. 36%。结论所建立的HPLC波长切换法可同时测定参麦颗粒中尿囊素、原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、麦冬甲基黄烷酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B的含量,可以为参麦颗粒的质量控制提供依据。

UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱结合一测多评法的不同品种苦荞麦质量评价

目的建立18个品种苦荞麦Fagopyrum tataricum指纹图谱,并以芦丁为内标物,采用一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)同时检测苦荞麦中葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素含量,以期对不同产地苦荞麦进行质量控制。方法采用超高效液相-三重四级杆液质联用技术(UPLC-QQQ-MS/MS),首次以一级全扫(Full-MS)和多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)2种采集模式相结合的方式建立UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱共有模式,采用夹角余弦法进行相似度评价。以ThermoFisher Accucore^(TM)C_(18)色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,体积流量0.3 mL/min,柱温30℃,梯度洗脱。以芦丁作为内标物,建立苦荞中其他6种指标成分的相对校正因子(fs/x),从而计算各待测成分的量,并将QAMS计算值与外标法(external standard method,ESM)实测值进行比较,以验证QAMS的准确性和方法适宜性。运用聚类分析、主成分分析、加权分析等化学计量学分析手段建立苦荞麦综合质量优劣评价方法。结果建立了苦荞麦的UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱,在Full-MS扫描模式下标定了15个共有峰,各品种间相似度在0.399~0.973;同时以MRM扫描模式结合对照品对其中芦丁等7种指标成分进行了峰指认。以芦丁为内标物,与葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素6种有效成分的建立的fs/x重现性良好,分别为0.283、1.338、0.654、1.162、8.509、0.709。且采用QAMS测定的18个品种苦荞麦中7种指标成分含量与ESM的实测值之间无显著性差异(P>0.05)。化学计量学分析结果表明,芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷和山柰酚是影响苦荞麦质量的主要潜在标志物,质量排序相对靠前的苦荞麦产区主要集中在海拔高、光照强、昼夜温差大的中国西南地区,而指纹图谱相似度差异较明显的荞杂2号、综甜2号和通荞1号排在后3位。结论所建立的指纹图谱结合QAMS简便可行,结果准确,化学计量学分析方法全面客观,可为苦荞麦品质评价和质量控制提供参考和依据。

基于近红外光谱技术建立火炬松针叶表儿茶素含量的预测模型

表儿茶素是松针提取物中黄酮类成分的一种,具有较强的抗氧化和清除自由基能力,为了建立一种快速、高效测定火炬松(Pinus taeda L.)针叶表儿茶素(L-Epicatechin)含量的近红外光谱预测模型,使用近红外光谱分析仪在950~1 650 nm的光谱范围内,采集了106个火炬松松针样本的光谱数据,结合液相色谱质谱联用仪对松针中表儿茶素含量的测定结果,采用偏最小二乘法(PLS),建立火炬松针叶表儿茶素的近红外光谱预测模型。结果表明,多元散射校正(MSC)+一阶导数(FD)+滤波拟合(S-G)为最佳光谱预处理方法,当主成分数为15时,表儿茶素含量预测模型可达到最优,其校正相关系数RC=0.973 9,校正均方根误差(RMSEC)=1.198 1,交互验证集相关系数RV=0.804 5,交互验证集均方根误差RMSEV=3.184 8。外部验证集测定值和模型预测值之间具有极显著的相关性(R=0.813 6),预测均方根误差RMSEP=3.629 9。模型RC和RV均最大,RMSEC和RMSEV均较低,说明所建立模型的预测性能较好。预测值与测量值具有高度正相关,模型的预测准确度较高,可以满足对火炬松针叶表儿茶素含量进行快速预测的要求。

篱蓼地下部分的化学成分研究

目的 研究篱蓼Fallopia dumetorum地下部分的化学成分。方法 利用硅胶、Sephadex LH-20、C18-ODS等柱色谱,以及半制备高效液相色谱(HPLC)技术进行系统分离纯化,结合质谱(MS)、核磁共振谱(NMR)等波谱数据和文献对照等手段鉴定化合物结构;对部分化合物进行体外抗氧化活性测试。结果 从篱蓼地下部分醋酸乙酯提取物中分离得到27个化合物,分别鉴定为对羟基肉桂酸甲酯(1)、反式-4-甲氧基肉桂酸(2)、methyl gallate 3-O-β-D-glucopyranoside(3)、smilaside J(4)、lapathoside A(5)、vanicoside B(6)、hedyotisol A(7)、表儿茶酚(8)、红花素(9)、木犀草素(10)、槲皮素(11)、异槲皮苷(quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside,12)、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷(quercetin 3-O-β-D-xylopyranoside,13)、2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside(14)、1,3,6-trihydroxy-8-methylxanthone(15)、大黄素(16)、大黄素-8-β-D-葡萄糖苷(17)、polygonumnolide B2(18)、决明酮8-O-β-D-葡萄糖苷(19)、altenuene(20)、isoaltenuene(21)、(2R,4a R,8a R)-3,4,4a,8a-tetrahydro-4a-hydroxy-2,6,7,8a-tetramethyl-2-(4,8,12-trimethyltridecyl)-2H-chromene-5,8-dione(22)、豆甾-4-烯-3-酮(23)、stigmast-4-ene-3,6-dione(24)、β-谷甾醇(25)、schleicheol 2(26)和α-amyrenol(27)。其中化合物1、8、9、11、13、14、18和27在100μmol/L浓度下对ABTS自由基有显著的抑制活性,同时化合物8和11在100μmol/L浓度下对DPPH自由基也具有明显的抑制活性。结论 化合物2~4、7、9、13、15、20~22、24和26为首次从蓼科植物中分离得到,化合物1、5、8和27为首次从该属植物中报道,化合物6、14、16~19和23为首次从篱蓼中分离得分到。化合物1、8、9、11、13、14、18和27具有体外抗氧化活性。

HPLC法测定茅莓根中表儿茶素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定茅莓根中表儿茶素的含量。方法：采用HPLC法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-水溶液（12∶88）,等度洗脱;柱温为25℃;检测波长为280 nm。结果：表儿茶素浓度在0.01～0.6 mg·mL^-1（r=1）范围内与其峰面积线性关系良好。平均回收率（n=9）为97.9%,RSD为1.92%。结论：本方法简便准确,快速可靠,可用于茅莓根药材的质量控制。

HPLC法测定藤梨根中表儿茶素的含量

目的：建立测定藤梨根中表儿茶素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C18,流动相为乙腈-0.2%乙酸溶液（15∶85,V/V）,流速为1.0 ml/min,检测波长为210 nm,柱温为25℃,进样量为10μl。结果：表儿茶素的检测质量浓度线性范围为10.47-167.52μg/ml（r=0.999 9）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2%;加样回收率为98.07%-101.71%,RSD=1.39%（n=6）。结论：该方法操作简便、结果准确,适用于藤梨根中表儿茶素的含量测定。

蒙古族药文冠木超微粉与普通粉中表儿茶素的溶出度比较

目的:对蒙古族药文冠木普通粉与超微粉中主要有效成分表儿茶素的体外溶出进行考察。方法:采用HPLC测定表儿茶素含量。色谱条件为Agilengt Eclipse-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长280 nm,流动相乙腈-0.04%磷酸水溶液(15∶85),流速1.0 m L·min-1,进样量20μL。测定文冠木普通粉与超微粉的溶出量和溶出速率,并对体外溶出行为进行溶出动力学分析。结果:普通粉与超微粉中表儿茶素的溶出量分别为5.868,8.440 mg·g-1,二者中表儿茶素的体外溶出曲线均符合Weibull分布。普通粉中表儿茶素的溶出参数T50,Td,T70,T80,T90分别为0.476,1.952,2.939,5.488,9.961 min,超微粉则依次为0.180,0.348,0.469,0.768,1.249 min。超微粉中表儿茶素的溶出速率明显高于普通粉(P<0.01),单位时间内(1 h)体外溶出量较普通粉提高约44%。结论:超微粉碎能明显促进文冠木中表儿茶素的体外溶出速率及溶出量,说明超微粉碎技术应用于蒙古族药文冠木是切实可行的。