二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞增殖的抑制作用

目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,Dadag)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT比色法、平板集落形成实验和Hoechst 33258荧光染色法,分析Dadag对L1210细胞的生长抑制和凋亡影响。结果Dadag对L1210细胞有浓度依赖性的细胞毒性作用,抑制肿瘤细胞集落形成,并可诱导L1210细胞发生凋亡。结论Dadag对白血病L1210细胞的增殖抑制作用与其诱导肿瘤细胞发生凋亡密切相关。

顺铂耐药性L1210细胞亚系的建立及特征

目的 建立肿瘤耐药机制研究及筛选抗肿瘤药物的体外实验模型。方法 应用药物连续作用并逐步提高药物浓度的剂量递增法及软琼脂细胞克隆技术 ,用拒染法测定药物的细胞毒作用 ,建立了一株对顺铂 (DDP)具有 40倍耐药性的L12 10细胞亚系 (L12 10 /DDP40 )。结果 DDP耐药细胞亚系在倍增时间、集落形成率、细胞周期、DNA指数和细胞形态等方面基本保持了亲代细胞 (L12 10 )的生物学特性。耐药细胞亚系在加药状态下冻存半年后复苏其耐药性仍然存在 ,解除药物作用后 5mon其耐药性仍维持原有水平。耐药细胞亚系对卡铂、丝裂霉素、噻替派、甲氨蝶呤、长春新碱和氮芥具有不同程度的交叉耐药性 ,对三尖杉酯碱和阿霉素无交叉耐药性 ,对阿糖胞苷和氟尿嘧啶仍较敏感。结论 DDP耐药性L12 10细胞亚系的建立 ,为深入研究肿瘤细胞耐药机制、寻找逆转耐药的措施提供了较好的体外实验模型。

二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞生长的抑制作用

目的观察二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的作用,并初步探讨其杀伤肿瘤细胞的机制。方法采用MTT法和平板集落形成法检测细胞的生长情况;[3H]-TdR掺入法检测DADAG对L1210细胞DNA合成的影响。结果L1210细胞经不同浓度的DADAG(12.0、17.2、24.5、35.05、0.0 mg.L-1)处理72 h后,其存活率与对照组相比,分别降至72%6、3%、46%3、5%和20%。平板集落形成实验显示DADAG半数集落形成抑制浓度为18.5 mg.L-1。DADAG 12.0、17.2、24.5、35.0、50.0 mg.L-1作用L1210细胞8 h后的[3H]-TdR掺入率分别为93.6%、83.9%、42.6%、10.1%和5.7%。结论DADAG对L1210细胞的抑制作用与抑制该细胞DNA合成有关。

抗白血病药物三尖杉酯碱对L1210细胞着丝粒蛋白含量及CenpB基因表达的影响(英文)

以小鼠白血病细胞系L12 10为对象 ,探讨了抗白血病药物三尖杉酯碱 (Harringtonine,HT或Har)对细胞内着丝粒蛋白含量及着丝粒蛋白CenpB基因表达的影响。间接免疫荧光 (IIF)检测结果显示 ,随HT作用时间延长 ,L12 10细胞着丝粒荧光斑点减弱 ;免疫印迹 (Westernblot)检测结果显示 ,所用的抗着丝粒抗血清 (ACA血清 )能够识别 8种不同分子量的着丝粒蛋白 :14 0、80、70、5 6、37、34、32和 17kD。受HT作用 ,细胞中这些着丝粒蛋白的含量不同程度地降低。在L12 10细胞中识别 17、80and 14 0kD蛋白质的ACA抗体也分别与分子量相当的已知为CenpA、CenpB和CenpC的 3种蛋白发生交叉反应。Northern和Dotblot显示 ,HT的抑制作用使细胞中CenpBmRNA表达水平较之对照细胞下降。结果表明 ,HT可 (通过抑制基因mRNA的表达 )降低细胞中某些着丝粒蛋白的含量 ;

狗舌草提取物诱导L1210细胞的凋亡

以环磷酰胺、槲皮素和单猪屎豆碱为参照,观察狗舌草60%乙醇提取物体外对L1210细胞的凋亡形态变化的影响;利用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双参数法,研究狗舌草60%乙醇提取物对L1210细胞早期凋亡的影响,探讨狗舌草60%乙醇提取物致L1210细胞凋亡的机理。结果发现,狗舌草60%乙醇提取物能使L1210细胞发生典型的细胞凋亡,形成凋亡小体;狗舌草60%乙醇提取物引起的AnnexinⅤ-FITC+/PI-细胞百分比为86.8%,能诱导L1210细胞发生早期凋亡。

狗舌草提取物对L1210细胞的体外作用研究

利用淋巴性白血病L1 2 1 0细胞 ,以单猪屎豆碱、槲皮素和环磷酰胺为参照 ,检查狗舌草60 %乙醇提取物 (EX)对L1 2 1 0细胞生长情况的影响 ;通过L1 2 1 0细胞台盼蓝拒染率的测定 ,研究EX对L1 2 1 0细胞活力的影响。结果发现 ,一定剂量的EX、单猪屎豆碱、槲皮素和环磷酰胺具有明显的体外抑制淋巴性白血病L1 2 1 0细胞的作用 ,且这种作用具有明显的剂量依赖性。其中EX和槲皮素在体外对L1 2 1 0细胞的细胞毒性较小 ,而单猪屎豆碱在体外对L1 2 1 0细胞的细胞毒性较大。

L1210克隆细胞肿瘤动物模型生物学特性研究

目的 对L12 10细胞及其 4株克隆细胞建立的肿瘤动物模型的某些生物学特性进行比较研究 ,从中筛选出基本符合L12 10细胞生物学特性且一致性更好的克隆细胞。方法 北京肿瘤所L12 10细胞和 4株克隆细胞腹腔接种DBA 2小鼠 ,观察产生腹水的性质、腹水瘤细胞浓度和致小鼠死亡时间 ;皮下接种DBA 2小鼠 ,观察瘤块的生长情况 ;腹腔注射化疗药物环磷酰胺 (CY) ,比较对CY治疗的敏感性。结果 腹腔接种DBA 2小鼠均能生长腹水 ,其中克隆细胞L2H8、L3B12产生血性腹水 ,L3F9的腹水微血性 ,L3E11与肿瘤所L12 10细胞为无血性腹水 ;腹水瘤细胞的浓度及小鼠生存时间亦有差别。肿瘤所L12 10细胞及克隆细胞L3F9、L2H8、L3E11、L3B12第 10天瘤重依次为 1 9± 0 4 6、1 5± 0 3 8、0 75± 0 5 2、2 6± 0 3 0、2 0± 0 3 3g ;用CY治疗的抑瘤率分别是 4 8 7% ,81 3 % ,86 0 % ,78 7%及 67 1%。结论 4株克隆细胞的生物学特性基本符合L12 10细胞 ,对化疗药物CY的敏感性均高于L12

狗舌草提取物诱导淋巴细胞性白血病L1210细胞分化的研究

以单猪屎豆碱(MO)、槲皮素(QU)和环磷酰胺(CY)为参照,观察了狗舌草600 mL/L乙醇提取物(EX)对淋巴细胞性白血病L1210细胞体外试验的形态变化;利用流式细胞术,从DNA分子水平上检查了EX对L1210细胞各周期相的影响,探讨EX对L1210细胞的分化机理。结果发现,EX能够使L1210细胞向淋巴细胞方向发展;经EX作用24 h后,L1210细胞G0+G1期的百分比较对照组明显升高。提示EX对L1210细胞增殖的抑制作用可能是由于G1期的阻滞所致。

软骨多糖通过线粒体途径诱导L1210细胞凋亡

研究了软骨多糖诱导L1210细胞发生凋亡的具体机制。采用TUNEL检测细胞凋亡,化学发光法及免疫印迹法检测Caspase-8、Caspase-9及Caspase-3/7酶活性变化,细胞免疫荧光检测Bax/Bcl-2蛋白变化。结果表明软骨多糖可促进L1210细胞发生凋亡,提高Bax/Bcl-2的比率,活化了Caspase-9和Caspase-3蛋白酶,而Caspase-8蛋白酶活性无变化。这些结果表明软骨多糖诱导L1210细胞通过线粒体途径发生了凋亡。

狗舌草提取物体内抗L1210白血病效果的研究

建立淋巴性白血病L1210细胞荷瘤DBA/2小鼠模型,从荷瘤鼠T/C及腹围测定、荷瘤鼠腹水中L1210细胞形态观察、荷瘤鼠白细胞象检查和骨髓象检查几方面,检查狗舌草60%乙醇提取物在体内对淋巴性白血病的作用效果。发现狗舌草60%乙醇提取物与单猪屎豆碱和槲皮素在体内抑制淋巴性白血病方面具有一致性。

乙酰二脱水卫矛醇对L1210细胞Caspase-3活性的影响

目的:探讨半胱氨酶-3(Caspase-3)在二乙酰二脱水卫矛醇(d iacetyld ianhydrogalactitol,DADAG)诱导小鼠白血病L1210凋亡过程中的作用。方法:MTT法观察DADAG对L1210细胞的生长抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡;Caspase-3试剂盒测定细胞内Caspase-3的酶活性。结果:DADAG对L1210细胞有较强的体外增殖抑制作用,其IC50值为24.6 mg/L;DADAG可诱导L1210细胞发生凋亡及时间依赖性地升高Caspase-3酶活性。结论:Caspase-3在DADAG诱导的细胞凋亡中可能起重要作用。

小鼠L1210白血病微小残留病模型化疗药物造模剂量的选择

【目的】探讨构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【方法】将不同数量L1210白血病细胞接种清洁级近交系DBA/2小鼠(n=10),观察接种的白血病细胞数量与小鼠存活时间之间的关系;将一定数量的L1210白血病细胞接种DBA/2小鼠(n=10),接种后第3天静脉注射不同剂量的环磷酰胺(CTX),观察药物注射剂量与小鼠存活时间之间的关系;将接种L1210白血病细胞数量与DBA小鼠存活时间关系图和CTX注射剂量与白血病小鼠存活时间关系图相结合,确定构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【结果】小鼠存活时间随接种细胞数量增加而缩短,接种500个白血病细胞小鼠的存活时间约为28 d;白血病小鼠存活时间随药物剂量增加而延长,存活时间约28 d时,需要静脉注射CTX 125 mg/kg。【结论】构建小鼠L1210白血病微小残留病模型,可于DBA/2小鼠接种L1210白血病细胞1×106个/只后第3天,给予CTX 125 mg/kg静脉注射。

DADAG诱导白血病L1210细胞凋亡

目的以小鼠白血病细胞系L1210为对象,探讨半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspases)家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot和Caspase-3试剂盒测定Caspase-3活性。结果与对照组相比,L1210细胞经不同浓度的DADAG(12.0、17.2、24.5、35.0或50.0 mg/L)处理72 h后,其存活率,分别降至72%、63%、46%、35%和20%。DADAG 50.0 mg/L处理组的凋亡率、Caspase-3活性和PARP裂解片段较对照组明显升高。Caspase-3抑制剂可部分阻断此过程,而Caspases抑制剂可完全阻断此过程。结论Caspases家族成员在DADAG诱导L1210细胞凋亡中发挥重要的作用。

L1210细胞表面IL-2受体的表达和以IL-2为导向的免疫毒素活性的检测

目的 证明 L12 10细胞表面表达 IL- 2受体 (IL- 2 R) ,并以此为基础建立检测以 IL- 2为导向的免疫毒素的杀伤细胞活性的体内、体外实验模型。方法 采用免疫荧光染色及流式细胞测定技术 ,测定 L12 10细胞表面IL- 2 R。用 MTT法测定 IL- 2与两种由突变改型的绿脓杆菌毒素片段构建的两种融合蛋白 (IL- 2 - PEZNM和 IL- 2 -K- PEZNM)的体外杀伤细胞活性 ;以腹腔注射 L12 10细胞诱发小鼠腹水瘤 ,观察腹腔注射 IL- 2 - K- PEZNM对腹水瘤的抑制作用。结果 86 .3%的 L12 10细胞表面表达 IL- 2受体 ,其荧光强度为 5 1.5 5 ;IL- 2 - PEZNM和 IL- 2 - K-PEZNM在体外对 L12 10细胞具有杀伤作用 ,且呈剂量效应相关 ,其半数抑制浓度 (IC5 0 )分别为 0 .5 1和0 .6 7μg/ ml;IL- 2 - K- PEZNM对小鼠腹水瘤生长具有较好的抑制作用 ,每只小鼠腹腔注射 5 μg/ d IL- 2 - K- PEZNM组生存时间较对照组延长 78.6 %。结论 L12 10细胞是检测以 IL- 2为导向的免疫毒素体内外杀伤细胞活性的一种简便、稳定和安全的实验模型。

L1210克隆细胞mRNA的表达及蛋白电泳图谱分析

目的 研究 L12 10及其克隆细胞 m RNA表达的差异 ,从基因水平探讨质控瘤株的方法。方法 用SDS- PAGE电泳观察瘤细胞株的蛋白质电泳图谱 ;6株生物素标记的探针与瘤细胞进行玻片原位杂交测定瘤细胞m RNA的表达。结果 北京肿瘤所 L12 10蛋白质条带数为 32条带 ,克隆细胞 L3F9和 L3E11均为 31条带 ;细胞原位杂交证明 ,北京肿瘤所 L12 10与 6株探针均杂交阳性 ,但杂交阳性染色强度不同 ;克隆细胞 L3E11与 p16、c- jun及 p5 3探针杂交阳性 ;克隆细胞 L3F9与 p16 ,c- fos,c- myc及 c- jun探针杂交阳性。结论 从北京肿瘤所保存的L12 10细胞中获得的 2株克隆细胞 L3E11和 L3F9的蛋白质电泳图谱的条带数一致 ,但其 m RNA的表达不同 ;c-fos,c- myc以及 p5 3基因的表达与否可以把这 2株克隆细胞区别开来 ,c

DADAG对L1210细胞内Bc1-2及Bc1-X_L蛋白表达的影响

目的：探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病L1210细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法：MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用；流式细胞技术和透射电镜检测细胞凋亡；Western blot法分析细胞内Bcl-2和Bcl-X_L蛋白水平的变化。结果：与对照组相比,DADAG可降低L1210细胞的存活率,且具有浓度依赖性。给药12.0、17.2、24.5、35.0和50.0mg/L 24h后,流式细胞术周期分析结果显示,各处理组均出现凋亡峰。DADAG 50.0mg/L作用L1210细胞24h后,靶细胞出现固缩、染色质边集；DADAG可下调Bcl-2和Bcl-X_L蛋白水平,且具有时间依赖性。结论：DADAG可能通过抑制Bcl-2及Bcl-X_L蛋白的表达而诱导L1210细胞发生凋亡。

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒对L1210细胞系增殖、克隆形成和DNA合成的影响

新合成的鬼臼毒自旋标记衍生物4-(4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基哌啶氮氧自由基)氨基)-4′-去甲表鬼臼毒(GP-7)显著抑制体外培养的L1210细胞生长。抑制作用和浓度及处理时间正相关,作用特点和鬼臼乙叉甙(VP-16)相似,24,48hIC_(50)分别为1.51和0.13μmol/L。GP-7和VP-16对L1210细胞软琼脂克隆形成均有抑制作用,且有浓度依赖性,IC_(50)分别为3.29和2.82μmol/L。GP-70.08～100μmol/L对L1210细胞DNA合成抑制率为18.4～80.7％。本文结果表明GP-7体外抗肿瘤作用与VP-16相似。

Caspase3在MG-132诱导白血病L1210细胞凋亡过程中的作用

目的探讨凋亡相关的半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)在蛋白酶体抑制剂MG-132诱导小鼠淋巴细胞白血病细胞株L1210细胞凋亡中活性的变化。方法分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中Caspase3相对活性。结果在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20μmol/L),细胞凋亡率及Caspase3的活性逐渐升高并存在剂量依赖性。结论 MG-132通过Caspase信号传导通路诱导L1210细胞凋亡并伴随Caspase3活性升高。

藤黄Ⅱ号对白血病L1210细胞杀伤动力学研究I—显...

藤黄Ⅱ号是从传统中药藤黄中提取的抗癌有效成分,本文应用显微分光光度术和扫描方法研究藤黄Ⅱ号对L1210白血病细胞周期的影响。实验表明:藤黄Ⅱ号(ip10mg/kg)可使S期细胞减少,G_1期细胞增多,在较低通道处出现新的细胞峰。这些低DNA含量细胞的出现一方面说明藤黄Ⅱ号可抑制G1→S期细胞的进行,另一方面也可能是由于该药破坏S期细胞。藤黄Ⅱ号(10mg/kg)对L1210细胞的RNA含量亦有明显减低作用。

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究

为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用,探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-Ⅴ和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase3的活性,采用Western-blot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达。结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低。结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase3的活性而诱导凋亡。