绞股蓝总皂苷对小鼠白血病L1210细胞抑制作用初探

目的:探讨绞股蓝总皂苷(Gypenosides,Gyp)对小鼠白血病L1210细胞生长抑制的作用机制。方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的小鼠L1210细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测Gyp对L1210细胞线粒体膜电位的影响;DAPI染色检测Gyp对L1210白血病细胞核的变化;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对白血病L1210细胞DNA损伤的影响。结果:浓度为100～500μg/mL的Gyp对L1210细胞增殖生长有抑制作用,350μg/mL的Gyp作用于L1210细胞0、12、24 h,线粒体膜电位显著下降;Gyp(350μg/mL)作用4 h时,细胞的活性氧产量最高。Gyp(350μg/mL)作用4、12、24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤;DAPI染色发现细胞核发生变化,并有时间依赖性。结论:Gyp能抑制L1210细胞增殖,这种抑制作用与活性氧的产生、线粒体膜电位下降和DNA损伤有关。

二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞增殖的抑制作用

目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,Dadag)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT比色法、平板集落形成实验和Hoechst 33258荧光染色法,分析Dadag对L1210细胞的生长抑制和凋亡影响。结果Dadag对L1210细胞有浓度依赖性的细胞毒性作用,抑制肿瘤细胞集落形成,并可诱导L1210细胞发生凋亡。结论Dadag对白血病L1210细胞的增殖抑制作用与其诱导肿瘤细胞发生凋亡密切相关。

狗舌草提取物体内抗L1210白血病效果的研究

建立淋巴性白血病L1210细胞荷瘤DBA/2小鼠模型,从荷瘤鼠T/C及腹围测定、荷瘤鼠腹水中L1210细胞形态观察、荷瘤鼠白细胞象检查和骨髓象检查几方面,检查狗舌草60%乙醇提取物在体内对淋巴性白血病的作用效果。发现狗舌草60%乙醇提取物与单猪屎豆碱和槲皮素在体内抑制淋巴性白血病方面具有一致性。

小鼠L1210白血病微小残留病模型化疗药物造模剂量的选择

【目的】探讨构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【方法】将不同数量L1210白血病细胞接种清洁级近交系DBA/2小鼠(n=10),观察接种的白血病细胞数量与小鼠存活时间之间的关系;将一定数量的L1210白血病细胞接种DBA/2小鼠(n=10),接种后第3天静脉注射不同剂量的环磷酰胺(CTX),观察药物注射剂量与小鼠存活时间之间的关系;将接种L1210白血病细胞数量与DBA小鼠存活时间关系图和CTX注射剂量与白血病小鼠存活时间关系图相结合,确定构建小鼠L1210白血病微小残留病模型所需注射的化疗药物的剂量。【结果】小鼠存活时间随接种细胞数量增加而缩短,接种500个白血病细胞小鼠的存活时间约为28 d;白血病小鼠存活时间随药物剂量增加而延长,存活时间约28 d时,需要静脉注射CTX 125 mg/kg。【结论】构建小鼠L1210白血病微小残留病模型,可于DBA/2小鼠接种L1210白血病细胞1×106个/只后第3天,给予CTX 125 mg/kg静脉注射。

DADAG对L1210细胞内Bc1-2及Bc1-X_L蛋白表达的影响

目的：探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病L1210细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法：MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用；流式细胞技术和透射电镜检测细胞凋亡；Western blot法分析细胞内Bcl-2和Bcl-X_L蛋白水平的变化。结果：与对照组相比,DADAG可降低L1210细胞的存活率,且具有浓度依赖性。给药12.0、17.2、24.5、35.0和50.0mg/L 24h后,流式细胞术周期分析结果显示,各处理组均出现凋亡峰。DADAG 50.0mg/L作用L1210细胞24h后,靶细胞出现固缩、染色质边集；DADAG可下调Bcl-2和Bcl-X_L蛋白水平,且具有时间依赖性。结论：DADAG可能通过抑制Bcl-2及Bcl-X_L蛋白的表达而诱导L1210细胞发生凋亡。

昆明小鼠和DBA/2小鼠尾静脉注射L1210细胞的比较研究

目的:通过尾静脉注射L1210细胞建立昆明小鼠及DBA/2小鼠的白血病模型,观察肿瘤细胞的迁移情况以及小鼠存活时间,为后续L1210细胞迁移的细胞内信号通路研究及抗肿瘤药物筛选奠定基础。方法:常规培养小鼠白血病细胞L1210系,将昆明小鼠及DBA/2小鼠随机分为对照组(A、C)和实验组(B、D),实验组尾静脉注射5×10^6L1210细胞,对照组注射等体积的PBS。昆明小鼠组饲养56d,DBA/2小鼠组饲养14d。定期测量小鼠体重并观察小鼠形态,取濒死小鼠以及最后解剖的小鼠的心、肝、脾、肺等脏器称重并测量,统计结果。结果:A、B、C、D组小鼠的平均存活天数分别为56、56、13.83±0.37、10.33±3.40d。昆明小鼠实验组脾脏明显肿大,肺脏有少量白细胞浸润,心脏和肝脏无明显变化,无死亡现象;DBA/2小鼠注射L1210细胞后第7d开始出现死亡,随着饲养时间的延长,死亡率不断上升。结论:昆明小鼠或DBA/2小鼠尾静脉注射L1210细胞均可引起肿瘤细胞的体内浸润。昆明小鼠尾静脉注射L1210细胞存活时间长,适合长期观察或周期比较长的实验;DBA/2小鼠尾静脉注射L1210细胞存活时间短,但实验现象明显。后期研究可以针对不同的研究目的和实验周期来选择合适的实验模型。

当归多糖AP-0对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的 观察当归总多糖AP 0对于 3种小鼠移植性肿瘤的抑制作用。方法 小鼠肉瘤S180模型建立 :二级昆明种小鼠 ,每只鼠鼷部接种 5× 10 6瘤细胞。接种次日起 ,每日 1次定时ipAP 0 30mg·kg-1,10 0mg·kg-1和 30 0mg·kg-1,阳性对照组ip环磷酰胺 (Cy) 30mg·kg-1,共 10d ,第 11天活杀小鼠 ,称瘤质量、体质量、胸腺和脾质量 ,统计结果。小鼠Ehrlich腹水癌 (EAC)模型建立 :二级昆明种小鼠 ,每鼠ip接种 2 .5× 10 6瘤细胞。接种后次日起 ,每日 1次定时ipAP 0 30mg·kg-1,10 0mg·kg-1和 30 0mg·kg-1,阳性对照组ip氟尿嘧啶 ( 5 FU) 2 0mg·kg-1,共 10d ,观察各组 6 0d平均存活天数 ,计算生命延长率。小鼠白血病L12 10模型建立 :二级DBA/2小鼠 ,每鼠ip接种 1× 10 5瘤细胞。接种后次日起 ,每日 1次定时ipAP 0 30mg·kg-1,10 0mg·kg-1和 30 0mg·kg-1,阳性对照组ip环磷酰胺 (Cy) 30mg·kg-1,共 10d ;第 30天处死 ,计算生命延长率。结果 小鼠肉瘤 180实验结果 :瘤质量指标 :NS组和各治疗组瘤质量均大于Cy组 (P <0 .0 1) ;胸腺质量指标 :10 0mg·kg-1组胸腺质量小于NS组 (P <0 .0 5 ) ,30mg·kg-1和 30 0mg·kg-1组胸腺质量明显小于NS组 (P <0 .0 1) ,但 30mg·kg-1组胸腺质量大于Cy组 (P <0 .0 5 ) ,10 0mg·

小鼠IL-18基因修饰瘤苗的抗白血病作用研究

我们在前期工作中成功制备了IL-18基因修饰的白血病疫苗,为了探讨IL-18基因修饰瘤苗的体内抗白血病作用,实验采用L1210小鼠淋巴细胞白血病模型,在小鼠体内接种IL-18基因修饰瘤苗,观察瘤苗对L1210细胞致瘤性的影响及免疫保护作用,并进一步对其抗白血病作用机制进行了探索。结果显示,IL-18基因修饰瘤苗能够明显延长荷瘤小鼠存活时间,大部分小鼠达到长期生存,且长生存小鼠用野生型L1210细胞二次攻击后大多数仍能长期生存,表明IL-18基因修饰瘤苗有显著的抗白血病作用,并可诱导小鼠产生免疫记忆和免疫保护。机制探讨发现,接种IL-18基因修饰瘤苗后,小鼠脾脏淋巴细胞对L1210肿瘤细胞的CTL及NK细胞杀伤活性明显高于对照组(P<0.05),提示IL-18基因修饰瘤苗能够显著增强抗肿瘤CTL和NK细胞反应。接种瘤苗可使小鼠IFN-γ水平升高,但与对照相比无统计学意义,提示IFN-γ可能在IL-18基因修饰瘤苗诱导的抗肿瘤免疫应答中作用不大。

金丝马尾连碱甲等成分的抗肿瘤作用

从金丝马尾连提取的总生物碱及其主要成分碱甲(hernandezine)对P388白血病小鼠、腹水型S180及C26结肠癌小鼠有一定的治疗作用。在体外,碱甲明显地抑制小鼠白血病L1210细胞及人口腔癌KB细胞的生长,对小鼠正常造血祖细胞(CFU-GM)的抑制作用较弱。初步结果表明,碱甲可阻断G_1细胞向S期过渡,其杀细胞作用似为细胞周期特异性。金丝马尾连的其它两个成分碱乙(thalidezine)及碱丙(isothalidezine)也有类似的抑制癌细胞作用。

喹唑啉类化合物的合成及抗肿瘤活性

目的：合成亲脂性叶酸拮抗剂２，４二氨基５甲基６取代苄胺基喹唑啉类化合物，并研究其对肿瘤细胞的抑制作用。方法：以邻甲苯胺为原料设计并合成喹唑啉类化合物；用四甲基偶氮唑蓝比色法和磺酰罗丹明Ｂ法测定其对肿瘤细胞的抑制作用。结果：该类化合物对Ｌ１２１０白血病细胞有较强的抑制作用。在已测定的部分化合物的药理结果中化合物Ｄ１、Ｄ３、Ｄ５和Ｄ６对人结肠癌ＨＣＴ８细胞，化合物Ｄ１～５对人红白血病Ｋ５６２细胞均有较强的抑制作用；化合物Ｄ１～６对人ＨＬ６０白血病细胞和人胃癌ＢＧＣ细胞均有一定的抑制作用。结论：该喹唑啉类化合物具有较强的抗肿瘤作用。

白血病细胞来源胞外体的生物学特性及其致敏DC的抗白血病效应

目的:探索白血病细胞来源的胞外体(leukemia cell-derived exosome,LEX)的生物学特性及其致敏DC的抗白血病免疫效应。方法:超速离心分离纯化BCR-ABL阳性的白血病K562细胞来源的胞外体(LEXK562),采用免疫电镜及Westernblotting检测LEXK562中热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)及BCR-ABL的表达,采用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞术检测LEXK562靶向结合DC的动力学,采用LDH释放法以及小鼠模型体内实验检测LEX及其致敏DC的抗白血病免疫效应。结果:与其他细胞来源的胞外体相似,K562细胞来源的胞外体LEXK562为直径50～100 nm的囊状结构,且表达K562细胞特异性的BCR-ABL和HSP70分子。LEXK562在体外可靶向结合DC,3～4 h到达高峰,并能在DC中稳定存在72 h以上。LEXK562致敏DC(DC/LEXK562)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)可有效杀伤K562靶细胞,效靶比为50∶1时,其杀伤活性显著高于LEXK562诱导的CTL[(68.6±5.7)%vs(22.5±2.9)%,P<0.01];体内实验进一步证实,白血病L1210细胞来源的胞外体(LEXL1210)免疫后小鼠接种L1210细胞的成瘤率明显高于LEXL1210致敏DC(DC/LEXL1210)免疫小鼠的成瘤率[(54.17±8.33)%vs(16.67±4.18)%,P<0.05]。结论:LEX表达白血病细胞相关抗原,LEX体外可靶向结合DC,其致敏的DC能诱导更强的抗白血病免疫效应。

苯丙氨酸氨解酶抗白血病作用的实验研究

本文采用MTT比色分析法对比观察了从绿豆中分离提纯的苯丙氨酸氨解酶(PAL)对小鼠白血病L_(1210)细胞和人白血病K_(562)细胞的作用。结果表明:(1)PAL对白血病细胞有明显的抑制作用,2.8μ/ml的酶作用48小时后抑制率分别达62.1％和82.6％,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.01)。(2)随酶剂量的增加,抑制效果明显增强,同样作用48小时,0.70μ/ml的酶其抑制率分别为5.2％和14.1％,当酶增加为3.5μ/ml,可分别达77.1％和85.8％(P<0.001)。

小鼠艾氏腹水癌上清液增强分化诱导剂对红白血病细胞的作用

艾氏腹水癌腹水上清液明显增强分化诱导剂对小鼠红白血病细胞(Friend细胞)的作用。经正丁酸、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺和二甲基亚砜等分化诱导剂作用后出现联苯胺染色阳性的细胞,加入腹水上清液则使阳性细胞百分率明显增高。在筛选有分化诱导活性的抗肿瘤抗生素工作中,利用小鼠红白血病细胞作初筛模型,加入腹水上清液可使测定方法更为敏感。腹水上清液中的活性因子可透过半透膜并对热不稳定。

小鼠β-防御素2与白介素18肿瘤疫苗的协同抗白血病作用研究

肿瘤免疫方面的最新进展表明,有效的抗肿瘤免疫需要天然免疫和获得性免疫的协同作用。我们在前期工作中成功制备了小鼠β-防御素2(MBD2)和IL-18基因修饰的白血病疫苗,并证实了两种瘤苗的抗白血病作用。为了进一步增强抗肿瘤效果,本实验将MBD2和IL-18瘤苗联合应用于小鼠体内,观察是否具有协同抗白血病作用并探索机制。致瘤性实验证实,MBD2与IL-18联合瘤苗对致瘤性的抑制作用明显高于MBD2或IL-18单独瘤苗(P<0.05);免疫保护作用结果显示,联合瘤苗接种组100%小鼠仍可长期存活;治疗实验显示,与MBD2或IL-18单独瘤苗相比,联合瘤苗具有更显著的治疗效果(P<0.05)。上述结果表明,MBD2和IL-18联合瘤苗可协同诱导更有效的抗肿瘤免疫反应和免疫保护作用。机制探讨发现,联合瘤苗能诱导脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性以及IFN-γ产生明显增强。提示,MBD2和IL-18可能协同诱导T细胞增殖,产生IFN-γ,使免疫系统能更有效地杀伤清除白血病细胞。

小鼠不同肿瘤模型对放化疗敏感性的研究

目的建立人食管癌及小鼠不同移植瘤模型，比较放、化疗对小鼠的不同肿瘤模型的抑制作用。方法动物模型建立24h后，将不同肿瘤细胞（淋巴瘤、肉瘤S180、肝癌H22、白血病L1210）的荷瘤IRM-2近交系小鼠随机分为对照组、照射组、环磷酰胺组，每组10只。环磷酰胺组于接种隔日腹腔注射环磷酰胺（25mg／kg）1次，0．2ml／只，共4次。照射组于接种后第4天进行全身1Gy照射，每日1次，连续5d。将食管癌EC901荷瘤裸鼠随机分为对照组、照射组、5．氟尿嘧啶组，每组5只。照射组于接种后第4天和第8天对肿瘤局部进行2Gv照射，5-氟尿嘧啶组于接种后隔日腹腔注射5-氟尿嘧啶（25mg／kg）1次，0．2m1]只，共4次。所有小鼠于第12天处死，解剖瘤块称重，计算抑瘤率。结果裸鼠及IRM-2近交系小鼠皮下移植瘤模型的成瘤率均为100％，放疗对淋巴瘤、肉瘤S180、肝癌H22、白血病L1210荷瘤小鼠的肿瘤有显著的抑制作用，抑瘤率分别为34．57％、32．69％、31-31％和18．32％，与对照组比较差异有统计学意义（t=4．130、3．222、3．581和2．713，P分别为〈0．01、〈0．01、〈0．01、〈0．05）。放疗对食管癌EC901的抑瘤率为22．99％，但与对照组比较差异无统计学意义（拉1．235，P〉0．05）。化疗对淋巴瘤、肉瘤S180、肝癌H22、白血病L1210、食管癌EC901荷瘤小鼠的抑瘤率分别为74．47％、72．59％、69．12％、77．53％和56．32％，与对照组比菠差异有统计学意义（t=12．694、12．208、7．223、11．964和5．266，P均〈0．01）。结论放、化疗对小鼠的不同肿瘤模型均有抑制作用。由于小鼠的品系和瘤源不同，对放、化疗的敏感性也存在差异。

昆明-无毛小鼠生物学特性的研究

目的观察新品系昆明-无毛小鼠在正常、照射及接种肿瘤情况下的生物学指标。方法①测定正常昆明小鼠和正常昆明．无毛小鼠的各项生理指标；②将昆明小鼠和昆明-无毛小鼠同时接种上肿瘤（肝癌H22、白血病L1210），观察其生长情况；③昆明小鼠和昆明．无毛小鼠接受·37Cs源1射线照射后，观察白细胞、胸腺系数、脾系数等各项生理指标。结果昆明小鼠与昆明-无毛小鼠正常指标之间无显著差异，只是昆明-无毛小鼠的胸腺略小一些；昆明-无毛小鼠和昆明小鼠接种上两种肿瘤后，肿瘤生长情况均较好；昆明小鼠和昆明．无毛小鼠接受”Cs源γ射线照射后，白细胞计数、胸腺系数、脾系数等各项生理指标均明显下降。结论作为纯系小鼠的昆明．无毛小鼠具备昆明小鼠的生物学特性，可应用于科学实验研究。

K_（562）和L_（210）耐高三尖杉酯碱细胞系的建立及其耐药机制的初步研究

通过逐渐递增高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）剂量的方法，分别克隆筛选出两株耐ＨＨＴ１６．７和１３．４倍的Ｋ５６２和Ｌ１２１０白血病细胞系。各命名为Ｋ５６２ＨＨＴ和Ｌ１２１０ＨＨＴ。二者对阿霉素、长春新碱、柔红霉索和马法兰等抗肿瘸药物均呈不同程度的交叉耐药。斑点杂交的结果表明二者的多药耐药基因（ＭＤＲ－１）表达明显增强，且用ＭＤＲ－１基因表达产物Ｐ１７０糖蛋白特异性的ＪＳＢ－１单克隆抗体检测Ｋ５６２ＨＨＴ细胞，结果呈强阳件反应，而敏感株为阴性。此外，二者的谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）α和π基因ｍＲＮＡ水平均有提高，而ＧＳＴμ无明显改变。