抑制CRIF1基因促进L615白血病细胞体内增殖的动物实验初步研究

目的探讨CRIF1基因对L615白血病细胞小鼠体内增殖的影响。方法实验分为3组,CRIF1-RNAi L615实验组(n=3):慢病毒干扰载体抑制L615细胞CRIF1-GFP基因表达;空载体对照组(n=3):空载体转染L615细胞;空白对照组(L615细胞空白对照)(n=3);建立白血病小鼠模型。通过肝脾印片、骨髓涂片及外周血流式细胞仪检测观察各组小鼠体内L615细胞增殖情况,比较各组小鼠的外周血白细胞计数(WBC)、生活质量和生存时间、肝脾指数。结果流式细胞仪检测:CRIF1-RNAi L615实验组、空载体对照组的小鼠外周血均见大量GFP阳性L615细胞;肝、脾印片及骨髓涂片结果显示肝、脾、骨髓均被白血病细胞浸润,3组小鼠均成瘤。CRIF1-RNAi L615实验组、空载体对照组及L615对照组小鼠在白血病细胞植入d5后外周血WBC(×109/L)分别为:42.23±15.08 vs 17.10±4.10 vs 17.30±5.05(P<0.01);生存时间(d)分别为:6.33±1.15 vs 10.00 vs 8.33±2.89(P<0.01);CRIF1-RNAi L615实验组小鼠脱毛、弓背等并发症出现提前;肝、脾指数分别为:122.31±2.83、35.21±0.45 vs 110.89±13.30、21.54±3.40 vs 89.76±5.56、24.71±2.48(P<0.05)。结论抑制小鼠L615白血病细胞CRIF1基因表达后,明显著促进L615白血病细胞在小鼠体内增殖、浸润并加快移植小鼠发病死亡。

GITR抗体对L615白血病抑制作用的实验研究

目的探讨糖皮质激素诱导型TNF受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)抗体对L615白血病(T淋巴细胞来源白血病)的抑制效应及其作用机制。方法以L615小鼠建立白血病模型,分3个实验组和1个阴性对照组,观察实验小鼠生存状态及时间,检测外周血白细胞计数及分类,外周血和骨髓中白血病细胞形态变化,肝脾指数,肝脾组织病理改变。结果GITR抗体使用组能延长L615白血病小鼠的生存时间,可引起骨髓中白血病细胞发生凋亡、坏死,肝脾指数降低。结论通过免疫调节机制GITR抗体能够有效地抑制L615白血病细胞的增殖,进而抑制白血病的发展。

GITR抗体对L615白血病抑制作用的实验研究

目的探讨糖皮质激素诱发型TNF受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,G ITR)的抗体对抗小鼠L615白血病(T淋巴细胞来源白血病)的效果和作用机制。方法以L615小鼠建立白血病模型,分3组实验组以及阴性对照组,观察实验小鼠生存状态及时间、外周血白细胞计数及分类、外周血和骨髓中白血病细胞形态变化、肝脾指数、肝脾组织病理改变。结果G ITR抗体可以延长L615白血病小鼠的生存时间,可引起骨髓中白血病细胞发生凋亡、坏死、肝脾指数降低、肝脾组织被白血病细胞浸润,提示G ITR抗体能够降低和缓解白血病细胞所致的小鼠外周血白细胞的升高和浸润,以及肝脾的肿大。结论通过免疫调节机制G ITR抗体能够有效地抑制L615白血病细胞的增殖,进而抑制白血病的发展。

表达人CD4分子的逆转录病毒基因转移体系的建立

目的构建表达人CD4(hCD4)分子pLXIN-hCD4载体的基因转移体系,使hCD4分子在小鼠T淋巴细胞白血病细胞系L615中长久、稳定地表达。方法将目的基因hCD4亚克隆到真核细胞表达载体pLXIN上,构建重组质粒pLXIN-hCD4。将该质粒用PloyFect脂质体转染到PT67包装细胞,获得病毒颗粒;用病毒颗粒感染体外培养的小鼠T淋巴细胞白血病细胞系L615。收集筛选后的细胞(L615-hCD4),以抗CD4单抗标记后用流式细胞术(FCM)检测其细胞膜hCD4分子的表达情况。PI-FCM法检测L615细胞和L615-hCD4细胞的细胞周期。结果菌落PCR鉴定及酶切鉴定显示hCD4基因成功地插入pLXIN载体中;hCD4分子可在L615-hCD4细胞膜表面稳定表达,而野生型L615细胞膜表面无hCD4分子表达。L615-hCD4与野生型L615的细胞周期比较无差异。结论成功构建了能在真核细胞上表达hCD4分子的重组质粒pLXIN-hCD4。L615-hCD4细胞能长期稳定表达hCD4分子,其细胞周期无改变。

肿瘤继承性细胞免疫治疗及其机制的实验研究

用615系小鼠及其同基因型L615白血病为模型,比较系统地研究了(1)转输不同遗传背景供鼠正常脾细胞的继承性免疫预防(AIP)效应和规律;(2)正常及免疫脾细胞的继承性免疫治疗(AIP)和继承性化学-免疫治疗(ACIT)效应,并分析了体外非特异性激活的、体内L615瘤苗特异性主动免疫和体外再致敏的脾细胞的抗瘤效应与机制,这些研究为临床开展肿瘤的继承性细胞免疫治疗提供了新的实验依据。

榄香烯复合瘤苗主动免疫抗瘤效应增强途径的比较研究

将ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠的Ｈ２２ 腹水型肝癌和６１５ 系小鼠的Ｌ６１５ 白血病细胞经榄香烯或／和热休克等不同处理制成瘤苗， 进行体内主动免疫实验和致敏脾细胞的体外细胞毒活性实验。结果表明： 热休克和榄香烯复合瘤苗比单一因素处理的瘤苗免疫效果好， 经Ｈ２２和Ｌ６１５ 复合瘤苗免疫、攻击后两个月动物存活率分别达６０－０％ 、８５－０％ （ Ｐ＜０－０１）， 并且能够明显提高死亡小鼠的平均存活天数。瘤苗免疫动物脾细胞的细胞毒活性分别达５８－８％ 、６９－７％ （ Ｐ ＜ ０－０１） 。在制备复合瘤苗时先加入榄香烯后再热休克的免疫效果较好， 这在Ｌ６１５ 瘤苗更为明显， 从而为今后瘤苗免疫在临床上的应用提供了进一步的实验依据。

急性T细胞白血病小鼠脾脏肿瘤特异性反应T细胞研究

应用可选择性杀灭的瘤细胞和淋巴瘤细胞混合培养的体外致敏方法，从急性Ｔ细胞（Ｌ６１５）白血病小鼠的脾细胞中建立了体外可培养的肿瘤特异性反应Ｔ细胞系（ＴＳＲＴｓ）。细胞表型分析和功能测定的结果表明，这些ＴＳＲＴｓ中是以表型ＣＤ４＋Ｔ细胞为主（占７５％以上）。对结合Ｌ６１５瘤细胞膜蛋白的硝酸纤维素薄膜颗粒的刺激呈特异性反应，并对Ｌ６１５瘤细胞刺激反应产生白细胞介素２。虽然体外缺乏急性溶细胞活性，但Ｗｉｎｎ’ｓ测定和继承性免疫治疗结果表明体内转输这些ＣＤ４＋为主的ＴＳＲＴｓ具有显著抗瘤活性，与ＣＹ联合可以明显延长Ｌ６１５白血病小鼠存活时间。

615系小鼠脾LAK细胞及LAK一88/DC细胞系抗癌作用的实验研究

本实验研究了转输615系小鼠脾LAK细胞和LAK—88/DC细胞系对615小鼠白血病(L615)的免疫防治效应,以及继承性化学免疫治疗作用。实验结果表明,攻击前二十一天转输LAK细胞或LAK—88/DC细胞系,并每日腹腔注射培养上清液一周,可以诱导正常受鼠产生对L615明显的免疫预防效应,分别使实验组80%的小鼠长期存活;单独注射培养上清液也有效,可使60%的小鼠长期存活。在攻击后五天,用环磷酰胺(CY:180mg/kg)进行化疗并转输LAK细胞或LAK—88/DC细胞系,则能延长晚期L615病鼠的平均存活时间,并可使实验组25%～28.6%的小鼠长期存活。

L615诱导的T杀伤细胞系的建立及其生物学特性的研究

本实验用 MMC-L615瘤苗主动免疫诱导的小鼠免疫膊细胞,在含有 rIL-2(2~u/ml)的 RPMI1640全培基中连续传代并经瘤苗的反复刺激而建成了一株细胞毒性 T 细胞系(定名为 Tc-L615细胞系)并对其各种生物学特性及体外细胞毒活性做了进一步的研究。

不同因素处理瘤苗主动免疫及其体内外再致敏脾细胞抗瘤效应的比较研究

用β-榄香烯,MMC、戊二醛单独及不同组合处理的 L615瘤苗主动免疫615系小鼠,比较其免疫保护作用,优化出安全高效且能长久保存的瘤苗:β-榄香烯-MMC-戊二醛瘤苗。瘤苗免疫组攻击后存活小鼠经体内外瘤苗再致敏其免疫脾细胞的抗瘤效应提高,表现为对晚期 L615白血病鼠进行 AIT,特别是 ACIT 有明显疗效,对 L615细胞也显示相对特异性的 CTL、CDC、ADCC体外细胞毒活性。