胃肠道间质瘤相关PDGFRA基因突变体功能的研究

目的探讨胃肠道间质瘤中一个新的PDGFRA基因突变位点L839P在肿瘤发生发展中的恶性转化作用。方法采用脂质体法，将重组质粒稳定转染中国仓鼠卵巢上皮细胞（CHO）。应用Western blot法，检测PDGFRA蛋白的表达情况。应用细胞计数法，描绘细胞生长曲线；应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡，并观察稳转突变型重组质粒CHO细胞在裸鼠体内的成瘤性。将PDGFRA突变型与kit野牛型莆组质粒共同瞬时转染CHO细胞，用Western blot法检测kit蛋白的表达及其磷酸化状态。结果阴性对照组、实验组及阳性对照组细胞中均有PDGFRA蛋白表达。实验组和阳性对照组较阴性对照组和李白对照组细胞生长速度加快；空白对照组、阴性对照组、实验组和阳性对照组处于增殖期的细胞比例分别为28．4％、24．5％、43．8％和40．9％，凋亡率分别为1．8％、1．9％、1．5％和1．6％。接种阳性对照组及实验组稳转细胞的裸鼠，3周后均见肿瘤生长。PDGFRA突变型质粒与kit野生型质粒共转染CHO细胞后，磷酸化kit蛋白表达明显增强。结论PDGFRA基因L839P点突变为功能获得性突变，对正常细胞有较强的恶性转化作用，并可激活kit蛋白，导致肿瘤发生。