磁性附着体中铁素体不锈钢引起小鼠成纤维细胞L929的死亡模式

通过3种不同浓度的不锈钢浸提液处理体外培养的小鼠成纤维细胞L929,采用流式细胞术PI染色法检测L929细胞的凋亡率及细胞周期分布情况,并用电镜观察细胞凋亡的形态．同时应用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白结合碘化丙啶染色双参数技术对细胞死亡类型进行定量检测．与Tilite含钛医用合金、Co-Cr合金相比较的结果表明,26-1超纯铁素体不锈钢是以时间依赖的方式诱导L929细胞凋亡,凋亡率与浸提液呈浓度依赖关系．26-1超纯铁素体不锈钢符合临床应用材料的生物相容性要求,可以用于对磁性附着体的外包裹并可安全地应用于临床．

不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化。在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平。磺基罗丹明B（SRB）法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况。结果：（1）L929在血清浓度很高和很低（0%和100%）时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%~100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;（2）HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重。20%~60%血清浓度细胞形态基本正常。（3）0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内I型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度I型胶原浓度最高。培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6~8 d时又再次上升。各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大。结论：20%~40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果。

3种牙科金属材料对L929细胞的毒性及对凋亡相关基因与蛋白表达的影响

目的:研究3种牙科金属材料(金合金、纯钛、镍铬合金)浸提液对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性及凋亡相关基因与蛋白表达的影响,探讨3种牙科金属材料引起细胞凋亡的可能通路。方法:以金合金(A组)、纯钛(B组)、镍铬合金(C组)的浸提液(每组8个样本)培养小鼠成纤维细胞L929,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基作为阴性对照(D组),以铜合金作为阳性对照(E组)。采用MTT法在细胞水平评价3种牙科金属材料的细胞毒性,采用RT-PCR在分子水平上检测3种牙科金属材料浸提液对L929细胞凋亡相关基因caspase-3、-8、-9 mRNA及蛋白表达的影响。采用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析。结果:各实验组细胞毒性均为0级。镍铬合金组caspase-3mRNA与caspase-9mRNA的表达与其他实验组、阴性对照及阳性对照组间差异显著,镍铬合金组caspase-3蛋白与caspase-9蛋白的表达与其他实验组及阴性对照组间差异显著,各组caspase-8mRNA及蛋白的表达无显著差异。结论:金合金与纯钛浸提液对小鼠L929细胞凋亡相关基因及蛋白的表达无显著诱导作用;镍铬合金诱导小鼠L929细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA、caspase-9mRNA及蛋白表达增加,可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。

高浓度花生四烯酸诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究(英文)

目的 探讨花生四烯酸是否能诱导小鼠成纤维细胞L92 9凋亡及其可能机制。方法 用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和乳酸脱氢酶 (LDH)释放率测定细胞存活率及损伤程度 ,比色法测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察凋亡细胞核形态变化 ,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解情况。结果 L92 9细胞在低浓度花生四烯酸 (40～ 160 μmol·L- 1)作用 2 4h后 ,细胞存活率明显下降 ,LDH释放率和细胞MDA含量显著增加 (P <0 .0 1)。经 160 μmol·L- 1花生四烯酸处理后的L92 9细胞呈现典型的凋亡核固缩表现。琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带。结论 高浓度花生四烯酸 (80～ 160 μmol·L- 1)能诱导小鼠成纤维细胞L92 9凋亡 。

血清介质对体外培养L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响

目的探讨不同浓度血清、不同体外培养时间对L929系小鼠成纤维细胞表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原及其比值的影响。方法采用双抗体夹心法检测细胞培养液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并同时计算出Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值。结果除0%血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原呈现无明显变化的微弱升高趋势外,其余各血清浓度组的Ⅰ、Ⅲ型胶原均处于增加状态,且在6~8 d时增加最为明显;另外,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值随着血清浓度和细胞生长时间不同,表现出不同的变化趋势。其中20%和40%血清浓度组随着培养细胞生长时间延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值逐渐增加;而其他血清浓度组,随着细胞培养时间的延长,Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增加并不明显。结论 L929细胞在不同体外培养时间和不同浓度血清下其表达产物Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值有一定变化,为今后优化体外细胞培养条件提供了相关的实验数据。

MTT法检测钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响

目的:探索纯钛烤瓷冠中钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929形态及增殖率的影响,并评价其细胞毒性分级。方法:以含钛酸钡涂层的钛瓷试件、常规钛瓷试件的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞1、3、5 d,并以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基为阴性对照组,1%苯酚溶液为阳性对照组,采用MTT法检测试件浸提液对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响。结果:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件浸提液培养的小鼠成纤维细胞L929形态正常,生长旺盛;钛酸钡涂层组吸光度值大于阴性对照组(P<0.05),含钛酸钡涂层的纯钛试件浸提液的细胞毒性分级为0级。结论:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件有良好的细胞相容性。

ZD制剂对RAW264.7细胞分泌TNF-α水平及TNF-α诱导L929细胞死亡的影响

[目的]研究ZD制剂对炎症模型细胞中TNF-α含量及对TNF-α诱导小鼠成纤维细胞L929死亡的影响。[方法]通过脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞系来构建炎症细胞模型,使用5种不同浓度(100、10、1、0.1、0.01μg/m L)的ZD制剂进行试验,并用ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞上清液中TNF-α浓度。通过TNF-α刺激小鼠成纤维细胞L929细胞系来构建细胞毒性模型,采用MTT法检测ZD制剂干预前后L929细胞活力。[结果]ZD制剂浓度为100、10、1、0.1μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异极显著(P<0.01);ZD制剂浓度为0.01μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异显著(P<0.05)。经100、10μg/m L ZD制剂干预后的小鼠成纤维细胞L929细胞活力与TNF-α组相比显著提高。[结论]ZD制剂可以通过降低TNF-α的分泌量和降低TNF-α的生物学活性来达到抗炎的目的。

低弹性模量医用钛合金梯度复合材料对L929细胞周期及凋亡的影响

将实验对象分为3组,分别为低弹性模量医用钛合金试件、经氧化处理、经氧化处理并在其表面喷涂钽的低弹性模量医用钛合金试件,制备浸提液培养小鼠成纤维细胞L929。利用流式细胞术检测细胞周期及凋亡并与常规钛合金Ti-6Al-4V试件及阴性组(含10%FBS的培养液18 ml)进行比较。浸提液培养48 h后,G2期细胞周期比例涂层组为(14.43±0.18)%,Ti-6Al-4V组为(13.97±1.39)%(P>0.05);细胞早期凋亡率涂层组为(1.39±0.08)%,Ti-6Al-4V组为(1.40±0.05)%(P>0.05)。低弹性模量医用钛合金梯度复合材料与Ti-6Al-4V比较对L929细胞周期及凋亡无差异,细胞相容性良好。

赤芝提取物的抗氧化美白及细胞增殖作用研究

目的:研究赤芝提取物(GLE)抗氧化美白及细胞增殖作用。方法:以测定GLE中糖类含量,体外1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除力、蘑菇酪氨酸酶活性抑制力、抑制B16F10细胞黑色素合成及酪氨酸酶活性抑制、结晶紫实验和划痕实验为评价指标,研究GLE抗氧化美白及对L929成纤维细胞增殖的作用。结果:GLE中富含总糖、多糖,GLE相较于β-熊果苷对DPPH自由基和ABTS自由基表现出较弱的清除作用,其自由基清除率半抑制浓度(IC 50)分别为1.6 mg/mL和1.2 mg/mL;对蘑菇酪氨酸酶活性有很强的抑制能力,基于α-MSH促黑激素细胞表型造模实验显示,0.4 mg/mL和0.8 mg/mL的GLE具有显著抑制B16F10细胞酪氨酸酶活性以及黑色素生成的作用;GLE具有促进L929成纤维细胞增殖作用。结论:GLE是美白及功能食品开发利用领域的候选者。

聚合磷酸钙骨水泥细胞毒性评价

目的：对自已合成的聚合磷酸钙骨水泥细胞毒性进行了研究。方法：将材料浸提液与小鼠成纤维细胞接触２、４、７ｄ后，用分光光度仪在５８８ｎｍ波长处测定吸光度，以评价材料的细胞毒性。结果：该材料细胞毒性为Ⅰ级，存在轻微的细胞毒性。

蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞增殖与生长的影响

手术后组织粘连与组织损伤部位纤维的增生有密切关系。研究蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞L929增殖与生长的影响,探索其用作预防组织粘连生物医用材料的可行性。体外试验结果表明,培养液中添加0.1 mg/m L蚕蛹羧甲基壳聚糖能够极显著抑制小鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),抑制率达到50.08%±10.12%;荧光定量PCR检测小鼠成纤维细胞中的细胞生长因子TGF-β1和VEGF编码基因的表达极显著下调(P<0.01),并且这种抑制作用呈现明显的剂量效应。据此初步认为,蚕蛹羧甲基壳聚糖可有效控制成纤维细胞中关键的自分泌生长因子编码基因的表达,进而抑制机体的细胞增殖与生长以及炎症反应和血管增生,预防术后组织粘连。

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的:利用体外细胞培养技术,对聚乳酸.甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备。方法:将材料浸提液与小鼠成纤维细胞接触2、4、7 d后,用分光光度仪在588 nm波长处测定吸光度,用细胞增殖度试验法评价材料的细胞毒性;采用细胞形态学试验法,在倒置显微镜下观察材料与小鼠成纤维细胞共培养时,细胞形态学发生的变化,评价材料的细胞毒性。结果:该材料细胞毒性为0级,无细胞毒性。结论:聚乳酸-甲壳素接骨板具有良好的细胞相容性。

镀氮化钛膜钕铁硼磁体细胞毒性的实验研究

目的:观察镀氮化钛膜N48钕铁硼磁体对小鼠L929成纤维细胞生长和凋亡的影响,评价该材料的生物相容性。方法:将镀氮化钛膜及未镀膜的钕铁硼磁体、普通托槽加入RPMI-1640培养液中,制备浸提液。分别用阴性、阳性对照液,以及100%、50%、25%镀氮化钛膜样品的浸提液培养小鼠L929成纤维细胞,通过MTT法检测细胞增殖活力,并计算相对增殖率。采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测观察阴性对照液、100%氮化钛膜及未镀膜的钕铁硼磁体浸提液组细胞的散点图,并计算各组正常、早期凋亡、晚期和坏死细胞的比例。采用SPSS11.5软件包对结果进行配对t检验。结果:镀氮化钛膜磁体的细胞毒性为0～1级;未镀膜磁体的细胞毒性为2级。流式细胞仪散点图发现,空白对照和镀氮化钛膜磁体组散点图显示大量的活细胞集中于左下象限;未镀膜磁体组散点图显示右下象限有大量的早期凋亡细胞。镀氮化钛膜磁体组与空白对照组之间活细胞、早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞含量差异无统计学意义(P>0.05);未镀膜磁体组与空白对照组之间不同时期的细胞含量差异有显著性(P<0.01)。结论:镀氮化钛膜钕铁硼磁体有良好的生物相容性。

电刺激对小鼠成纤维细胞L929细胞活性、衰老及凋亡的影响

目的观察不同强度及作用时长的电刺激对小鼠成纤维细胞L 929细胞活性、衰老及凋亡的影响。方法实验于2016年7~10月在武汉大学人民医院中心实验室进行。根据电刺激时长的不同,将小鼠成纤维细胞L 929细胞分为0 h组、2 h组、4 h组、6 h组,其中0 h组为对照组;根据电刺激强度的差异再将每组细胞分为50 mV/mm、100 mV/mm、200 mV/mm组,共计12组。采用CCK-8试剂盒、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测其活性、衰老及凋亡,每组实验重复4次。结果与对照组相比,50 mV/mm 4 h与6 h组、100 mV/mm 2 h组细胞活性增高(P<0.05),而50 mV/mm 2 h组、100 mV/mm 6 h组、200 mV/mm 2 h与6 h组细胞活性下降(P<0.05),100 mV/mm 4 h组、200 mV/mm 4 h组细胞活性变化不明显;100 mV/mm 2 h组细胞衰老率降低(P<0.05),而50 mV/mm 2 h、4 h、6 h组、100 mV/mm 6 h组、200 mV/mm 4 h与6 h组细胞衰老率升高(P<0.05),100 mV/mm 4 h组、200 mV/mm 2 h组细胞衰老率变化不明显;50 mV/mm 2 h组与100 mV/mm 2 h组凋亡细胞比例下降,其余组凋亡细胞比例均升高。结论小鼠成纤维细胞L 929细胞在不同的电场强度及作用时长下活性、衰老、凋亡状态各不相同,因此在研究电刺激对细胞的影响时,应充分考虑电刺激的强度及作用时间。其中,100 mV/mm 2 h的直流电刺激可以提高小鼠成纤维细胞L 929细胞的活性,抑制其衰老及凋亡。

一种医用消毒耦合剂细胞毒性实验研究

目的研究一种医用消毒耦合剂的细胞毒性。方法实验设6个剂量组,分别为5.00 mg/ml、1.67 mg/ml、0.56 mg/ml、0.19 mg/ml、0.06 mg/ml、0.02 mg/ml,观察其对小鼠L929成纤维细胞1 d、3 d、7 d的细胞毒性。结果小鼠L929成纤维细胞在该医用消毒耦合剂的作用下,5.00 mg/ml、1.67 mg/ml、0.56 mg/ml、0.19 mg/ml剂量组在各时间点出现1级到4级毒性的形态学改变,且有明显的剂量-反应关系;MTT实验显示,各剂量组各时间点相对增殖率(RGR值)均降低,毒性级别为1级到4级,呈现明显的剂量-反应关系。结论本次实验条件下,该医用消毒耦合剂有明显的细胞毒性。