集胞藻的随机插入诱变和光激活异养突变株的筛选

以４－碱基限制性内切酶部分酶切集胞藻ＰＣＣ６８０３基因文库总质粒ＤＮＡ，并插入卡那霉素抗性基因标记，构建了二级随机插入诱变文库。以该诱变文库总ＤＮＡ转化集胞藻ＰＣＣ６８０３，得到大量有抗性标记基因随机插入的转化子。利用这一方法获得了不能迸行光激活异养生长的突变株，并克隆了抗性标记基因插入部位 ＤＮＡ片段。在持续光照但加 ＤＣＭＵ抑制光合作用的情况下，这些突变株仍然能够利用葡萄糖异养生长，推测突变基因与短时光信号的感应有关。

集胞藻PCC6803光激活异养生长必需基因s110886的研究

集胞藻PCC6803能够在微弱、短时光刺激的条件下利用葡萄糖进行异养生长,称为光激活异养生长(LAHG)。从其随机插入诱变文库中,筛选到3个不能进行光激活异养生长的突变株,通过反向PCR和测序确定突变基因全部为s110886。将s110886克隆到表达载体pET21-b,在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并对产物进行了纯化。用Western印迹法研究s110886在集胞藻PCC6803的表达情况,发现在完全黑暗和光照情况下,其表达水平几乎没有差异,并证明其编码产物分布于膜上。因此,s110886是一个编码膜蛋白的不受光调控的LAHG基因。