LC/MSn鉴定2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在Beagle犬体内的主要代谢产物

目的研究鉴定2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(SBGC)在Beagle犬体内的代谢行为。方法选择健康Beagle犬3只单剂量0.4g·kg-1灌胃SBGC,于给药后60min后肢静脉取血,3000r.min-1离心10min,分取血浆,将血浆经SPE-C18固相柱纯化后,采用LC/MSn方法对血浆中的待测的代谢产物进行总离子监测(TIM)和多级全扫描质谱分析(MSn)。结果在Beagle犬血浆中检测到母体成分SBGC和4种代谢产物。结论SBGC在Beagle犬体内主要与葡萄糖醛酸相结合形成II相代谢产物。

LC-MSn技术测定琯溪蜜柚果实有机酸方法的建立

为了建立一种简便精确地测定琯溪蜜柚有机酸浓度的方法,本研究采用LC-MSn技术测定琯溪蜜柚果肉中的9种主要有机酸含量。发现不同有机酸的最适提取温度和乙醇浓度不同,温度55℃和乙醇含量0%条件下,是丙酮酸、柠檬酸、顺乌头酸、苹果酸等4种有机酸的最适提取条件,该条件提取能获得较高的琯溪蜜柚果实有机酸浓度。此外,该方法回收率在82.40%~96.11%之间,说明LC-MSn技术适合用于琯溪蜜柚有机酸的提取。

LC/MSn鉴定丁香酚布洛芬酯在大鼠尿中的主要代谢产物

目的研究鉴定丁香酚布洛芬酯在大鼠体内的代谢行为。方法选择健康Wistar大鼠3只单剂量20mg·kg^(-1)尾静脉给药丁香酚布洛芬酯后,收集0～12h尿样。将尿样经SPEC_(18)固相萃取柱纯化后,采用LC/MSn方法对尿中的待测的代谢产物进行选择离子监测(SIM)和多级全扫描质谱分析(MSn)。结果在尿中首次检测到丁香酚布洛芬酯的7种代谢产物,其中包括1种Ⅰ相代谢产物和6种Ⅱ相代谢产物。结论丁香酚布洛芬酯在大鼠体内主要先水解成丁香酚和布洛芬,经进一步代谢与葡萄糖醛酸结合。

甘草酸单铵盐中有关物质的LC-MS^n研究

采用LC-MSn法分析了甘草酸单铵盐原药中的主成分及其有关物质,通过液相色谱、多级质谱和紫外光谱信息确证主成分甘草酸单铵盐的结构,推测3个主要有关物质的可能结构为甘草皂苷G2、乌拉尔甘草皂苷A的单铵盐、乌拉尔甘草皂苷B的单铵盐或18α-甘草酸单铵盐。

柱前衍生化结合LC-MS^n分析人尿中茶碱及其代谢物

采用固相萃取结合化学衍生化的样品柱前预处理方法,利用液相色谱-电喷雾/多级质谱联用技术(LC-ESI/MSn),对人经口服给药后尿液中的茶碱及其代谢产物进行分析,探讨了茶碱、代谢物及相关衍生物的质谱裂解行为,推测茶碱在人体内的代谢途径。尿样经Bond Elute C18小柱固相萃取,收集甲醇洗脱部分在50℃下氮气吹干,以N,N-二甲氨基氯乙烷为衍生试剂进行衍生化。以Shimpack C18为色谱柱、甲醇-水-甲酸(体积比20∶80∶1)为流动相,在正离子模式下对尿样中茶碱、代谢物及其衍生化产物进行LC-ESI/MSn分析。采用上述方法,共分析鉴定了人尿中的茶碱和4种代谢物(1-甲基尿酸、1,3-二甲基尿酸、1-甲基-N-乙酰化物、3-甲基黄嘌呤),其中1种代谢物未见文献报道。在正离子模式下,茶碱及代谢物的二级质谱大多丢失18 u,28 u或57 u片段生成一系列碎片离子,而衍生化产物的二级质谱均有规律地丢失45 u片段生成一系列碎片离子。通过与未经衍生化的尿样比较发现,衍生化可明显增强茶碱、1-甲基尿酸和3-甲基黄嘌呤的质谱检测灵敏度。本研究补充了茶碱在人体内的代谢轮廓,可为灵敏检测生物样本中茶碱、代谢物及其结构类似物提供借鉴。

甲基原薯蓣皂苷静脉注射给予大鼠后体内代谢物的LC-MS^n分析

采用液相色谱-多级离子阱质谱法(LC-MSn)法,检测大鼠生物样本中的甲基原薯蓣皂苷(MPD)及其代谢产物,以推测MPD在大鼠体内的代谢途径。对大鼠静脉注射给予40 mg/kg的MPD,并收集尿液、血浆、胆汁和粪便等样本,经固相萃取(SPE)净化提取后,采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇(B)-水(A)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用正负离子检测。在生物样本中共检测到14个代谢产物。通过与对照品的色谱行为和多级质谱特征相比对,鉴定了其中6个代谢产物,分别为Protodioscin(M3),26-O-β-D-Glucopyrannosyl-(25R)-furan-5-ene-3β,22α,26-trihydroxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2 or 4)-β-D–glucopyranoside(M5),MPD(M0),Pseudoprotodioscin(M7),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside(M9),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside(M10)和Dioscin(M11)。根据已有对照品的质谱裂解规律,用LC-MSn法推测了另外5个代谢物。其中Protodioscin(PD)和Dioscin是两个主要的代谢产物,其对应的生成途径是MPD在大鼠体内的主要代谢途径。代谢反应总体以一相代谢为主,主要是水解脱糖,同时检出2个二相代谢产物;代谢物结构变化主要发生在糖上,母核均无明显变化。

LC/MSn法快速分析拉氧头孢钠原料的杂质谱

目的采用LC/MSn技术推断拉氧头孢钠原料中杂质的结构。方法采用Shiseido TYPE UG80C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以0.01mol/L醋酸铵溶液-甲醇(99:1,V/V)作为流动相A,以0.01mol/L醋酸铵溶液-甲醇(70:30,V/V)为流动相B,进行梯度洗脱分离杂质。通过强力试验归属杂质的来源,在正离子模式下获取各杂质的质谱数据,结合头孢菌素的普遍质谱裂解规律和降解反应原理,解析相关杂质的结构。结果推断了12种杂质的化学结构,样品中未检出聚合物杂质。结论LC/MSn法可快速准确推断拉氧头孢钠原料中杂质结构,中国药典的拉氧头孢钠质量标准需要进一步提高。

复方板蓝根颗粒APCI-MS指纹图谱及化学成分的LC-APCI-MS^n研究

建立了复方板蓝根颗粒提取物的大气压化学电离质谱(APCI-MS)的指纹图谱分析方法,并利用液相色谱-大气压化学电离-串联质谱(LC-APCI-MS^n)技术对主要指纹峰的归属进行确认。结果表明:质谱指纹图谱确定了10批不同来源复方板蓝根颗粒提取物的10个共有峰,各提取物的指纹图谱相似度均在97%以上。化学成分的LC-APCI-MS^n分析鉴别了复方板蓝根颗粒提取物中吲哚类、奎唑酮类、有机酸类和卟啉类等12个化合物,并确定了5个质谱指纹峰的归属。采用体外实验研究对复方板蓝根颗粒提取物的抗病毒活性进行评价,结果表明,其具有一定的抗病毒活性。该指纹图谱的精密度、稳定性和重现性良好,化学成分分析快捷、灵敏,结合化学成分分析和药效学研究,可为复方板蓝根颗粒质量控制标准的制订奠定基础,同时也为深入研究其药效物质基础和谱效关系提供理论依据。

微透析与LC-MS^n联用测定脑组织中咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑及其脑内药代特征的研究

目的建立灵敏、快速、准确的LC-MSn方法测定咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑及其在大鼠脑内的药代动力学过程。方法 SD大鼠股静脉注射CYP3A探针药物咪达唑仑(剂量5 mg·kg-1)。采用微透析技术,在2μl·min-1流速下收集脑微透析液样品2.4 h,收集时间间隔为8 min。以LC-MSn法在线检测微透析样品。选用Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相为2 mmol·L-1乙酸铵水溶液和乙腈,梯度方式洗脱。采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测模式(MRM),咪达唑仑m/z:326.1/291.1;1'-羟基咪达唑仑m/z:342.1/324.1;内标地西泮m/z:285.1/154.0。结果咪达唑仑和1'-羟基咪达唑仑的线性范围分别为0.78~100和0.195~12.5μg·L-1,最低定量下限0.2μg·L-1,批内、批间RSD均<7%,RE值在-1.34^-8%范围内。结论此检测方法快速、灵敏,可用于脑微透析液中咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑的含量测定,结合微透析技术有助于深入进行脑代谢的相关研究。

LC-MS^n测定2-[[(2′-氰基联苯基)-4-基]甲基]氨基-3-硝基苯甲酸乙酯中的不纯物

The impurities in ethyl-2-[[2′-cyanobiphenyl-4-yl] methyl] amino]-3-nitrobenzoate,an intermediate for synthesis of candesartan cilexiti,were detected by LC-MSn. The structural assignment of these impurities was carried out by LC-MSn using electrospray ionization source and an ion trap mass analyzer. The formation of the impurities was discussed. Also the fragmentation pathways of these compounds were studied.

HPLC-MS^n对普洱茶各萃取组分与茶褐素中化学成分的分析

普洱茶是一类具有多种保健功效的后发酵茶,茶褐素是其重要的功能成分。茶褐素是普洱茶在渥堆过程中形成的一类结构非常复杂的混合物。茶褐素的主要成分是一类黄烷-3-醇的微生物代谢产物,其中以Puerins I-VIII为代表。利用系统的有机溶剂萃取,获得普洱茶不同萃取物和茶褐素组分,对获得的组分进行多酚类成分分析,发现在茶褐素部位未检出EC、GC、ECG,其中可可碱含量明显高于其他萃取部位。釆用高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS^n)对普洱茶各萃取组分和茶褐素组分进行成分分析,比较普洱茶茶褐素与其他萃取物之间的化学成分差异,发现了茶褐素部位的主要标志性代谢产物普洱茶素。

白肋烟中糖酯类化合物的分离与鉴定

烟草中糖酯类化合物是重要的致香前体物,对烟叶的品质具有重要影响。但目前还未见关于白肋烟烟叶中糖酯类化合物的分离分析研究。本实验利用高分辨液相色谱-串联质谱(LC-MSn)技术,从白肋烟叶提取物中共分离鉴定出4类蔗糖酯和2类葡萄糖酯,每类均包含多种同系物。其中,4种蔗糖酯为首次发现,8种葡萄糖酯的结构鉴定在栽培烟草中为首次报道。本研究丰富了烟草中糖酯类化合物的种类,对烟草中不同类型蔗糖酯和葡萄糖酯的分析鉴定和代谢研究具有参考意义。

橐吾属植物中肝毒吡咯里西啶生物碱的LC/MS^n检测

目的 橐吾属植物中微量成分肝毒吡咯里西啶生物碱(HPA)的检测。。方法 采用薄层色谱法(TLC)、液相色谱与多级质谱联用法(LC/MSn)。结果 对橐吾属22种植物进行了HPA的LC/MSn法检测,其中18种橐吾属植物中检测到了HPA。结论 利用LC/MSn法首次检测到东俄洛橐吾等15种橐吾属植物含有不同类型和种类的HPA,应进一步进行提取、分离与鉴定,并研究其毒性与活性;对不同种类、不同来源的橐吾属植物材料应分别检测其HPA。

6,7-二甲氧基香豆素在大鼠体内主要代谢产物的研究

目的:研究大鼠单剂量ig5mg/kg6,7-二甲氧基香豆素后各生物样品中主要代谢产物。方法:采用高效液相色谱法对代谢物进行分析和分离,并利用电喷雾离子阱质谱注射泵直接进样技术及液相色谱-质谱联用技术(LC/MSn)对大鼠尿液、胆汁中6,7-二甲氧基香豆素主要代谢产物进行结构鉴定。结果:大鼠给药后0～10h内,仅在血样中检测到母体药物6,7-二甲氧基香豆素,而在尿样、粪样及胆汁中均未检出。比较服药前后的生物样品色谱行为可见,大鼠口服6,7-二甲氧基香豆素后,在胆汁中存在两个主要代谢产物(M1和M2),在血样和尿样中则以M1为主,而在粪样中未检出。由其色谱峰面积估计,代谢物M1和M2的含量占生物样品中代谢物总量的80%以上。结论:根据代谢物的色谱行为及质谱断裂规律,推定6,7-二甲氧基香豆素在大鼠体内的两个主要代谢产物(M1和M2)为6,7-二甲氧基香豆素经水解脱甲基生成的羟基化合物,均以硫酸酯结合物形式存在,且互为同分异构体。

液-质联用法测定反式白藜芦醇在大鼠和比格犬体内的代谢产物

目的:液相色谱串联多级质谱法测定大鼠和比格犬体内反式白藜芦醇(trans-resveratrol,TR)的代谢产物。方法:大鼠按150mg·kg-1灌胃给予TR,收集给药后0~12h尿、粪和胆汁样品,比格犬按50mg·kg-1灌胃给予TR,收集给药后0~12h尿样和粪样。用C18柱固相萃取后进行液-质联用法(LC/MSn)分析。结果:在服药后的大鼠体内可测到4个Ⅱ相代谢物(2个O-葡萄糖醛酸化和2个硫酸化物),在比格犬体内可测到2个Ⅱ相代谢物(O-硫酸化物)。结论:TR在大鼠和比格犬体内广泛代谢,并存在着种属差异。

头孢克洛聚合物杂质的分析

目的对头孢克洛中聚合物杂质的结构进行初步鉴定,对其产生机理进行初步分析。方法以0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 8.0)为溶剂,室温放置4 d,制备头孢克洛强制聚合溶液;采用HPSEC法对强制聚合物溶液中各杂质进行分离,结合二维液相脱盐技术、柱切换-LC/MS^(n)技术,根据各杂质一级、二级精确质量信息及聚合机制,初步鉴定主峰前各杂质结构。结果对头孢克洛强制聚合溶液中的9个聚合物杂质结构进行初步解析,并初步分析其产生机理。结论强制聚合溶液可作为头孢克洛原料及制剂中聚合物杂质研究分析用系统适用性溶液。本研究中推测的聚合物杂质结构对头孢克洛原料及其制剂的杂质谱研究及质量控制有重要参考意义。

新型抗肿瘤药物LS-177在大鼠体内的代谢研究

目的研究LS-177在大鼠体内的代谢情况,推测LS-177的代谢途径。方法采用LC-MSn法,电喷雾(ESI)正离子扫描模式,流动相为乙腈(A)-体积分数0. 1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为0. 2 mL·min^(-1),分析灌胃给予大鼠50. 0 mg·kg^(-1)的LS-177混悬液后,大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便样品中的代谢物。结果大鼠灌胃给予LS-177后,从大鼠血浆中发现了4个代谢物、胆汁中发现了5个代谢物、尿液中发现了8个代谢物、粪便中发现了5个代谢物。结论建立LC-MSn方法研究了LS-177在大鼠体内的代谢情况,为其化学结构类似药物和候选化合物的代谢研究提供依据。

柱切换-LC/MSn法快速推定注射用头孢美唑钠的杂质

目的:对注射用头孢美唑钠中的杂质结构进行分析。方法:采用Phenomenex Gemini C_(18)(250 mm×4. 6 mm,5μm)色谱柱,以磷酸二氢铵溶液-甲醇-四氢呋喃-20%四丁基氢氧化铵(700∶280∶25∶6. 4,v/v,pH=4. 5)为流动相分离杂质;对注射用头孢美唑钠进行强制降解实验,归属杂质来源;采用柱切换-LC/MSn技术采集杂质的质谱数据,根据头孢菌素类抗生素的质谱裂解规律和降解反应机制,推定相关杂质的化学结构。结果:在制剂中共检出并推断了6种杂质的化学结构,包括3种降解杂质和3种工艺杂质,未检出聚合物类杂质。结论:采用柱切换-LC/MSn技术可快速推定注射用头孢美唑钠中相关杂质的化学结构,《中华人民共和国药典》(Ch P) 2015年版的注射用头孢美唑钠有关物质检测方法需要进一步优化和提高。

头孢地尼原料及制剂的聚合物杂质分析

目的建立头孢地尼原料及制剂聚合物杂质的分析方法。方法分别采用0.1mol/L磷酸盐溶液和氯仿-三乙胺为溶剂,制备头孢地尼降解溶液;采用高效凝胶色谱法(HPSEC,TSK G2000 SWxl)和柱切换-LC/MSn法对头孢地尼降解溶液的弱保留值杂质进行分离和结构鉴定,并评估高效凝胶色谱法分析聚合物杂质的专属性;采用Diamonsil,C18型色谱柱,以0.25%四甲基氢氧化铵溶液(pH5.5)-甲醇-乙腈为流动相进行梯度洗脱,建立头孢地尼聚合物的RP-HPLC分析方法,采用二维色谱法和柱切换-LC/MSn法对其专属性进行分析,并进行方法学验证。结果在头孢地尼降解物中鉴定出头孢地尼二聚体及其异构体,以及若干小分子杂质;高效凝胶色谱法分离头孢地尼聚合物杂质时,小分子杂质与聚合物杂质共出峰,方法专属性与定量准确性差;RP-HPLC法分析头孢地尼聚合物杂质时,能够检出头孢地尼二聚体及其异构体,头孢地尼三聚体,专属性好。结论高效凝胶色谱法不能对头孢地尼的聚合物杂质进行有效质控,建立的反相色谱法分析头孢地尼聚合物杂质的专属性良好,可将头孢地尼降解溶液可作为聚合物杂质系统适用性溶液。

LC-MS^n应用于生物样品检测中基质效应的评价

液质联用技术具有灵敏度高,特异性强的特点,已被广泛运用于生物样品的分析和检测中。然而基质效应问题往往被忽略,事实上基质效应的存在可能极大影响液质联用技术的准确度和精确度,降低实验数据的可靠性。文中通过查阅和比较美国FDA和欧洲EMEA相关指导原则,探讨基质效应存在的原因和消除基质效应的方法,提出基质效应的评价方法和评价指标,供生物样品分析工作者参考。