液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法鉴定大鼠尿液中大豆黄素的羟基化代谢产物及其硫酸酯轭合物

目的鉴定大豆黄素在大鼠体内的羟基化及其结合形代谢产物。方法SD大鼠分别单剂量给药500mg.kg-1,收集0~24 h尿样。尿样经SPE ODS C18固相萃取柱纯化后,用LC-ESI/MSn对尿样中的代谢物分别进行选择离子监测(SIM)和多级质谱(MSn)分析。结果在大鼠尿中检测到几种尚未在国内外报道过的羟基化代谢产物及其硫酸酯轭合物。结论LC-ESI/MSn法可以快速、简捷、准确地鉴定大豆黄素在大鼠体内羟基化及其结合形代谢产物。

不同时间内家兔尿液中乌头碱代谢产物的研究

首次采用LC／ESI—MS^n方法对乌头碱灌胃给药后不同时间内家兔尿液中的乌头碱代谢产物进对比研究。经与空白尿样对照发现，在0～4h和4～8h两个时间段，家兔尿液中除乌头碱（AC）原形外，均含有相同的代谢产物，但相对含量差别很大。通过总离子流色谱图（TIC）可以发现3个主要代谢产物（M1，M2，M4）。分别测定了各代谢产物的准分子离子及其各级碎片离子，与AC在ESI—MS^n条件下的质谱碎裂规律相比较，并参考AC体内代谢文献，推断尿液中的主要代谢产物M1为16-O-去甲基乌头碱；M2和M4的m／z均为616，为同分异构体，结构还需要进-步的确认。

液相色谱-串联质谱法测定卷烟主流烟气中的四种致癌物

N-亚硝基降烟碱(NNN)、4-(亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)和N-亚硝基假木贼碱(NAB)是4种广泛存在于烟草和烟气中的致癌物,准确测定其含量对评估其对人体健康的影响有着重要的作用。采用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESIMS/MS)技术建立了卷烟主流烟气中NNN、NNK、NAT和NAB的测定方法,并将其用于中国烤烟和混合型卷烟主流烟气的分析。卷烟主流烟气通过剑桥滤片捕集,捕集烟气后的滤片在加入100μL氘代混合内标后用10mL100mmol/L醋酸铵水溶液萃取,萃取液过水相滤膜后直接进行LC-ESIMS/MS检测。选用AgilentZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱,以流动相0.1%(v/v)乙酸水溶液和0.1%(v/v)乙酸甲醇溶液梯度洗脱,质谱检测采用正离子扫描,多反应监测模式。NNN、NNK、NAT和NAB的检出限分别为0.019、0.002、0.008和0.007μg/L,回收率为84.9%～104.5%,相对标准偏差(n=8)为2.96%～6.65%。该方法的检出限低,特异性好,适用于卷烟主流烟气中NNN、NNK、NAT和NAB释放量的检测。

MS在测定天然产物中的研究进展

天然产物的使用由来已久,关于其成分的研究也受到了人们的注视。但是其成分复杂,检测困难,因此现代分析仪器的迅速发展为其带来了相当大的方便。本文重点介绍MS在天然产物中的应用及新的研究成果。

积雪草药材HPLC指纹图谱的研究

目的:研究积雪草药材的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制药材质量提供可靠的方法。方法:利用高效液相色谱法,梯度洗脱,测定了16个不同产地的积雪草药材样品。色谱柱为Alltech C18柱(250 mm×4.6 mm5,μm),流动相为乙腈-水,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm。结果:建立了积雪草药材的HPLC指纹图谱,并检测了16批积雪草药材样品,标定了15个共有峰,通过与对照品的保留时间比对及LC-ESI-MSn进行结构解析,其中5～10号峰分别鉴定为羟基积雪草苷、积雪草苷、槲皮素、山萘酚、羟基积雪草酸、积雪草酸。经相似度计算,各产地药材之间相似性较差。结论:该方法准确可靠,重现性好,可作为控制积雪草药材内在质量的标准。

液质联用技术研究不同给药方式下乌头碱在家兔尿液中的代谢产物

采用高效液相色谱-电喷物质谱技术（LC—ESI—MS）和电喷雾质谱及串联质谱（ESI—MS—MS^n）对不同给药方式下家兔尿液中的乌头碱代谢产物进对比研究。经与空白组对照发现，采用不同的给药方式，家兔尿液中除乌头碱（AC）原型外，含有的主要代谢产物并不相同。药静脉给药后的尿液中有一个主要代谢产物（M1），灌胃给药后的尿液中两个主要代谢产物（M1，M2）。分别测定了代谢产物的准分子离子及其各级碎片离子，与AC在电喷雾质谱及串联质谱（ESI—MS^n）条件下的质谱碎裂规律相比较，并参考AC体内外代谢文献，推断尿液中的主要代谢产物M1为16-O-去甲基乌头碱；M2为乌头碱去氧去甲基产物，结构还需要进一步的确认。

红土茯苓抑制5-LOX活性成分的筛选与分离

本实验以5-脂氧合酶为靶点,利用超滤液质联用技术筛选并鉴定红土茯苓中抑制5-脂氧合酶活性成分。结果表明,红土茯苓中白藜芦醇对5-脂氧合酶的抑制活性最强,其次为落新妇苷、黄杞苷、异黄杞苷和异落新妇苷。在此基础上首次采用高效逆流色谱技术,以正己烷∶正丁醇∶水(1∶2∶3∶v/v/v)为溶剂体系,从红土茯苓中分离得到落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷、异黄杞苷和白藜芦醇,经高效液相色谱分析,其纯度分别为98.39%,86.23%,97.15%,90.28%和99.29%。应用液-质联用技术,通过与标准化合物的保留时间、分子量,对分离得到五种化合物进行了结构鉴定。

利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖的研究

提取根瘤菌Mesorhizobium.loti基因组,克隆编码N-乙酰氨基葡萄糖转移酶nodC基因,插入质粒pUC19的lac启动子的下游,构建并筛选出能够合成几丁寡糖的重组大肠杆菌DCL-3。利用优化的MMYNG培养基,重组大肠杆菌DCL-3在10L发酵罐中培养26h后,培养液菌体浓度测定OD560=10.8,几丁寡糖得率达到526mg/L。收集重组细菌的细胞并煮沸破碎,利用活性炭的吸附和P4凝胶层析对几丁寡糖产物进行分离纯化。纯化产物的液质分析(LC-ESI-MS)结果表明主要寡糖产物为几丁四糖(m/z,831[M+H]+)和几丁五糖(m/z,1034[M+H]+)。

复方中药中乌头生物碱在人体内的代谢产物

目的鉴定复方中药中乌头生物碱在人尿液中的代谢产物。方法液相色谱-电喷雾离子阱多级质谱(LC-ESI-MSn)法。结果检测出5种乌头生物碱代谢产物。结论从具有乌头碱中毒临床表现的患者尿液中检测到的5种乌头生物碱代谢产物保存着乌头生物碱的基本结构即乌头烷骨架,可逆证或指示乌头生物碱进入肌体,因而可作为乌头碱(乌头生物碱)中毒的指示物,并可在法医学上取代在生物体内代谢迅速难以检测的中毒指标物乌头碱。LC-ESI-MSn法作为检测乌头碱中毒指示物的方法具有灵敏、专属和简单快速的优点。

LC-MS analysis of the formed peptides from N-(O,O-diiso-propyl)phosphoryl aspartic acid

LC-ESI-MS method was used to analyze the formed di and tri-peptide in the reaction system of N-(O, O-diisopropyl) phosphoryl aspartic acid and adenosine. Cluster ions of the peptides were given in the ESI-MS. The structures of these small peptides were confirmed by LC-MS-MS analysis. Compared with the traditional HPLC-UV detection, this method showed good sensitivity and selectivity for peptide in the presence of compounds with strong UV absorption, such as nucleoside and nucleotide.