结直肠癌患者外周血中LC3B^(+)EVs与MDSC及各细胞因子水平的临床相关性分析

目的:为探讨丹阳地区结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者外周血中LC3B^(+)EVs与髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)及各细胞因子的水平及其临床相关性。方法:流式细胞仪分别检测两组健康体检者和CRC患者外周血中LC3B^(+)EVs、MDSC及粒系髓源性抑制细胞(PMN-MDSC)和单核系髓源性抑制细胞(M-MDSC)的水平,讨论LC3B^(+)EVs与MDSC的临床相关性,并将CRC患者的血浆标本中的效应分子进行多因子检测(细胞因子芯片),讨论LC3B^(+)EVs与各因子的相关性。结果:与对照组相比,CRC患者外周血LC3B^(+)EVs数量显著上升(P<0.0001),且与患者年龄、性别无统计学差异(P=0.8690,P=0.9712)。CRC患者外周血中MDSC及PMN-MDSC、M-MDSC两个亚群的水平升高皆有统计学意义,并以PMN-MDSC增高为主(P<0.0001)。CRC患者外周血中LC3B^(+)EVs与MDSC及PMN-MDSC的水平无相关性(r=-0.002699,P=0.9891;r=-0.04435,P=0.8227),但与M-MDSC的水平呈显著正相关(r=0.4811,P=0.0096)。CRC患者外周血LC3B^(+)EVs与IL-1β、IL-2、IL-4、IL-8、IL-17、IFN-γ的水平呈正相关(r=0.7031、r=0.7827、r=0.4663、r=0.5901、r=0.4589、r=0.4655,P<0.05),尤其是与IL-1β呈显著正相关(P=0.0016);而与IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α的水平无统计学意义(P>0.05)。结论:CRC患者血浆中LC3B^(+)EVs数量与MDSC水平显著高于健康人,LC3B^(+)EVs与M-MDSC亚群及IL-1β的水平存在显著正相关,提示M-MDSC与IL-1β可能诱导CRC肿瘤细胞释放自噬小体增加,它们之间可能存在相互作用从而影响CRC的发生发展。

8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者血糖在目标范围内时间的相关性及预测糖尿病周围神经病变的价值

目的探讨8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α)、镍纹样蛋白(Metrnl)、微管相关蛋白3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/微管相关蛋白-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)与2型糖尿病(T2MD)患者血糖在目标范围内时间(TIR)的相关性及对糖尿病周围神经病变(DPN)预测价值。方法选取2020年5月至2022年10月新乡医学院第一附属医院收治的187例T2DM患者进行前瞻性研究,根据是否合并DPN分为DPN组(n=48)和无DPN组(n=139)。比较两组患者及根据TIR四分位数分组的患者8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ水平,采用Pearson相关性分析8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR相关性,采用多因素Logistic回归分析DPN的相关影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ预测DPN的价值。结果DPN组患者的TIR为(51.43±7.68)%,明显低于无DPN组的(56.94±8.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);DPN组患者的8-isoPGF2α、Metrnl分别为(162.78±51.33)pg/mL、(259.18±74.42)pg/mL,明显高于无DPN组的(129.56±43.00)pg/mL、(208.37±65.61)pg/mL,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ为0.89±0.27,明显低于无DPN组的1.15±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);根据TIR第25、50、75百分位数将全部患者分为Q1~Q4四组,8-isoPGF2α、Metrnl在Q4组最低,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ在Q4组最高;8-isoPGF2α、Metrnl随着TIR降低逐渐升高,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ随着TIR降低而降低,四组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,8-isoPGF2α、Metrnl与TIR呈显著负相关(r=-0.786、-0.665,P<0.01),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR呈显著正相关(r=0.711,P<0.01);多因素Logistic回归分析结果显示,TIR、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ是DPN的独立相关保护因素(P<0.05),8-isoPGF2α、Metrnl是DPN的独立相关危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,单一指标中,Metrnl预测DPN的AUC最大(0.830),特异度最高(87.05%),8-isoPGF2α+Metrnl+LC3B-Ⅱ预测DPN的AUC为0.923(95%CI:0.875~0.957),大于Metrnl,预测敏感度为87.50%,特异度为85.61%(P<0.05)。结论8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者TIR有关,均是患者并发DPN的预警因素。联合检测三者能为临床分层管理和早期识别DPN高风险人群提供参考。

牦牛LC3B蛋白多克隆抗体制备及在生殖器官表达检测中的应用

旨在克隆牦牛微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)基因,制备牦牛LC3B多克隆抗体,为探究自噬在牦牛生殖生理过程中的作用奠定基础。本研究通过基因克隆方法获得牦牛LC 3B基因序列,利用原核表达、亲和层析法纯化牦牛LC3B重组蛋白,使用纯化的蛋白为抗原免疫10月龄日本大耳白兔,Sepharose4B柱层析法纯化制备牦牛LC3B多克隆抗体,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,并使用蛋白质免疫印迹(WB)、免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光技术(IF)检测牦牛生殖器官中LC3B蛋白的表达。结果显示,本研究成功克隆了牦牛LC 3B基因(登录号:OP572227),构建的重组质粒pET-32a-LC3B能够诱导产生重组蛋白,并且在包涵体和上清中均有表达;所纯化的牦牛LC3B重组蛋白大小为34 ku(含Trx和His标签),符合预期结果。通过免疫日本大耳兔后得到的兔抗牦牛LC3B蛋白血清,抗体效价分别为1∶640000和1∶320000,特异性良好,表明牦牛LC3B蛋白多克隆抗体制备成功。纯化后的抗体应用于牦牛生殖器官中LC3B的表达检测,LC3B在牦牛卵巢、输卵管和子宫中表达,并且能识别LC3B-Ⅰ和发生脂化后的LC3B-Ⅱ,主要表达于细胞质及细胞核周。本研究通过成功克隆牦牛LC 3B基因制备了牦牛LC3B多克隆抗体,使用抗体检测发现LC3B蛋白在牦牛生殖器官中均有表达,表明所制备的多克隆抗体特异性良好,能够应用于牦牛LC3B蛋白的检测和细胞自噬水平的研究。

人肝细胞癌中LC3B和p62的表达及意义

目的观察自噬标志因子LC3B和p62在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测61例人HCC组织中LC3B和p62的表达,分析二者表达与临床病理特征及其预后的关系。结果 HCC中LC3B和p62的高表达率分别为31.1%和65.6%;LC3B表达与肿瘤大小、组织学分级和临床分期呈显著正相关(P<0.05),p62表达与肿瘤临床分期呈显著正相关(P<0.05);LC3B和p62表达均与HCC患者的无复发生存期和总生存期密切相关(P=0.009和0.036;P=0.001和0.007)。结论肿瘤细胞自噬活性的提高可能参与人HCC的发展,LC3B和p62表达可能是肝细胞进展和预后不良的潜在标志物。

自噬标志性分子LC3B在大鼠全脑缺血复灌损伤中海马CA1区的表达及意义

目的探讨自噬标志分子LC3B在大鼠全脑缺血复灌不同时间的表达以及对海马神经元损伤的影响。方法采用四血管法(4-vessel-occlusion,4-VO)法制作大鼠全脑缺血模型,随机将33只SD大鼠分成假手术组和缺血再灌注组。在大鼠全脑缺血20 min后,分别恢复血流灌注30 min、1、2、4、6、8、12、24、48、72 h,用免疫组织化学法检测海马CA1区神经元LC3B的表达。结果 LC3B在大鼠全脑缺血20 min复灌2 h开始表达,在复灌12 h表达到达高峰,之后逐渐减弱。结论自噬的激活介导了大鼠全脑缺血再灌注海马CA1区神经元的损伤死亡,长时间脑缺血再灌注损伤中自噬激活的时间更早及介导神经元的损伤更严重。

自噬相关基因BECN1、LC3B、mTOR在宫颈鳞状上皮病变进展中的表达及意义

目的:检测BECN1、膜型微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(m TOR)在宫颈鳞状上皮病变中的表达,并探讨其临床意义。方法:免疫组化法及荧光原位杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变和正常宫颈组织中自噬相关基因BECN1、LC3B和m TOR的蛋白及m RNA表达情况。结果:宫颈鳞状细胞癌(SCC)组和高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组中BECN1和LC3B的蛋白及m RNA表达均明显低于正常宫颈组,m TOR的蛋白及m RNA表达明显高于正常宫颈组,差异均有统计学意义(P<0.01)。低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组中,BECN1及LC3B的蛋白表达明显低于正常宫颈组,LC3B m RNA表达明显低于正常宫颈组,m TOR m RNA表达高于正常宫颈组,差异均有统计学意义(P<0.01)。SCC组中,BECN1蛋白表达与临床分期及淋巴结转移有关,LC3B蛋白表达与肿瘤细胞分化程度相关,m TOR蛋白表达则与淋巴结转移相关。SCC组中,LC3B表达与BECN1呈正相关,与m TOR呈负相关。结论:自噬相关基因与宫颈鳞状上皮病变的严重程度有关,推测BECN1、LC3B和m TOR异常表达可能导致病变恶化。

子宫颈鳞状细胞癌组织中LC3B的表达及其与Ki-67表达的相关性

目的探讨自噬标志物LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其与细胞增殖蛋白Ki-67表达的相关性。方法采用免疫组化SP法检测16例正常子宫颈和126例子宫颈鳞状细胞癌组织中LC3B及Ki-67的表达。结果 LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达低于正常子宫颈上皮,差异有统计学意义(P<0.05);LC3B与Ki-67表达呈负相关(rs=-0.248,P<0.05)。结论子宫颈鳞状细胞癌中LC3B的表达降低,自噬活性减弱可能促进早期子宫颈鳞状细胞癌细胞的增殖,该发现为进一步探究自噬在子宫颈癌发生、发展中的作用提供临床参考依据。

三倍体雌性虹鳟性腺发育过程中lc3b基因的表达分析

旨在证明细胞自噬与三倍体雌性虹鳟性腺败育的关系。利用RT-PCR扩增虹鳟自噬基因lc3b(Microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,lc3b)的编码区序列,通过透射电镜观察三倍体雌性虹鳟不同发育阶段性腺中自噬小体的形态,结合不同发育阶段性腺中lc3b基因和蛋白的表达,来证明细胞自噬的发生。结果表明,在200 dpf-270 dpf(Days post fertilization,dpf)这个发育阶段,lc3b基因以及自噬蛋白LC3B-II/LC3B-I的表达处于相对较高的水平,在这个时期内,都观察到了自噬体结构的存在。这些结果证明了性腺细胞自噬为三倍体雌性虹鳟性腺败育的主要原因之一。

稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的影响

目的:观察搜风祛痰中药稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的影响。方法:选取6周龄ApoE基因敲除小鼠,采用高脂饲料喂养的方法建立动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块模型,并随机分为模型组,稳斑汤低、中、高剂量组,阿托伐他汀组;另取C57BL/6J小鼠设为空白对照组。模型组和空白对照组均给予0.9%生理盐水灌胃,稳斑汤低、中、高剂量组和阿托伐他汀组分别给予不同剂量的稳斑汤和阿托伐他汀片干预。13周后将小鼠麻醉处死,透射电镜下观察小鼠主动脉自噬小体,然后采用蛋白质印记(Western blot)法检测Atg5和LC3B蛋白表达水平。结果:透射电镜观察显示,空白对照组有少量自噬小体出现,模型组无明显自噬小体出现;与模型组相比,稳斑汤各剂量组和阿托伐他汀组的自噬小体数量均显著增多,其中阿托伐他汀组的数量最多。与空白对照组相比,模型组小鼠腹主动脉组织中Atg5和LC3B蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组相比,稳斑汤各剂量组和阿托伐他汀组小鼠腹主动脉组织中Atg5和LC3B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:搜风祛痰中药稳斑汤可以明显提高ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块自噬相关蛋白Atg5和LC3B的表达水平,这可能是稳斑汤影响动脉粥样硬化斑块稳定性的分子机制之一。

胃癌组织中LC3B和p62的表达和临床意义

目的探讨细胞自噬相关标志物LC3B和p62在人胃癌组织中的表达水平及其临床意义。方法收集80例石蜡包埋人胃癌组织,采用免疫组织化学两步实验法检测LC3B和p62的表达状况,分析它们与胃癌患者临床病理学特征的关系。结果胃癌组织LC3B和p62的高表达率分别为68.8%和62.5%;LC3B和p62表达状况与胃癌肿瘤大小、组织学分级、肿瘤淋巴结转移情况和临床分期均差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示:胃癌组织LC3B和p62表达水平呈显著正相关(r_s=0.338,P<0.01)。结论肿瘤细胞自噬行为可能参与了人胃癌的恶性演进,LC3B和p62联合表达状况可能作为判定胃癌病情进展以及预测患者预后的潜在标志物。

LC3B-Ⅱ在不同级别胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3BⅡ)在不同级别胶质瘤中的表达及意义。方法:免疫组化法检测45例不同级别胶质瘤中LC3B-Ⅱ的表达,并结合临床资料分析其与胶质瘤临床特征之间的关系。结果:LC3B-Ⅱ在高级别胶质瘤组织中的表达高于低级别胶质瘤组织,差异具有统计学意义。胶质瘤组织中LC3B-Ⅱ的表达不受年龄、性别因素的影响。结论:在高级别胶质瘤中细胞自噬较为严重,LC3B-Ⅱ可作为胶质瘤的辅助病理指标。

Beclin1、MAP1LC3B和mTOR在宫颈病变中的表达及临床意义

目的检测Beclin1、MAP1LC3B及mTOR在宫颈病变中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测宫颈病变中Beclin1、MAP1LC3B及mTOR的表达,并与正常宫颈组织对照。结果Beclin1在正常宫颈组、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组和宫颈鳞癌组中的阳性表达率分别为95.00%、84.00%、62.00%及34.00%;MAP1LC3B的阳性表达率分别为90.00%、86.00%、54.00%及22.00%;mTOR阳性表达率分别为35.00%、44.00%、72.00%及86.00%,不同组中的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。在宫颈癌患者中,Beclin1阳性表达与淋巴转移及临床分期相关,MAP1LC3B阳性表达与肿瘤分化相关,mTOR的阳性表达则与淋巴转移相关。MAP1LC3B与Beclin1的表达呈正相关而与mTOR的表达呈负相关。结论自噬相关基因所反应的自噬水平随着宫颈病变的进展而下降,推测自噬功能缺失可能是促使宫颈病变持续发展的原因之一。

胃癌组织PTEN和LC3B的表达及意义

目的检测胃癌中PTEN和LC3B的表达,探讨其表达的临床意义及关系。方法本实验以70例胃癌标本作为观察组,56例正常胃黏膜组织作为对照组,应用量子点免疫荧光方法检测二组中PTEN和LC3B的表达,探讨其表达差别及相关性。结果观察组中PTEN的表达明显低于对照组,观察组中LC3B的表达明显高于对照组,观察组中PTEN和LC3B的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移和Ki67的表达有关。相关性分析显示观察组中PTEN和LC3B的表达不具有相关性。结论胃癌PTEN和LC3B异常表达,二者对病变进展具有重要作用。

HP感染的消化性溃疡伴胃癌前病变与LC3B的相关性研究

目的:阐明幽门螺杆菌(HP)感染伴胃黏膜癌前病变与自噬之间的关系。方法:纳入中山大学附属第五医院消化科胃镜及黏膜下活检确诊为消化性溃疡患者60例,所有患者均采用半定量RT-PCR方法、Western blotting方法检测自噬因子LC3B表达水平,同时行碳14呼气试验进行HP检测,比较HP感染的消化性溃疡伴胃癌前病变与自噬因子LC3B表达水平之间的相关度。结果:LC3B相对表达量与患者的年龄、性别、发病的部位及黏膜损伤(受累范围)的大小差异无统计学意义(P>0.05);而HP感染、胃上皮不典型增生、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生与LC3B的相对表达量具有统计学意义(P<0.05)。结论:自噬因子LC3B mRNA及蛋白高表达与HP感染及消化性溃疡伴胃黏膜不典型增生具有相关性。

组蛋白去乙酰化酶6介导血清饥饿条件下LC3B-Ⅱ的去乙酰化作用

自噬是哺乳动物细胞内控制错误折叠蛋白和受损细胞器降解的重要机制,营养、氨基酸以及细胞因子的缺乏均能诱导自噬.在自噬的信号通路中,一些自噬蛋白已被证明受到乙酰化修饰的调控,进而影响其催化活性的发挥.但是没有研究证明微管结合蛋白1轻链3(LC3)是否受到乙酰化调控.该研究证明了在血清饥饿诱导的自噬过程中,LC3B-Ⅱ的乙酰化程度大幅降低.HDAC6特异性抑制剂tubacin处理细胞后,LC3B-Ⅱ的乙酰化修饰程度随之升高.同时,血清饥饿条件下,抑制HDAC6的催化活性降低了自噬通路的降解能力.该研究结果表明在血清饥饿诱导的自噬过程中,LC3B-Ⅱ发生去乙酰化,其去乙酰化调控蛋白可能是HDAC6,抑制HDAC6的催化活性会减少自噬途径蛋白的降解.HDAC6介导的LC3乙酰化修饰为自噬降解和自噬蛋白调控的研究提供了新思路.

pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建

[目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。

GFP-LC3B真核表达载体的构建及表达鉴定

目的:构建人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B,并鉴定其表达。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增LC3B全长基因,将其克隆至p EGFP-C1表达载体,得到p EGFP-C1-LC3B重组质粒,酶切和测序鉴定后,转染ZR75-1细胞,Western印迹检测真核细胞中GFP-LC3B融合蛋白的表达,用倒置荧光显微镜观察自噬诱导剂雷帕霉素处理和未处理ZR75-1细胞质中GFP-LC3B的分布。结果:Western印迹可见GFP-LC3B融合蛋白表达条带;在荧光显微镜下,ZR75-1细胞内可见绿色荧光,雷帕霉素刺激后有明显绿色荧光聚集体形成。结论:人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B构建成功,为进一步研究自噬在乳腺癌细胞中的作用机制奠定了基础。

应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用

目的:构建带Myc标签的LC3B-PLA2基因的真核表达质粒,获得LC3B-PLA2融合蛋白,并应用LC3B-PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,PCR扩增获得LC3B序列,与PLA2G10拼接后插入pCMV-Myc载体,用构建的重组质粒转染HEK293T细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,用LC3B-PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果:菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,LC3B-PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论:构建了pCMV-Myc-LC3B-PLA2真核表达质粒,LC3B-PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要,为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

紫贻贝LC3B蛋白的原核表达及抗血清制备

LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体。为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索;采用亲和层析对重组蛋白进行纯化,并采用SDS-PAGE检测及Western blot进行验证;利用获得的重组蛋白免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体。结果显示,在20℃,转速为150 r/min条件下,当IPTG浓度为0.6 mmol/L,诱导表达10 h后,可以得到高表达量、可溶性的重组MgLC3B-His融合蛋白,亲和层析纯化后,获得单一条带的MgLC3B-His可溶性重组蛋白;采用纯化后的MgLC3B-His融合蛋白对新西兰兔进行多次免疫,采集分离兔抗血清并利用protein A纯化,获得紫贻贝的LC3B多克隆抗体,效价为25 600。紫贻贝LC3B多克隆抗体的成功制备,为今后深入开展紫贻贝及相近物种的细胞自噬研究奠定了基础。

自噬-溶酶体标记基因LC3B和LAMP2调控序列变异与退行性心脏瓣膜病的关联性

目的探索自噬-溶酶体标记基因LC3B和LAMP2调控序列变异与退行性心脏瓣膜病(DHVD)的关联性。方法对212例DHVD患者组与390例健康对照组的自噬-溶酶体系统标记基因LC3B和LAMP2调控序列(启动子)进行统计分析。采集研究对象的外周静脉血白细胞,提取基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增基因LC3B和LAMP2的启动子序列,Sanger测序法直接检测序列变异。运用卡方检验对单核苷酸多态性(SNPs)进行分析,TRANSFAC数据库预测序列变异改变与启动子相结合的转录因子。结果共发现29个序列变异,包含13个SNPs。其中,6个LC3B基因启动子序列变异仅发现于DHVD患者,1个LAMP2基因启动子序列变异只存在于DHVD女性患者,其他序列变异在健康对照组和患者组共有。对SNPs的基因型和等位基因进行卡方检验和logistic回归分析显示,rs35227715的等位基因G与DHVD相关联,是DHVD的独立危险因素,致病风险是1.36倍;rs42900基因型CC和等位基因C与DHVD存在关联,两者的致病风险均为0.56倍,具有保护性作用。利用TRANSFAC数据库预测仅在DHVD患者中发现的序列变异位点相结合的转录因子,结果表明序列变异可改变与之结合的转录因子。结论自噬-溶酶体系统标记基因LC3B和LAMP2启动子序列变异可能影响与之结合的转录因子,改变其表达水平,引起自噬-溶酶体系统的功能失调,从而导致DHVD的发病。