家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测

为深入了解兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。通过Gram染色镜检、分离培养、16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,测定了该分离株的生长曲线、半数致死量、耐药性并对分离菌株进行β-内酰胺酶耐药基因的检测。结果表明:分离得到1株革兰氏阴性杆菌,命名为P201215,该分离株的16S rDNA基因序列与GenBank中支气管败血波氏杆菌(登录号为NR113628.1)的同源性为99%。分离株的对数生长期为2~9 h,9 h后进入平台期;对KM小鼠的半数致死量为1.19×107 CFU。药敏试验结果显示,分离株对部分头孢菌素类药物耐药,对大部分β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类药物敏感,PCR检测未检出超广谱β-内酰胺酶耐药基因。

“高纯度大豆低聚肽”对动物血糖影响与LD50试验

以长春大学科技开发研究中心研制成功的肽纯度≥90%、相对分子质量分布≤103的成份含量≥80%、NSI值=100%的"高纯度大豆低聚肽"为试材,进行对小鼠血糖影响及LD50试验,结果证明"高纯度大豆低聚肽"具有降低小鼠血糖与肝糖元的功能,而且测不出半数致死量(LD50),证明该产品无毒性。

用于计算半数致死量(LD50)的SAS程序

基于Bliss概率单位法,编写了用于计算半数致死量(LD50)的SAS程序(LD50-SAS)。该程序直接应用原始试验数据,调用SAS系统提供的内部函数,计算LD50及其置信区间,免去了查几率值表、权重系数表等繁琐过程。经验证:该程序效率高、计算速度快、结果精确可靠,是计算LD50及相关参数的可靠程序。程序以文本形式保存和运行,代码透明度高,易于检查和使用。

小檗皮总生物碱的提取纯化、含量测定和急性毒性实验研究

目的:对小檗皮总生物碱进行提取纯化和含量测定,并探讨其对小鼠的急性毒性反应。方法:采用加热回流和大孔吸附树脂提取纯化小檗皮药材中的总生物碱部位。以盐酸小檗碱为对照品,采用酸性染料比色法对提取物中的总生物碱含量进行测定。采用单次给药小檗皮总生物碱提取物,观察小鼠的活动、体质量、死亡等情况;采用加权回归法计算半数致死量(median lethal dose,LD50)及95%置信区间。结果:小檗皮提取物中总生物碱的平均含量为56.84%,其对小鼠的LD50为2.34 g·kg^(-1)(95%置信区间为2.072~2.637 g·kg^(-1)),为临床用量的272.6倍;最大非致死剂量为1.32 g·kg^(-1),为临床用量的153.8倍。结论:小檗皮总生物碱提取物在临床剂量范围内使用安全可靠,为其开发利用提供了科学依据。

吴茱萸肝毒性机制的阐明——基于QSAR毒性预测和代谢组学研究

[目的]吴茱萸是临床上治疗胃肠道疾病的中药,已被广泛应用。然而,吴茱萸在《中国药典》及本草著作中被认为是一种“小毒”的中药。本研究采用毒性预测与体内外研究相结合的方法,鉴定吴茱萸的毒性成分和毒性靶器官,并从代谢角度探讨其毒性机制。[方法]通过体外和体内研究,对吴茱萸的毒性靶器官进行鉴定。通过生物碱富集和分离进行体外毒性筛选。基于定量构效关系(QSAR)构建,通过吸收、分布、代谢、排泄和毒性预测因子(ADMET Prodictor)预测化合物的潜在毒性。此外,研究整合了服用潜在毒性成分后的血清代谢组学分析,以阐明潜在毒性物质对小鼠代谢的影响。[结果]比较不同提取方法及炮制前后对小鼠的急性毒性,吴茱萸醇提物毒性最高,吴茱萸毒性的靶器官为肝脏。吴茱萸醇提物的生物碱组分具有较强的细胞毒性。ADMET Predictor对吴茱萸的潜在毒性进行了计算和预测,认为生物碱是导致吴茱萸毒性的主要原因。而吴茱萸碱在体外显著减少细胞数量,提高线粒体膜电位。吴茱萸碱给药后,小鼠血清代谢组学对不同的代谢产物进行了显著鉴定,其中胆汁酸代谢和类固醇激素生物合成是肝毒性的关键途径。[结论]通过比较不同提取方法在加工前后的急性毒性,阐明吴茱萸炮制品临床应用的科学意义。将基于QSAR的毒性预测与体内外毒性筛选相结合,可以鉴定吴茱萸的潜在毒性靶器官和毒性成分。通过代谢组学研究,初步揭示吴茱萸的肝毒性可能与胆汁酸代谢和类固醇激素生物合成有关。本研究为阐明吴茱萸的作用机理、评价其安全性和质量奠定了基础。

生物标志物联合大蜡螟感染模型在鉴别临床高毒力肺炎克雷伯菌中的应用

目的探讨生物标志物检测联合大蜡螟感染模型准确鉴别临床高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)的应用价值。方法非重复收集2020年1月至2021年12月徐州医科大学附属医院分离自重症监护室患者的肺炎克雷伯菌,经拉丝实验和毒力基因检测鉴定出生物标志物阳性的肺炎克雷伯菌,并进行荚膜血清分型和多位点序列分型。使用标准菌株ATCC700603、ATCC43816建立大蜡螟感染模型,将临床分离的肺炎克雷伯菌分别制作4个不同浓度的菌液进行大蜡螟感染试验,每12小时记录死亡情况,绘制生存曲线并计算72 h 50%致死量(LD_(50))。结果共收集15株hvKP,检出3种血清型,分别为K1 ST23型(13.3%,2/15)、K64 ST11型(60.0%,9/15)、K112 ST15型(26.7%,4/15)。K1和K64型的菌株均含有rmpA、rmpA2、iucA和iroN 4个毒力基因,而K112型的4株均只含有rmpA2和iucA 2个毒力基因。K64 ST11型和K112 ST15型菌株均对碳青霉烯类抗菌药物耐药。大蜡螟能够区分出高毒力和低毒力肺炎克雷伯菌,当菌液浓度分别为1×10^(5) CFU/mL、1×10^(6) CFU/mL、1×10^(7) CFU/mL、1×10^(8) CFU/mL时,ATCC700603和ATCC43816对应浓度比较,差异有统计学意义(P=0.0001、0.0023、0.0245、0.0428)。未做任何处理的空白对照和注射了磷酸盐缓冲液的大蜡螟均存活,随着菌液浓度的升高,大蜡螟的病死率也随之升高。与高毒力标准菌株ATCC43816相同,K1、K64、K112型临床菌株均表现出高致死率,当菌液浓度在1×10^(7)~1×10^(8) CFU/mL时,所有大蜡螟在48 h内死亡。1×10^(6) CFU/mL的菌液可区分出hvKP和cKP,差异均有统计学意义(P<0.05)。ATCC700603、ATCC43816、K1型、K64型、K112型和cKP在72 h的LD_(50)分别为5.2×10^(6) CFU/mL、6.8×10^(4) CFU/mL、1.0×10^(4) CFU/mL、1.0×10^(4) CFU/mL、3.1×10^(4) CFU/mL、1.6×10^(6) CFU/mL,对应的Log10LD_(50)分别为6.718、4.834、3.987、3.987、4.504、6.212,临床分离的K1型、K64型、K112型肺炎克雷伯菌均可被定为高毒力菌株。结论生物标志物联合大蜡螟感染模型,可以准确实现临床经典肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌的鉴别。

小鼠不同途径感染真菌模型的建立及LD50的测定

目的：建立一种稳定的真菌感染的小鼠模型。方法选用健康6～8周龄的BALB/c雌性小鼠，体重16～18g，选择静脉和鼻饲给药，每天进行死亡情况观察，连续观察26～31d，计算小鼠的半数致死量（LD50）。结果经尾静脉注射白假丝酵母菌给药小鼠高剂量组（2×10^7）全部死亡，中剂量组（2×10^6）4只死亡，低剂量组（2×10^5）没有死亡，鼻饲给药组小鼠高中低剂量均无死亡，说明小鼠的死亡与剂量高低、给药途径有直接关联的小鼠出现死亡。结论在利用小鼠做真菌感染的实验时，尽可能选择鼻饲给药。

蒙医药三种不同炮制方法对商陆总皂苷含量和小鼠LD50的影响

目的：探讨商陆不同炮制方法对商陆皂苷含量和小鼠‰的影响。方法：采用分光光度法。在500nm波长处测定商陆不同炮制品中商陆皂苷的含量。以Bliss法，计算商陆不同炮制品的LD50。结果：商陆经炮制后商陆皂苷含量变化规律为生品〉醋制品〉奶炮制品〉黑豆炮制品。商陆经过炮制后LD50由大到小的顺序依次是：商陆奶制品〉商陆黑豆制品〉商陆醋制品〉商陆生品。

车载式LD50-6型蒸馏水器制水实验研究

介绍了车载式LD50—6型蒸馏水器的制水原理,讨论了蒸馏水产量与蒸汽压力、进料水流量、浓缩水排放量以及传热面积的关系;制取每公斤蒸馏水所耗蒸汽与效数的关系;冷却水耗量与效数的关系。解决了该蒸馏水器不用外加冷却水的技术难点。

加米霉素对大鼠的经口急性毒性(LD50)试验

为研究加米霉素对大鼠的经口急性毒性(LD_(50)),选用50只大鼠,随机分为5组,每组10只,采用寇氏法进行大鼠经口染毒加米霉素的急性毒性试验。结果显示,加米霉素大鼠经口染毒的LD_(50)为2219.14mg/kgb.w.,表明加米霉素具有较低的毒性。

羟丁酸钠对氯胺酮LD50和催眠ED50的影响

目的探讨羟丁酸钠（sodium oxybate，SO）对氯胺酮（ketamine，Ket）半数致死量（median lethal dose，LD50）和催眠半数有效量（median effective dose，ED50）的影响。方法生理盐水组（NS组）腹腔注射生理盐水10ml·kg-1，羟丁酸钠组（SO组）腹腔注射羟丁酸钠200mg·kg，20min后再分别腹腔注射等比剂量的氯胺酮溶液，用序贯法测定氯胺酮的LD50和催眠ED50。结果羟丁酸钠使氯胺酮LD50增高（P〈0．01），催眠ED50降低（P〈0．01）。结论羟丁酸钠能够降低氯胺酮的毒性，并可增强其催眠作用。

万寿菊镇咳有效部位LD50和ED50的测定

目的:研究万寿菊镇咳的有效部位的LD50和ED50,为新药开发研究提供依据。方法:浓氨水引咳法研究万寿菊有效部位的药理作用;Bliss法测量它的LD50,ED50。结果:万寿菊镇咳有效部位的ED50为11.95 mg/kg,LD50测不出。结论:万寿菊的镇咳有效部位毒性很低,非常安全。

四种不同方法注射眼镜蛇蛇毒对小鼠LD50的影响分析

目的 比较小鼠经不同途径注射眼镜蛇蛇毒的半数致死量(LD50),并观察中毒症状。方法将小鼠分别经四种途径注射眼镜蛇毒冻干粉溶液,并根据各组小鼠死亡情况,运用Bliss软件测定LD50估计值、置信区间等。观察各组小鼠生物学行为及死亡情况,并对死亡小鼠和存活小鼠进行解剖分析。结果小鼠经静脉、腹腔、肌肉和皮下注射眼镜蛇蛇毒的LD50分别为0.691mg/kg、0.741mg/kg、0.803mg/kg和0.915mg/kg,95%CI分别为0.634~0.742mg/kg、0.676~0.792mg/kg、0.754~0.856mg/kg和0.851~1.05mg/kg。各组小鼠中毒症状明显,表现为呼吸困难、精神萎靡、眼球昏暗、眼角有分泌物、身体出现扭体抽搐等反应,均在2~9h内死亡。结论小鼠经静脉注射眼镜蛇毒溶液中毒的毒性剂量最小,皮下注射眼镜蛇毒溶液中毒的毒性剂量最大。小鼠经四种不同途径注射眼镜蛇蛇毒的LD50的值按从大到小的排序为皮下注射,肌肉注射,腹腔注射,静脉注射。

LD50断桥铝合金门窗

自1999年开始，日本YKKAP公司先后在大连、深圳、苏州设立工厂，专业生产塑钢、铝合金型材及配件，相继研发了塑钢门窗S系列、断桥铝合金门窗LD系列、铝合金门窗L型3大系列产品。

YKK AP推出LD50断桥铝合金门窗

日本YKK AP日前正式面向中国市场推出其精心研制的新品LD50断桥铝合金门窗。YKK AP是全球领先的外墙开口建材生产企业。作为YKK集团的一员，YKK AP自1957年在日本成立建材总部至今，已积累了数十年塑钢、铝合金门窗生产销售的经验和技术。从1999年开始，YKK AP先后在大连、深圳、苏州设立工厂，专业生产塑钢、铝合金型材及配件，相继研制开发了塑钢门窗S系列、断桥铝合金门窗LD系列、铝合金门窗L型三大系列产品。

YKK AP力推额品LD50断矫铝吕金门窗

YKK AP中国公司邀请上海知名房地产商、设计院等于2007年9月12日在上海同乐坊召开新品发布会，正式向市场推出其精心研制的新品LD50断桥铝合金门窗。

小白鼠口服自制红药膏LD50测定的研究

目的使自制红药膏（由23味中药＋17味西药结合而成治疗烧伤的外用软膏[批号：[批号：鄂药制字（2001）第CX02—017号]急性毒性试验LD50的测定用小白鼠直接口服软膏法。方法小白鼠65只。先用8只做“预试”。其中5只从小剂量（存活剂量）按1．4的比率增幅到大剂量（致死剂量）。避免受试剂量损失，制订5个不同名称的剂量，计算出的“实际服药量”接近“计划服药量”或“标准服药量”。据数学“近似值原理”列出5个不同“标准剂量组”小白鼠死亡率。再按寇氏法（Karber氏法）算出LD50数值和可信限范围。结果为22905～32400mg／kg，属“基本无害”药膏。结论软膏直接口服测定LD50需多次称重和计算。此试验比将软膏改变成液体剂型以满足给药途径或把软膏与饲料掺和吞食等法更合理、更准确。