pCR3.1-bvLDH-C′_4的构建及在体内外的表达

精子特异性乳酸脱氢酶 (LDH C4)在精子的运动和存活等生理活动中起着重要的作用。研究表明 ,LDH C4接种鼠、兔等能够降低动物的生育率。通过RT PCR方法从布氏田鼠睾丸总RNA中克隆出编码抗原决定簇的LDH C4基因片断 ;采用T A克隆的方法将其插入到pCR3 1载体中构建重组载体pCR3 1 bvLDH C′4,测序结果表明克隆的基因片断与已知小鼠相应片断有 83 %的序列同源。通过质脂体法转染HeLa细胞 ,RT PCR证实其可在mRNA水平有效表达 ;通过肌肉接种BALB c小鼠 ,RT

不育症精子乳酸脱氢酶同工酶C_4的细胞化学定位、定量研究

本文采用酶细胞化学方法，在光镜下用积分分级计数法，全自动图像分析仪检测精子ＬＤＨ－Ｃ４活性，两法测定ＬＤＨ－Ｃ４活性显著正相关（ｒ＝０．８０１和０．７４２，Ｐ＜０．０１）；ＬＤＨ－Ｃ４酶细胞化学电镜技术观察精子ＬＤＨ－Ｃ４活性，通过计数酶点可测定ＬＤＨ－Ｃ４活性。本文检查３８例不育男性和２０例已生育男性精子ＬＤＨ－Ｃ４活性，ＬＤＨ－Ｃ４主要分布于精子ＳＴＭ及胞质，其次是顶体及质膜表面。可通过胞膜外逸到精浆，ＬＤＨ－Ｃ４在各部活性比值为５∶２∶１∶１。不育组精子ＬＤＨ－Ｃ４可能通过膜破损处外漏到精浆使精子内ＬＤＨ－Ｃ４显著减少，ＬＤＨ－Ｃ４在精子顶体亦显著减少，使不育组精子ＬＤＨ－Ｃ４活性显著低于生育组精子，提示ＬＤＨ－Ｃ４活性的定位和大小直接与生育能力相关，检测ＬＤＨ－Ｃ４活性可作为检查不育症精子质量的可靠指标。ＬＤＨ－Ｃ４与精子密度显著相关（ｒ＝０．７３７和－０．４９３，Ｐ＜０．０５）；与活动性无相关性。