房劳-倦劳肾阳虚模型小鼠睾丸LDH-x基因表达的实验研究

目的:观察"房劳-倦劳"肾阳虚模型小鼠睾丸精子特异酶LDH-x mRNA表达的改变。方法:用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,以Colldege效应诱导雄性小鼠房事不节,建立肾阳虚小鼠模型。造模给药4周后,运用实时荧光定量RT-qPCR法检测睾丸中LDH-x mRNA的表达。结果:"房劳-倦劳"肾阳虚模型组LDH-x mRNA显著低于正常组(P<0.01),金匮肾气丸治疗组LDH-x mRNA则明显高于模型组(P<0.05)。结论:该肾阳虚小鼠精子特异酶LDH-x活性的下降以及经肾气丸治疗后LDH-x活性的升高,是LDH-x基因表达改变的结果。

人睾丸LDH-X的纯化

乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶,(LDH-X)以不同的比例广泛存在于哺乳动物各组织细胞中。1963年Blanco和Goldberg等在人青春期后睾丸及精液、精子中发现LDH-X。LDH-X只存在于精母细胞、精子细胞和精子中。除睾丸外其它器官不产生这种同工酶。LDH-X是由C-亚基组成的四聚体,这种C一亚基是由仅在睾丸中表达的LdhC(乳酸脱氢酶C)基因编码。生精过程中LDH-X的合成起始于初级精母细胞减数分裂前期的粗线中期并持续于整个生精过程中。我们按Wong C法加以改进提纯了人睾丸的LDH-X。材料与方法一、材料及试剂新鲜人睾丸去净包膜。

睾丸组织特异酶LDH-X的分离纯化与动物免疫避孕效果观察

本试验以大鼠睾丸组织为材料,粗提液通过热变性处理,分段盐析和DEAE—Sephalex A—50凝胶电泳纯的乳酸脱氢酶X(LDH-X),以完全佐剂LDH—X为抗原,免疫同种雌大鼠,能使怀孕率下降约65—85%,表明LDH—X具有明显的抗生育效果。

精子内LDH-X同工酶活力与自然流产关系分析

本文对44例健康有一胎以上生育史妻子无流产史男子和54例妻子有不明原因流产史的男子,检测精子内LDH-x同工酶相对活力和比活性。正常组男子精子内LDH-x相对活力为45.30％±5.60％,比活性为9.1±4.4u/mg精子沉淀蛋白质。流产组按～2月,～3月,～4月,～5月,～6月分为五组,其精子内LDH-x相对活力分别为35.4％,38.5％,43.6％,44.4％,44.13％,相关回归分析发现LDH-x相对活力与维持妊娠时间呈正相关,比活性分别为3.4,3.9,5.15,6.5,7.83u/mg精子沉淀蛋白;～2月,～3月,～4月以内流产组丈夫精子内LDH-x比活性与正常组比较有显著统计学差别,～5月,～6月流产组无显著统计学差别,提示丈夫精子内LDH-x比活性低下可导致妻子早期流产。

六价铬对男工血清及精浆乳酸脱氢酶C_4同工酶的影响

为了调查六价铬对男性生殖功能的危害，采用“热解－乳酸基质法”测定了２３名接铬男工和２１名对照男工的血清及精浆乳酸脱氢酶Ｃ４同工酶（ＬＤＨＸ）活性。结果显示，职业性接触低水平六价铬（００１３５ｍｇ／ｍ３）可致男工血清ＬＤＨＸ活性降低，与对照组比较差异有统计学显著意义（Ｐ＜００５）。接触组精浆的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）总活性及ＬＤＨＸ活性均显著低于对照组（Ｐ＜００１），ＬＤＨＸ／ＬＤＨ比值也低于对照组，提示六价铬对男性生殖功能可能产生危害。

硝基苯对小鼠睾丸细胞酶的作用

以剂量为１００ｍｇ／ｋｇ体重、５００ｍｇ／ｋｇ体重的硝基苯（ＮＢ）分别给雄性小白鼠经口染毒。染毒２天后，各染毒组的睾丸组织中Ｇ－６－ＰＤ、ＬＤＨ－ｘ、ＳＤＨ的活性均明显低于对照组。染毒４天后，染毒组Ｇ－６－ＰＤ活性恢复到对照水平；ＬＤＨ－ｘ的１００ｍｇ／ｋｇ体重组恢复到对照水平，而５００ｍｇ／ｋｇ组仍明显低于对照组；ＳＤＨ活性染毒组仍低于对照组。ＬＰＯ值在染毒２天、４天后与对照组相比均无显著差异。

乙二醇对大鼠睾丸和附睾中某些酶的影响

研究了乙二醇对大鼠睾丸和附睾中某些酶的影响。Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，乙二醇连续灌胃染毒１３周，剂量分别为６６６，１３３２和２６６４ｍｇ／ｋｇ。结果表明，所有染毒组大鼠睾丸中ＬＤＨ（ＬＤＨ－Ｘ）酶活性均明显下降；剂量为１３３２ｍｇ／ｋｇ染毒组，引起ＡＣＰ和ＡＫＰ酶活性明显下降，但对γ－ＧＴ酶活性无明显作用。低剂量时乙二醇就能引起附睾中ＬＤＨ，γ－ＧＴ，ＡＣＰ和ＡＫＰ酶活性明显升高。结果提示，乙二醇对睾丸中ＬＤＨ（ＬＤＨ－Ｘ），ＡＣＰ和ＡＫＰ均有影响，其中ＬＤＨ（ＬＤＨ－Ｘ）酶活性对乙二醇的毒性较敏感。此外，乙二醇对附睾中这些酶活性也有非常显著的影响，表现为小剂量刺激，高剂量抑制。

基于CT影像学指标和临床病理特征构建预测胆囊癌病人预后的列线图模型

目的基于CT影像学指标和临床病理特征构建预测胆囊癌病人3年内死亡风险的列线图(Nomogram)模型。方法选取2011年1月至2019年4月河南大学第一附属医院接收的胆囊癌病人284例为研究对象,按1∶1分为建模组(n=142)及验证组(n=142),根据术后病人3年内生存状态分为生存组和死亡组。采用R软件构建预测胆囊癌病人3年内死亡风险的Nomogram模型。结果生存组(n=45)年龄≥60岁比例(14/45比57/97)、T分期为T2~T3期比例(19/45比77/97)、N分期为N1~N2期比例(19/45比74/97)、胆管侵犯比例(2/45比20/97)、十二指肠侵犯比例(1/45比17/97)、肝侧受累比例(17/45比60/97)、肝侵犯比例(10/45比52/97)、结肠侵犯比例(2/45比18/97)低于死亡组(n=97)(P<0.05)。基于危险因素用R软件建立Nomogram模型,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示,建模组χ2=6.29,P=0.614;验证组χ2=7.59,P=0.474;建模组受试者操作特征(ROC)曲线下面积为0.79;验证组ROC曲线下面积为0.81。结论基于CT影像学指标和临床病理特征构建Nomogram模型预测胆囊癌病人3年内死亡风险,具有广泛的临床应用价值。

Ce_(2)/Cu_(4)Al_(1)O_(x)催化剂的脱硝性能及PbCl_(2)耐受性

以类水滑石(Layered Double Hydroxides,LDHs)为前驱体,制备了铈(Ce)掺加的Ce_(2)/Cu_(4)Al_(1)O_(x)催化剂,运用XRD、SEM、XPS、NH_(3)-TPD、H2-TPR、in situ DRIFT等多种技术手段进行了表征,并将该催化剂用于氨选择性催化还原(NH_(3)-SCR)烟气脱硝系统,考察其脱硝性能及PbCl_(2)耐受性。实验结果表明,当催化剂中Pb质量分数为0.5%、反应温度为200℃时,Ce_(2)/Cu_(4)Al_(1)O_(x)催化剂的NO_(x)转化率为85.2%,远高于Cu/Al_(2)O_(3)(43.8%)和Cu-Ce/Al_(2)O_(3)(53.1%)。表征结果表明:PbCl_(2)能够引起催化剂比表面积降低,但对催化剂的晶体结构没有显著影响;PbCl_(2)会使催化剂表面活性物种的氧化还原性能降低,减少表面化学吸附氧;并可显著降低催化剂表面酸度,减少NH_(3)的吸附和活化,从而导致催化活性降低。Ce_(2)/Cu_(4)Al_(1)O_(x)催化剂具有优异PbCl_(2)耐受性的原因在于活性物种高度分散、酸性位点多、氧化还原能力强。

“劳倦过度、房室不节”肾阳虚模型小鼠睾丸乳酸脱氢酶-X活性的测定

[目的]观察"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠睾丸乳酸脱氢酶(LDH)总活性及精子特异酶LDH-X活性的改变。[方法]睾丸匀浆用2,4-二硝基苯肼显色法测定丙酮酸的生成量[1],计算每克睾丸湿组织LDH总活性和LDH-X同工酶活性。[结果]"劳倦过度、房室不节"肾阳虚造型组LDH总活性显著低于正常对照组(P<0.05,P<0.01),金匮肾气丸治疗组较"劳倦过度、房室不节"肾阳虚造型组则显著升高(P<0.05,P<0.01);LDH-X活性造型组第2周较对照组有下降的趋势,但无统计学意义,第4、第6周下降显著(P<0.01);治疗组较造型组第2周有升高趋势,但无统计学意义,第4、第6周则显著升高(P<0.01)。[结论]从精子特异酶LDH-X活性改变,证明了"肾主生殖"有现代科学依据,该模型系肾阳虚模型。

镉对大鼠睾丸毒作用的酶学研究

为研究镉对睾丸的生化毒作用机理 ,应用氯化镉对成年雄性SD大鼠进行腹腔染毒 ,染毒剂量分别为 0 2、0 4和0 8mg/kg体重。连续染毒 7天后将动物处死 ,测定睾丸中各种酶的活性 ,同时进行睾丸精子头计数并计算每日精子生成量。结果显示 ,中剂量组碱性磷酸酶 (ALP)和乳酸脱氢酶同工酶 X(LDH X)活性即有显著降低 ,高剂量组降低更明显。而其它一些酶的活性如酸性磷酸酶 (ACP)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH)、葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G 6PD)、山梨醇脱氢酶 (SDH)等及睾丸精子头计数和每日精子生成量仅在高剂量组出现明显降低。因此镉的雄性生殖毒性机理与酶的活性间存在一定关系。ALP和LDH X可作为反映镉雄性生殖毒性较敏感的生化指标。

层状双氢氧化物即时合成处理含Cr(Ⅵ)废水

利用LDH合成原理 ,提出了即时合成层状双氢氧化物去除Cr(Ⅵ )的新方法 .其基本原理是 ,在废水处理中由于Mg2 +、Al3 +水解共沉淀形成LDH ,Cr(Ⅵ )阴离子优先进入LDH结构层间平衡结构电荷 ,从而使Cr(Ⅵ )阴离子以LDH沉淀的形式被去除 .这一原理已为模拟废水实验和沉淀物结构分析证实 .研究结果表明 ,影响处理效果的因素是Mg/Al比值、pH值以及Cr(Ⅵ )浓度 ,当 pH值为 8 5～ 9、Mg/Al为 1∶1～ 2∶1时Cr去除率最高 ,Mg、Al利用率也比较高 ,出水水质满足工业排放要求 。

虫草素/LDH纳米复合物对U937肿瘤细胞的抑制作用

目的防止虫草素被腺苷脱氨酶降解。方法虫草素置换层状双氢氧化物(LDH)中的NO3-,插入到LDH层间,得到稳定虫草素/LDH纳米复合物。将复合物作用于U937肿瘤细胞,研究其对肿瘤细胞的抑制作用。结果LDH能够抑制U937肿瘤细胞的腺苷脱氨酶对虫草素的降解,虫草素/LDH纳米复合物抑制肿瘤细胞的复制生长,诱导细胞凋亡。结论LDH可以防止虫草素被腺苷脱氨酶降解。

即时合成层状双氢氧化物处理高氟水的实验研究

提出了即时合成层状双氢氧化物去除F-的新方法,并初步揭示了反应的基本原理:首先由Mg2+、Al3+水解共沉淀形成LDH,然后F-嵌入LDH层间平衡结构电荷,从而使F-离子以LDH沉淀的形式被去除。研究结果表明,影响处理效果的因素包括Mg/Al比值、pH值、反应时间等。当Mg/Al为2∶1,pH值为9.5,反应时间为120 min时,F-去除率较高,Mg、Al利用比较充分,显示这种废水处理技术具有非常好的研究价值。

急性镉中毒小鼠睾丸乳酸脱氢酶同工酶－X活性的改变及锌的保护作用

用组织化学方法研究急性镉中毒小鼠睾丸ＬＤＨ－Ｘ活性改变，染镉１ｈ组曲细精管ＬＤＨ－Ｘ活性无明显下降；染镉３ｈ组ＬＤＨ－ｘ活性降低（Ｐ＜０．０５），６及１２ｈ组活性更低，与正常组比差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。染镉前以锌保护，染镉１ｈ和３ｈ组ＬＤＨ－Ｘ活性与正常组无明显差异；而６ｈ及１２ｈ组酶活性下降（分别Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），但其ＬＤＨ－Ｘ活性仍显著高于相应时间的镉中毒组（分别Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０，０１），提示急性镉中毒可导致睾丸曲细精管ＬＤＨ－Ｘ活性降低，锌对其活性有一定程度的保护作用。

精子内LDH—X同工酶的聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳分离测定

作者用聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(PAGE)分离50例有正常生育力的男性的精子内LDH-X,相对活力为44.17%±7.9%,LDH-X 活力单位均值为604U/dl 精子匀浆液.56例停服避孕药棉酚8～13年的男性精子内LDH-X 相对活力均值29.61%,LDH-X 活力单位是257U/dl 精子均浆液,经统计学处理P<0.01,与正常生育组有极显著差别,表明棉酚对精子内LDH-X 有持久的干扰作用.测定了LDH-X 的相对泳动率Rf 值,可作为判定LDH-X 的一个标志.

酶组化显示睾丸LDH－X方法的再探讨

对小鼠睾丸冰冻切片ＬＤＨ－Ｘ的显示方法作了进一步探讨。实验表明，以Ｌ－２－羟基－３－甲基戊酸（ＨＭＶ）为特异性底物，能相当有效地显示睾丸ＬＤＨ－Ｘ的分布，且该底物的配制方法简便易行。在显示ＬＤＨ－Ｘ的孵育液中采用萘酚蓝（ＮＢ）作中间递电子体较吩嗪甲基硫酸酯更具优越性。

小鼠脑组织高能X射线照射后K^+、Na^+、Ca^(2+)、LDH的变化

以１５０Ｇｙ高能Ｘ射线１次或分２次（每次７５Ｇｙ，间隔２４ｈ）照射小鼠全脑，１周后处死小鼠，立即取出全脑称重（湿重）后测定。结果，１次与分２次照射，对脑组织靶区产生相同的放射生物学效应，即引起脑组织乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性和Ｎａ＋、Ｃａ２＋含量明显升高（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），Ｋ＋含量下降（Ｐ＜０．０５）。

小鼠氧乐果亚慢性染毒对其睾丸特征性酶的影响

研究了氧乐果亚慢性染毒对雄性小鼠睾丸特征性酶的影响。将80只昆明雄性小鼠随机分成4组。染毒组分别灌胃0.5、1、2mg/kg氧乐果,对照组灌胃生理盐水,每周灌胃5d,共灌胃7周。用比色法检测睾丸组织中睾丸特征性酶——碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、酸性磷酸酶(acid phosphatas,ACP)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及乳酸脱氢酶X酶(lactate dehydrogenase–x,LDH-x)的活力,所得数据采用SPSS11.0软件进行方差分析。结果表明,随着氧乐果染毒剂量的增加,高剂量氧乐果可使部分雄性小鼠睾丸产生明显的睾丸萎缩,实质硬化等病变。睾丸AKP和ACP活力(分别为201.27±56.01U/g和348.61±78.58U/g)明显升高,与对照组(AKP为130.67±17.02U/g,ACP为239.97±40.39U/g)比较有极显著性差异(P<0.01),睾丸LDH-x(645.95±177.28U/g)的活力则显著下降(P<0.05,对照组为1058.56±159.20U/g),表明亚慢性染毒氧乐果对小鼠睾丸特征性酶有影响,并呈现明显的剂量效应关系。