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温经通络汤含药血清对小鼠软骨细胞损伤及IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴的影响研究
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作者 魏伟 彭晨健 +4 位作者 顾任钧 颜习武 叶嘉鹏 黄桂成 孙鲁宁 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期469-478,共10页
目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9... 目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)的mRNA表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平。结果温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P<0.05,P<0.01),下调IκB-ζ(P<0.05)和P65蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13以及ADAMTS4 mRNA表达(P<0.01),抑制MMP13(P<0.05,P<0.01)和MMP3(P<0.05)的蛋白表达。氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4的表达,降低细胞内糖酵解水平(P<0.05,P<0.01)。结论温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关。 展开更多
关键词 温经通络汤含药血清 IκB-ζ/HIF-1α/ldha 白细胞介素-1Β 软骨细胞损伤
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Proteo-transcriptomic profiles reveal key regulatory pathways and functions of LDHA in the ovulation of domestic chickens(Gallus gallus)
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作者 Ruixue Nie Wenhui Zhang +5 位作者 Haoyu Tian Junying Li Yao Ling Bo Zhang Hao Zhang Changxin Wu 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第4期1449-1465,共17页
Background In poultry, the smooth transition of follicles from the preovulatory-to-postovulatory phase impacts egg production in hens and can benefit the poultry industry. However, the regulatory mechanism underlying ... Background In poultry, the smooth transition of follicles from the preovulatory-to-postovulatory phase impacts egg production in hens and can benefit the poultry industry. However, the regulatory mechanism underlying follicular ovulation in avians is a complex biological process that remains unclear.Results Critical biochemical events involved in ovulation in domestic chickens(Gallus gallus) were evaluated by transcriptomics, proteomics, and in vitro assays. Comparative transcriptome analyses of the largest preovulatory follicle(F1) and postovulatory follicle(POF1) in continuous laying(CL) and intermittent laying(IL) chickens indicated the greatest difference between CL_F1 and IL_F1, with 950 differentially expressed genes(DEGs), and the smallest difference between CL_POF1 and IL_POF1, with 14 DEGs. Additionally, data-independent acquisition proteomics revealed 252 differentially abundant proteins between CL_F1 and IL_F1. Perivitelline membrane synthesis, steroid biosynthesis, lysosomes, and oxidative phosphorylation were identified as pivotal pathways contributing to ovulation regulation. In particular, the regulation of zona pellucida sperm-binding protein 3, plasminogen activator, cathepsin A, and lactate dehydrogenase A(LDHA) was shown to be essential for ovulation. Furthermore, the inhibition of LDHA decreased cell viability and promoted apoptosis of ovarian follicles in vitro.Conclusions This study reveals several important biochemical events involved in the process of ovulation, as well as crucial role of LDHA. These findings improve our understanding of ovulation and its regulatory mechanisms in avian species. 展开更多
关键词 CHICKEN Data-independent acquisition proteomics ldha OVULATION Regulatory mechanism TRANSCRIPTOME
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FHL2与LDHA相互作用促进胶质瘤细胞的增殖
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作者 吴国庆 张婷 +3 位作者 宋小锋 朱婷 李娜 李明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期976-983,共8页
目的:探讨四个半LIM结构域2(FHL2)蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法:利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC2... 目的:探讨四个半LIM结构域2(FHL2)蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法:利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC23、A172、LN229、G267和星形胶质细胞NHA中的FHL2蛋白表达水平。利用慢病毒载体构建稳定敲低FHL2的U87细胞和过表达FHL2的SNB19细胞,即U87-shGFP、U87-shFHL2-1#、U87-shFHL2-4#和SNB19-3flag、SNB19-3flag-FHL2组。通过CCK-8法、克隆形成实验检测敲低和过表达FHL2对细胞增殖的影响,免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC/MS)法筛选FHL2在胶质瘤细胞中的相互作用蛋白,并用Co-IP和免疫荧光法验证它们的结合作用和共定位情况。使用酶标仪检测敲低和过表达FHL2细胞内乳酸产量和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,WB法分析FHL2、LDHA及p-LDHA在正常脑组织和胶质瘤组织中的蛋白表达差异及其相互关系。在过表达FHL2的SNB19细胞中使用LDHA的小分子抑制剂AT-101,通过CCK-8实验和酶标仪比色法验证FHL2在胶质瘤乳酸代谢中的作用,验证AT-101在胶质瘤中潜在的治疗效果。结果:Co-IP和LC/MS检测发现,FHL2与LDHA在胶质瘤细胞中存在相互作用。FHL2过表达可提高LDHA活性和乳酸生成(均P<0.001),进而促进胶质瘤细胞增殖(P<0.001)。相反,敲低FHL2会降低LDHA活性和乳酸产量(P<0.001或P<0.05)并抑制细胞增殖(P<0.001)。AT101能抑制LDHA活性,并显著抑制FHL2促进胶质瘤细胞的增殖,同时恢复磷酸化LDHA(Y10)水平(P<0.01或P<0.001)。结论:FHL2与LDHA蛋白相互作用,FHL2通过激活p-LDHA(Y10)的表达促进LDHA活性和乳酸产生,进而促进胶质瘤细胞的增殖,靶向这种相互作用可能成为治疗胶质瘤的潜在策略。 展开更多
关键词 四个半LIM结构域2 乳酸脱氢酶A 胶质瘤 U87细胞 SNB19细胞 增殖
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糖酵解相关基因HIF⁃1α、FOXO4、LDHA在胃癌中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 朱方圆 朱耀东 +2 位作者 彭强 张效泽 李平 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2023年第9期798-805,共8页
目的检测糖酵解相关基因缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转录因子叉头框蛋白(FOX)O4(FOXO4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法UALCAN、LinkedOmics数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA... 目的检测糖酵解相关基因缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转录因子叉头框蛋白(FOX)O4(FOXO4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法UALCAN、LinkedOmics数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA在胃癌组织与正常组织中的表达及与表达相关的基因。免疫组化方法检测70例胃癌组织、癌旁组织及30例正常胃组织中HIF-1α、FOXO4、LDHA的表达,分析其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。Spearman相关性检验分析HIF-1α、FOXO4、LDHA表达的相关性,并用Starbase数据库验证三者间的关系。Kaplan-Meier Plotter数据库分析HIF-1α、FOXO4、LDHA表达对患者生存预后的影响。选择与HIF-1α、FOXO4、LDHA表达相关的前50个基因与GeneCards中获得的胃癌相关基因取交集,并进行KEGG分析。结果生物信息学分析显示,胃癌组织中HIF-1α、LDHA高表达而FOXO4低表达,且三者可以共表达。免疫组化结果显示,胃癌组织中HIF-1α、LDHA高表达而FOXO4低表达;胃癌组织中HIF-1α、FOXO4、LDHA的表达与患者的TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<005)。Spearman相关性分析表明HIF-1α与FOXO4的表达呈负相关(r=-0338,P<005),HIF-1α与LDHA的表达呈正相关(r=0462,P<005)。Cox单因素与多因素回归分析结果显示,HIF-1α阳性、LDHA阳性、FOXO4阴性、淋巴结转移、肿瘤分期晚及分化程度低为胃癌不良的预后影响因素(P<005);Kaplan-Meier Plotter数据库的生存分析也表明HIF-1α、FOXO4、LDHA与患者生存预后有关(P<005)。KEGG分析显示三者均参与了胃癌的糖酵解/糖异生、HIF-1α通路等过程。结论HIF-1α、LDHA高表达于胃癌组织,FOXO4低表达于胃癌组织,且与胃癌患者的临床病理特征及生存预后密切相关,并可反映糖酵解情况,三者的检测有助于胃癌的诊疗及预后预测。 展开更多
关键词 胃癌 HIF-1Α FOXO4 ldha 临床病理特征 预后 数据库
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转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析
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作者 左梦娜 何佳宁 +2 位作者 尹千禧 王凤梅 马利兵 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期3719-3726,共8页
【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因(LDHA)酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,... 【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因(LDHA)酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123,再将重组表达载体p AUR123-LDHA导入商业化酿酒酵母EC1118株,采用Aureobasidin A筛选转基因酿酒酵母。将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株分别接种于含200 g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5 d,期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸能力,以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性。【结果】牛LDHA基因编码序列长1170 bp,共编码389个氨基酸残基;以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子,其替换率高达58.35%。牛LDHA在酿酒酵母中的预计半衰期>20 h,其二级结构富含α-螺旋和无规则卷曲。替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载体pAUR123携带导入酿酒酵母中,经Aureobasidin A筛选获得1株转基因酿酒酵母菌株,命名为EC1118-LDHA。转基因酿酒酵母EC1118-LDHA株以200 g/L葡萄糖为碳源,发酵24 h后的LDHA活性达4.7±1.2 mU/mg,发酵2~3 d后约制备出30 g/L乳酸,同时产生约70 g/L乙醇,乳酸产出率约为0.15 g/g葡萄糖。【结论】将替换酿酒酵母偏好密码子后的牛LDHA基因编码序列导入酿酒酵母中能成功构建转牛LDHA基因酿酒酵母,牛LDHA基因的导入不会影响商业化酿酒酵母的发酵能力,且赋予了酿酒酵母以200 g/L葡萄糖为碳源约制备出30 g/L乳酸的能力。因此,采用转牛LDHA基因酿酒酵母制备食品级乳酸完全可行。 展开更多
关键词 酿酒酵母 乳糖脱氢酶A基因(ldha) 乳酸 发酵
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LDHA抑制剂与靶向药物联用协同抑制延胡索酸水合酶缺陷型肾癌细胞增殖
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作者 洪奕伦 王建丰 张进 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2023年第10期900-905,共6页
目的探索乳酸脱氢酶A(LDHA)抑制剂及靶向药物对延胡索酸水合酶(FH)缺陷型肾癌的治疗作用。方法采用RNA-seq检测FH缺陷型肾癌组织中的mRNA表达情况,并采用实时荧光定量生物聚合酶联反应(PCR)和免疫组化染色进一步验证;分别用LDHA抑制剂[(... 目的探索乳酸脱氢酶A(LDHA)抑制剂及靶向药物对延胡索酸水合酶(FH)缺陷型肾癌的治疗作用。方法采用RNA-seq检测FH缺陷型肾癌组织中的mRNA表达情况,并采用实时荧光定量生物聚合酶联反应(PCR)和免疫组化染色进一步验证;分别用LDHA抑制剂[(R)-GNE-140]和上市肾癌靶向药物(阿昔替尼、卡博替尼、舒尼替尼、索拉非尼、培唑帕尼、依维莫司)处理人源FH缺陷型肾癌细胞系UOK262和鼠源FH缺陷型细胞系FH1-/-CL19(简称CL19),再将LHDA抑制剂联合靶向药物处理细胞,观察细胞增殖能力的改变,采用CompuSyn软件分析不同剂量组联合用药的联合指数CI,确定最佳联合方案。结果LDHA抑制剂及卡博替尼、索拉非尼和舒尼替尼对FH缺陷型肾癌细胞增殖有明显抑制效果,且LDHA抑制剂联用靶向药物卡博替尼、索拉非尼或培唑帕尼具有显著的抗肿瘤效果。结论LDHA抑制剂联合肾癌靶向药物能够显著抑制FH缺陷型肾癌细胞生长,提示LDHA可能为FH缺陷型肾癌潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 FH缺陷型肾癌 乳酸脱氢酶A抑制剂 靶向药物 药物联合治疗 联合指数 卡博替尼 索拉非尼 舒尼替尼 培唑帕尼
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民猪PGD和LDHA基因的表达与冷诱导研究 被引量:4
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作者 张冬杰 刘娣 +2 位作者 汪亮 王文涛 杨国伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期17-21,共5页
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD)是戊糖代谢途径中的一个关键酶,乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)是动物体内参与糖酵解的重要酶类之一。为了探讨PGD和LDHA基因在民猪抵御寒冷气候的过程中是... 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD)是戊糖代谢途径中的一个关键酶,乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)是动物体内参与糖酵解的重要酶类之一。为了探讨PGD和LDHA基因在民猪抵御寒冷气候的过程中是否起着一定的生物学作用,研究采用RT-PCR和Real-time PCR的方法,分析了这2个基因在民猪大肠,腿肌、肺、脂肪、心脏、脾脏和肝脏的表达情况以及冷诱导后在腿肌的表达变化情况。结果表明,PGD基因在所检的7个组织内均高水平表达,冷诱导后表达水平显著上升(P<0.05),LDHA基因在所检的7个组织中也均有表达,冷诱导后表达水平出现显著下降(P<0.05)。 展开更多
关键词 PGD ldha 民猪 冷诱导 REAL-TIME PCR
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胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白联合表达的临床病理学意义 被引量:4
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作者 赖妙玲 郝卓芳 +3 位作者 黄世章 欧阳小明 郅程 申洪 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第14期2275-2280,共6页
目的探讨LDHA/p53联合表达在胶质瘤临床病理学中的意义。方法按照2016年WHO中枢神经系统肿瘤新分类,分析68例胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白的表达特点及其与临床病理特征的关系。结果 68例胶质瘤中,LDHA单独高表达多为高级别胶质瘤,占48.5%... 目的探讨LDHA/p53联合表达在胶质瘤临床病理学中的意义。方法按照2016年WHO中枢神经系统肿瘤新分类,分析68例胶质瘤LDHA和突变型p53蛋白的表达特点及其与临床病理特征的关系。结果 68例胶质瘤中,LDHA单独高表达多为高级别胶质瘤,占48.5%;突变型p53高表达则多为胶质母细胞瘤,占26.5%。LDHA/p53联合表达在胶质母细胞瘤中显著增高,占22.1%(P=0.005)。高级别胶质瘤中LDHA/p53联合表达增多,占27.9%(P=0.002)。结论 LDHA/p53联合表达有助于高级别胶质瘤的诊断,对胶质母细胞瘤的诊断也具有提示作用。 展开更多
关键词 胶质瘤 乳酸脱氢酶-A亚基(ldha) 突变型P53 异柠檬酸脱氢酶1(IDH1) 鉴别诊断
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克雷伯氏菌产1,3-丙二醇ldhA基因缺失菌株的构建 被引量:7
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作者 陈利飞 李猛 +1 位作者 马春玲 杨建楼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期121-126,共6页
克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)甘油歧化发酵生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,乳酸是氧化途径最主要的副产物,乳酸的产生和积累,不仅限制了菌体本身的生长,而且严重影响了1,3-丙二醇的转化率。利用λRed重组技术对Klebsiella pneumo... 克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)甘油歧化发酵生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,乳酸是氧化途径最主要的副产物,乳酸的产生和积累,不仅限制了菌体本身的生长,而且严重影响了1,3-丙二醇的转化率。利用λRed重组技术对Klebsiella pneumonia中的酶乳酸脱氢酶基因(ldhA)进行改造。在λRed重组系统作用下,将带有300 bp的线性同源片段ldhA1-Cm-ldh A2与基因组DNA的同源重组,经过抗性筛选和PCR鉴定最终获得了ldhA基因缺失菌株K.pneumonia2-1ΔldhA。经过24 h发酵可知,乳酸最大产出浓度由原来的10.16 g/L降为0.49 g/L,1,3-PD由原来的78.83 g/L增长为85.76 g/L,甘油转化率由60.64%增长到65.97%,提高了5.33%。 展开更多
关键词 克雷伯氏菌 ldha基因 λRed同源重组 1 3-丙二醇
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乳酸脱氢酶A(ldha)基因的克隆与原核表达 被引量:2
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作者 袁军 许香雅 沈榕强 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2012年第11期23-26,44,共5页
乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸;当动物体内缺乏葡萄糖时,还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因,并将它克隆到pET28a(+)载体上,获得重组表达载... 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸;当动物体内缺乏葡萄糖时,还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因,并将它克隆到pET28a(+)载体上,获得重组表达载体pET28a(+)-ldha。重组质粒通过转化法转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中。SDS-PAGE分析表明,在1.0 mmol·L-1异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组子成功表达了一条分子质量约为36 kDa的目标蛋白。 展开更多
关键词 HELA细胞 ldha基因 克隆 原核表达
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LDHA Ki67蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义 被引量:1
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作者 唐洪波 龚邵新 +2 位作者 刘利军 李明 许明 《基层医学论坛》 2020年第34期4887-4890,共4页
目的探讨乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白、Ki67蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义。方法选取鼻咽癌黏膜组织93例(病例组)和鼻咽部慢性炎症黏膜组织30例(对照组),采用免疫组织化学检测2组标本中的LDHA蛋白、Ki67蛋白表达水平,并分析LDHA蛋白、Ki6... 目的探讨乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白、Ki67蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义。方法选取鼻咽癌黏膜组织93例(病例组)和鼻咽部慢性炎症黏膜组织30例(对照组),采用免疫组织化学检测2组标本中的LDHA蛋白、Ki67蛋白表达水平,并分析LDHA蛋白、Ki67蛋白与鼻咽癌发生、发展的关系。结果病例组的LDHA蛋白与Ki67蛋白阳性表达率分别是77.42%与72.04%,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期和Ⅳ期鼻咽癌患者病灶组织中LDHA蛋白与Ki67蛋白阳性表达率分别是83.58%与79.10%,均高于Ⅰ期和Ⅱ期鼻咽癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);发生淋巴结转移的鼻咽癌患者病灶组织中的LDHA蛋白与Ki67蛋白阳性表达率分别是84.42%与77.92%,均高于未发生淋巴结转移的鼻咽癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。经Spearman相关分析,LDHA蛋白表达与Ki67蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论鼻咽癌组织中LDHA蛋白与Ki67蛋白与鼻咽癌肿瘤的发生、发展密切相关,并且在鼻咽癌的发生、发展以及淋巴结转移中起协同作用,对鼻咽癌的早期诊断及其预后判断可提供一定的参考。 展开更多
关键词 鼻咽癌 ldha蛋白 KI67蛋白 发生发展 淋巴结转移
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靶向乳酸脱氢酶A(LDHA)对T细胞急性淋巴细胞白血病具有抗白血病作用 被引量:6
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作者 于海智 尹亚飞 +11 位作者 易艺芳 程钊 旷文勇 李睿娟 钟海莹 崔亚娟 袁玲俐 龚凡杰 王志华 李姮 彭宏凌 张广森 《癌症》 SCIE CAS 2021年第1期24-40,共17页
背景与目的T细胞急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中少见且具侵袭性的一种亚型。在T-ALL患者的血清中,乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LD... 背景与目的T细胞急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中少见且具侵袭性的一种亚型。在T-ALL患者的血清中,乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的活性增高。我们推测靶向LDHA可以作为改善T-ALL患者预后的一个潜在治疗策略。本研究旨在研究LDHA靶向治疗对T-ALL的抗白血病作用及其潜在的分子机制。方法用LDH抑制剂草氨酸盐处理原代T-ALL细胞系Jurkat和DU528。采用MTT、克隆形成、凋亡及细胞周期检测分析草氨酸盐对T-ALL细胞的作用。采用定量实时PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting检测相关的信号通路。采用活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测分析草氨酸盐处理后的T-ALL细胞中的ROS产量。用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了LDHA基因敲减的T-ALL转基因斑马鱼模型,采用TUNEL、Western blotting及T-ALL肿瘤进展检测分析LDHA基因敲减对T-ALL转基因斑马鱼模型的影响。结果草氨酸盐显著抑制了Jurkat和DU528的细胞增殖,诱导了细胞凋亡,同时也引起了Jurkat和DU528细胞周期G0/G1期阻滞,刺激了ROS的生成(P<0.001)。阻断LDHA显著减低了c-Myc基因及蛋白的表达,也降低了磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3′-kinase,PI3K)信号通路上的磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phos-phorylated serine/threonine kinase,AKT)和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β)的表达。在T-ALL转基因斑马鱼中,LDHA基因敲减减缓了疾病进展,下调了c-Myc的mRNA和蛋白表达。结论靶向LDHA对T-ALL表现出抗白血病的作用,可作为一种对T-ALL的潜在的治疗策略。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9基因编辑 ldha 草氨酸盐 T细胞淋巴细胞白血病 转基因斑马鱼模型
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LDHA对乳腺癌演变的影响及SUMO化修饰 被引量:3
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作者 赵雪可 李威 +4 位作者 刘文 黄泽翎 曹鸽 梁伟华 曹玉文 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期427-431,共5页
目的探讨LDHA在乳腺癌中的表达、临床意义及与SUMO1修饰的关系。方法采用免疫组化和Western blot法检测乳腺癌组织中LDHA蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用数据库预测LDHA表达与患者预后的关系。Co-IP鉴定LDHA分子SUMO化水平... 目的探讨LDHA在乳腺癌中的表达、临床意义及与SUMO1修饰的关系。方法采用免疫组化和Western blot法检测乳腺癌组织中LDHA蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用数据库预测LDHA表达与患者预后的关系。Co-IP鉴定LDHA分子SUMO化水平,软件筛选SUMO化位点。结果LDHA在癌旁正常乳腺组织、普通型导管增生、导管不典型增生、导管原位癌和浸润性导管癌组织中的阳性率分别为26.0%、26.8%、31.4%、54.2%、64.3%。LDHA表达与乳腺癌组织学高分级、淋巴结转移、TNM III+IV期、ER阴性相关(P均<0.05),与患者总生存期、无瘤生存期呈负相关(P=0.009,P=0.008)。LDHA与SUMO1相互作用,致使乳腺癌中的SUMO化修饰水平降低。LDHA的SUMO化位点可信度最高的是K284、K59及K14。结论LDHA高表达提示乳腺癌变、恶性进展及预后不良,同时LDHA蛋白发生SUMO化修饰。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 ldha SUMO 免疫组织化学
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人源LDHA基因启动子质粒的构建及在肺癌细胞中Nrf2对其转录表达调控和功能分析 被引量:2
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作者 曹玉祥 周兴路 +3 位作者 李祥瑞 黄滔 柯丽霞 吴志浩 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第1期36-41,共6页
为探索核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)调节肿瘤代谢进而影响肿瘤细胞迁移的分子机制,着重研究了Nrf2对乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达的调控。首先成功构建了人源LDHA基因启动... 为探索核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)调节肿瘤代谢进而影响肿瘤细胞迁移的分子机制,着重研究了Nrf2对乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达的调控。首先成功构建了人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc。将质粒LDHA-luc与Nrf2表达载体共同转染A549细胞,转染后经双荧光素酶报告基因系统检测,显示共转Nrf2质粒时LDHA-luc活性明显要比对照组高;同时,转染Nrf2质粒时LDHA的蛋白质表达水平明显高于对照组,表明在A549细胞中Nrf2促进LDHA的转录和表达。而LDHA的上调会促进酸性肿瘤微环境的形成,促进细胞迁移。因此,成功构建的人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc及探索出的Nrf2对LDHA基因表达的调控,为进一步研究Nrf2通过LDHA影响细胞代谢进而促进细胞迁移奠定了基础。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶A(ldha) 核因子E2相关因子2(Nrf2) 萤火虫荧光素酶报告基因质粒 转录表达分析 细胞迁移
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人LDHA原核表达、纯化及体外抑制剂筛选模型的建立 被引量:5
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作者 金科华 吴昕瑞 +1 位作者 王苗苗 宋思扬 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期36-40,共5页
在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65... 在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65mg/L.基于LDHA的催化反应建立了以丙酮酸钠和还原型烟酰胺腺嘌呤二核甘酸(NADH)为底物的筛选模型.实验结果表明:模型的LDHA最适质量浓度为60ng/mL,以质量分数0.25%草酸铵为阳性对照,筛选模型的Z因子为0.812.至此,本研究建立了LDHA抑制剂体外生化筛选模型,其成本低、可操作性强,符合高通量筛选要求,为发现新颖的LDHA抑制剂奠定了基础. 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶A 表达 抑制剂 筛选模型
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敲低膀胱癌细胞热休克蛋白60(HSP60)通过上调乳酸脱氢酶A(LDHA)表达抑制人NKL细胞杀伤 被引量:1
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作者 杨帆 刘静 +3 位作者 姚田军 吴丹 周幸春 张波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1098-1105,共8页
目的探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平... 目的探索热休克蛋白60(HSP60)蛋白表达变化影响膀胱癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞免疫监视的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测HSP60在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达,统计学分析HSP60在膀胱癌及癌旁组织的表达差异及HSP60表达水平与膀胱癌患者预后的相关性。利用腺病毒载体构建HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系并与NKL细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。Western blot法检测膀胱癌细胞乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,试剂盒检测乳酸分泌。在HSP60稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞系,利用小干涉RNA(siRNA)敲低或利用质粒过表达膀胱癌细胞中的LDHA,检测对NKL细胞杀伤能力的影响。利用线粒体活性氧探针MitoSOX检测线粒体活性氧(ROS)水平,Western blot法检测膀胱癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达,利用靶向线粒体抗氧化剂MitoEMPO及siRNA降低HSP60稳定干涉膀胱癌细胞中线粒体ROS及HIF-1α水平,探索HSP60表达降低促进LDHA表达的具体机制。结果膀胱癌组织HSP60蛋白的表达水平较癌旁组织显著降低,且HSP60表达越低的膀胱癌患者其预后越差;敲低HSP60蛋白表达可显著上调膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌,反之,过表达HSP60可显著抑制膀胱癌细胞LDHA的表达及乳酸的分泌;siRNA LDHA可显著增强HSP60敲低导致NKL细胞的杀伤抑制,同时过表达LDHA可显著抑制HSP60过表达导致NKL杀伤增强。此外,敲低膀胱癌细胞HSP60表达可通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达。结论敲低膀胱癌细胞HSP60表达通过激活ROS/HIF-1α通路促进LDHA的表达,抑制NK细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 膀胱癌细胞 热休克蛋白60(HSP60) 乳酸脱氢酶A(ldha) 乳酸 自然杀伤(NK)细胞
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以LDHA为靶点的抗癌药物虚拟筛选
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作者 段超杰 王浩臻 高兵 《智慧健康》 2021年第8期24-27,共4页
目的从天然产物中高效快速地筛选出一批有效针对乳酸脱氢酶A (Lactate dehydrogenase A,LDHA)的候选化合物,为研发抗癌药物提供有效线索。方法运用计算机辅助药物设计技术(computer-aided drug design,CADD),以LDHA中的1,4-二氢烟酰胺... 目的从天然产物中高效快速地筛选出一批有效针对乳酸脱氢酶A (Lactate dehydrogenase A,LDHA)的候选化合物,为研发抗癌药物提供有效线索。方法运用计算机辅助药物设计技术(computer-aided drug design,CADD),以LDHA中的1,4-二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(1,4-dihydronicotinamide adenine dinucleotide,NADH)结合区为靶点,在Drug Bank数据库7877个天然化合物中进行虚拟筛选。中靶化合物通过文献搜索和数据库查询明确其结构,特点以及用途。结果利用Auto Dock Vina虚拟筛选工具对数据库中的化合物进行了筛选,共筛选得到5个候选化合物。结论以LDHA为靶点,对Drug Bank数据库中的化合物进行虚拟筛选,发现5个新的LDHA抑制剂,中靶的化合物可作为候选化合物用于抗癌药物的研发。 展开更多
关键词 ldha 天然产物 药物筛选
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黄胸鼠Ldha基因的克隆、原核表达及酶学性质研究
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作者 倪玉芳 张树军 +3 位作者 方天星 万军 陈洁 曾凡才 《四川动物》 北大核心 2021年第6期601-610,共10页
Ldha基因表达可生成参与糖代谢的乳酸脱氢酶(LDH),通过克隆黄胸鼠Rattus tanezumi的Ldha基因并进行原核表达后可以研究其酶学性质。以黄胸鼠骨骼肌cDNA为模板,通过RT-PCR技术获得黄胸鼠Ldha基因编码序列,进行生物信息学分析后构建pET28... Ldha基因表达可生成参与糖代谢的乳酸脱氢酶(LDH),通过克隆黄胸鼠Rattus tanezumi的Ldha基因并进行原核表达后可以研究其酶学性质。以黄胸鼠骨骼肌cDNA为模板,通过RT-PCR技术获得黄胸鼠Ldha基因编码序列,进行生物信息学分析后构建pET28α-Ldha重组表达质粒,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达,采用SDS-PAGE和Western Blot对表达蛋白进行鉴定,最后检测表达蛋白的酶学性质。结果显示,黄胸鼠Ldha基因编码区序列被成功克隆,纯化后的原核表达蛋白分子量约为37 kD,Western Blot证实后,分别以丙酮酸和乳酸为底物测得酶的平均比活性为113.760 U·mg^(-1)±1.463 U·mg^(-1)和2.180 U·mg^(-1)±0.125 U·mg^(-1),琼脂糖凝胶电泳同工酶谱分析显示该蛋白具有LDH活性且仅形成1条同工酶带。在pH7.0,25℃条件下,LDHA蛋白对丙酮酸、NADH、乳酸、NAD+4种底物的平均Km值分别为0.170 mmol·L^(-1)±0.193 mmol·L^(-1)、0.088 mmol·L^(-1)±0.008 mmol·L^(-1)、22.540 mmol·L^(-1)±0.007 mmol·L^(-1)、0.413 mmol·L^(-1)±0.069 mmol·L^(-1)。黄胸鼠Ldha基因编码序列被首次克隆并表达出具有活性的酶蛋白,分析了其酶学性质,可为后续研究啮齿类动物LDH的结构和功能提供基础资料。 展开更多
关键词 黄胸鼠 ldha基因 原核表达 蛋白纯化 酶学性质
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乳酸通过GPR81介导的Nrf2/LDHA通路促进非小细胞肺癌H1299细胞的迁移
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作者 曹玉祥 张志坚 +2 位作者 周辰康 魏慧君 吴志浩 《沈阳医学院学报》 2021年第4期326-331,共6页
目的:探讨乳酸诱导GPR81、Nrf2、LDHA等相关蛋白表达对非小细胞肺癌H1299细胞迁移的影响。方法:体外培养H1299,加入乳酸、siGPR81、PI3K-AKT通路抑制剂LY294002和Nrf2 siRNA处理,采用Western blot检测乳酸对GPR81、Nrf2和LDHA的调控作用... 目的:探讨乳酸诱导GPR81、Nrf2、LDHA等相关蛋白表达对非小细胞肺癌H1299细胞迁移的影响。方法:体外培养H1299,加入乳酸、siGPR81、PI3K-AKT通路抑制剂LY294002和Nrf2 siRNA处理,采用Western blot检测乳酸对GPR81、Nrf2和LDHA的调控作用;构建不同片段LDHA启动子质粒,通过双荧光素酶报告基因实验检测Nrf2对LDHA转录水平的影响;采用Transwell实验检测乳酸对H1299细胞迁移的影响,细胞划痕实验检测LDHA对H1299细胞迁移的影响。结果:乳酸诱导GPR81、Nrf2和LDHA蛋白表达并促进迁移;GPR81通过PI3K-AKT通路正调控Nrf2;Nrf2在转录和翻译水平正调控LDHA的表达;沉默LDHA的表达可以抑制H1299细胞的迁移。结论:乳酸可以通过GPR81介导的Nrf2/LDHA通路促进非小细胞肺癌H1299细胞的迁移。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 乳酸 GPR81 NRF2 ldha 细胞迁移
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LDHA?Ki67蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义分析
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作者 阿不都许库尔·吾买尔 米贺丽·米吉提 迪丽努尔·加列 《中文科技期刊数据库(引文版)医药卫生》 2021年第8期406-406,409,共2页
针对当前乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)蛋白以及细胞核相关抗原蛋白(nuclear-associated antigen,Ki-67)在患者中阳性表达的情况开展研究。方法:2019年12月到2020年12月结合纳入标准以及排除标准后,随机选择100例鼻咽癌患... 针对当前乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)蛋白以及细胞核相关抗原蛋白(nuclear-associated antigen,Ki-67)在患者中阳性表达的情况开展研究。方法:2019年12月到2020年12月结合纳入标准以及排除标准后,随机选择100例鼻咽癌患者,同时将其蛋白表达结果设置为研究组,同时随机选择同期100例鼻咽慢性炎症疾病的蛋白表达结果为参照组。结果:研究组LDHA蛋白与Ki67蛋白表达率依次为77.00%,73.00%;参照组LDHA蛋白与Ki67蛋白表达率依次为32.00%(P<0.05),11.00%(P<0.05)。研究组中早期患者LDHA蛋白与Ki67蛋白表达率依次60.34%,51.72%;研究组中晚期患者LDHA蛋白与Ki67蛋白表达率依次83.33%(P<0.05),80.95%(P<0.05)。结论:LDHA蛋白以及Ki67蛋白阳性表达情况为晚期癌症患者高于早期患者,高于非癌症患者,且两组蛋白阳性表达之间存在正相关关系,对鼻咽癌的早期诊断及其预后判断可提供一定的参考。 展开更多
关键词 发生发展 KI67蛋白 ldha 蛋白 鼻咽癌
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