特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product503)调控的Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclov-ir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用。方法用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达。将Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,用流式细胞仪及RT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异。结果 Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低于Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。转染Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg·L-1GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化;GCV作用24h后Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强。结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/GCV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子。

晶状体上皮细胞特异性表达基因LEP503检测及分析

目的研究晶状体上皮细胞特异表达基因LEP503在不同年龄白内障患者以及正常人晶状体中的表达情况,并探讨白内障发生机制。方法收集白内障患者晶状体前囊膜20例(白内障低龄组和高龄组)、无白内障发生的晶状体前囊膜20例(对照低龄组和高龄组)。通过RTPCR和WesternBlotting技术检测各组LEP503基因和蛋白表达情况,凝胶成像分析系统比较各组之间LEP503表达的差异。利用SPSS12.0软件包进行t检验和线性回归统计学分析。结果RTPCR和凝胶成像分析结果显示:白内障组LEP503基因表达明显比正常对照组高(P<0.01);其中白内障高龄组LEP503基因表达明显比低龄组高(P<0.01);WesternBlotting结果显示:白内障患者LEP503蛋白表达量明显比正常人高,且年龄越大,LEP503蛋白表达越强。结论(1)LEP503基因在白内障患者中有表达且比正常人高;(2)白内障患者LEP503基因的表达量与患者年龄之间呈线性关系;(3)LEP503基因与晶状体上皮细胞增生没有直接关系;(4)LEP503基因可能参与了老年人白内障和青年人白内障不同发病机制过程。

不同年龄白内障患者晶状体特异性表达基因检测及分析

目的研究晶状体上皮细胞特异表达的基因LEP503在不同年龄白内障患者以及正常人晶状体中表达情况,探讨白内障的发生机制。方法收集白内障患者晶状体前囊膜50例(白内障低龄组和高龄组)、无白内障发生的晶状体前囊膜50例(正常对照低龄组和高龄组)。通过RT-PCR和Western-Blotting技术检测各组LEP503基因和蛋白表达情况,凝胶成像分析系统比较各组之间LEP503表达的差异。利用SPSS13.0软件包,t检验和线性回归进行统计学分析。结果RT-PCR和凝胶成像分析结果显示:白内障组LEP503基因表达明显比正常对照组高(P<0.01);其中白内障高龄组LEP503基因表达明显比低龄组高(P<0.01);Western-Blotting结果显示:白内障患者LEP503蛋白表达量明显比正常人高,且年龄越大LEP503蛋白表达越强。结论①LEP503基因在白内障患者中有表达且比正常人高;②白内障患者LEP503基因的表达量与患者年龄之间呈线性关系;③LEP503基因与晶状体上皮细胞增殖没有直接关系;④LEP503基因可能参与了老年人白内障和青年人白内障不同发病机制过程。

美国《化学文摘》收录2005年《眼科新进展》论文目录(二)

16 王昕华，才娜，张开立，李宏．晶状体上皮细胞特异性表达基因LEP503检测及分析[J]．眼科新进展，2005，25（4）：312—314． 17 周炼红，邢怡桥，张云成．角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系[J]．眼科新进展，2005，25（4）：315-317．