豚鼠发情周期不同时期的子宫LHR mRNA差异表达研究

【目的】克隆豚鼠子宫黄体生成素受体(LHR)基因片段并分析其进化关系,研究豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期不同时期的表达特性。【方法】以豚鼠子宫总RNA为模板,根据小鼠、大鼠、猪LHR保守区设计引物,RT-PCR扩增LHR基因片段。筛选阳性克隆测序,采用DNAMAN软件分析比对同源性。以β-actin为分子内参,采用优化的半定量RT-PCR技术,测定豚鼠发情周期不同时期的子宫组织LHR mRNA表达量。【结果】测序得到686 bp的剪接变异体1和缺失75 bp 4号外显子的剪接变异体2。686 bp序列与人类LHR mRNA序列同源性为83.8%,与牛、猪及绵羊LHR mRNA序列同源性分别为84.6%、84.2%及83.6%,而与大鼠和小鼠LHR mRNA序列同源性则分别高达93.7%和99.4%。LHR mRNA在豚鼠整个发情周期的子宫中都有表达,发情周期第0天的表达水平为0.635±0.0194,第4天为0.617±0.099,均显著低于第8天的表达水平(P<0.05),随之在第12天升至1.218±0.049。【结论】克隆的片段为豚鼠LHR基因的部分序列,其mRNA存在着剪接变异体。豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期第0、4天表达水平较低,第12天升至最高,即发情周期不同时期的LHR mRNA表达呈现明显的规律性,该结果为探究哺乳动物非性腺组织中LHR的功能及生殖内分泌调控机制提供了理论依据。

能量对初情期前母猪卵巢LHR和FSHR mRNA表达的影响(英文)

对9头50日龄、体质量为30 kg的初情期前杜×长×大三元杂交母猪进行长期日粮能量差异饲养试验。饲养结束后屠宰,取卵巢液氮保存。半定量RT-PCR检测每头母猪卵巢LH和FSH受体mRNA的含量。结果,高能组卵巢LH和FSH受体mRNA的含量显著高于中能组和低能组(P<0.05);而低能组显著低于中能组和高能组(P<0.05)。表明,能量水平高的日粮可以显著地促进初情期前卵巢上LH和FSH受体在mRNA水平的表达,而能量水平不足的日粮则不利于这种表达。本文首次报道了日粮能量水平对母猪卵巢LH和FSH受体mRNA表达的影响。

LHR基因在济宁青山羊发情周期不同阶段子宫中表达差异的研究

从济宁青山羊子宫组织中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增黄体生成素受体(LHR)基因,获得一条286bp的片段,以pGEM-TEasy vector为载体,转染大肠杆菌E.coliDH5α,筛选阳性克隆并测序。采用优化的半定量RT-PCR技术,以山羊GAPDH为分子内参,比较研究了发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫组织中LHR基因的表达差异。结果表明:得到的片段为山羊LHR基因的部分序列,与GenBank中登录的山羊LHR基因(AF379199)41-326 bp序列同源性高达100%。LHRmRNA在整个发情周期的子宫中都有表达。其中,发情期的表达水平最低(0.454±0.06),且与其它时期比较均差异显著(P<0.05),随之在间情期升至最高值(0.705±0.09),尔后在发情前期降至(0.553±0.07)。这一研究结果为山羊的生殖内分泌调控机制研究提供了分子水平的数据。

山羊子宫中LHR基因片段的克隆及半定量RT-PCR检测方法的建立

【目的】进一步研究处于发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫中黄体生成素受体（LHR）mRNA表达量的变化，为探讨其对山羊生殖内分泌机制的作用规律提供理论依据。【方法】以GAPDH为内参照基因，从济宁青山羊的子宫组织中提取总RNA，用RT—PCR方法扩增目的基因，进行克隆测序，并对半定量RT—PCR反应体系进行了优化。【结果】获得了济宁青山羊LHR mRNA的部分序列，长度约为286bp，与已报道的GenBank中羊的I。HRmRNA（序列号为AF379199）41～326bp序列同源性为100％。以此基因片段的阳性克隆为基础优化的半定量RT—PCR体系为：LHR基因的适宜循环数为30个，内参照GAPDH基因的循环数为26个，Mg^2＋浓度均为1．5mmol／L。【结论】克隆了山羊LHRmRNA的部分序列，并建立了优化的半定量RT—PCR体系。

成年公猪睾丸及附睾中促黄体素受体mRNA表达的研究

试验采用FQ—PCR技术进行了成年公猪睾丸及附睾中促黄体素受体mRNA表达的研究，结果表明：促黄体素受体mRNA不仅在睾丸内表达，在附睾中也有表达；睾丸、附睾中促黄体素受体mRNA的表达量分别为（1．42±0．08）×10^9 copies／mL和（6．54±0.21）×10^9 copies／mL，睾丸两组织间促黄体素受体mRNA表达量无明显差异（P〉0．05）。

大鼠睾丸间质祖细胞移植的实验研究

目的探讨去势大鼠模型进行睾丸间质祖细胞(progenitor leydig cell,PLC)移植的可行性。方法制作去势大鼠模型,将经过体外培养、鉴定的PLC移植入肾包膜内,采用RT-PCR及磁分离均相酶联免疫(磁酶免)睾酮定量测定法等技术方法观察其移植后生长分化情况。结果移植后受体血清睾酮浓度明显高于同期去势对照组(P<0.01)。移植12周后实验组精囊的长度和相对重量明显高于对照组(P<0.01)。RT-PCR定量检测促黄体生成素受体(LHR)mRNA,对照组阴性表达,实验组第4周LHRmRNA表达较第8周及第12周低(P<0.01),第8周组与第12周组LHR表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植的PLC在去势大鼠的肾包膜内可以存活,且逐渐生长分化成熟,可在一定程度弥补生殖功能不足。

黄颡鱼促黄体激素受体基因克隆及在雌鱼繁殖周期中的表达

通过简并引物扩增及SmartTM Race技术,首次克隆了黄颡鱼促黄体激素受体(LHR)基因cDNA全长序列。该基因全长2 524 bp,编码701aa,含有属于糖蛋白激素受体(GpHR)家族的典型跨膜螺旋结构区域(TM helix)。9个富含亮氨酸的重复性序列(LRRs);4个潜在的N-端糖基化位点:29NFTC,82NVSR,203NGSR,548NLTV;24个Ser,6个Thr和5个Tyr磷酸化位点。同时400S为潜在的PKC位点。通过RT-PCR分析组织表达,卵巢繁殖周期中卵巢和脑的表达水平并结合血浆中E2含量的变化,发现LHR在卵巢中大量表达,其次是脑、肾脏、心脏、肝脏和肠存在少量或微量的表达;在卵巢繁殖周期中,卵巢LHR表达从Ⅲ期-Ⅴ期处于较高水平,Ⅴ期达到最高峰,随后下降到最低值;而脑的表达高峰出现在Ⅳ期,与血浆中E2变化相一致。推测卵巢和脑中LHR基因参与卵黄的生成,调控卵母细胞的成熟和排卵。

高原甘加型藏羊发情周期不同阶段卵巢FSHR和LHR基因表达差异的研究

为研究高原甘加型藏羊发情周期卵巢组织中促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)基因在mRNA水平上的表达规律,选取发情周期不同阶段的甘加型藏羊24只,从其卵巢组织中提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,以GAPDH为内参基因,比较研究了高原甘加型藏羊发情周期卵巢组织中FSHR和LHR基因在mRNA水平的表达差异。结果显示,FSHR mRNA和LHR mRNA在整个发情周期的卵巢组织中都有表达。发情前期、发情期、发情后期、间情期的FSHR mRNA表达量分别为46.0±0.21、51.7±0.33、17.7±0.56、1.0±0.82,其中发情期表达量最高,极显著高于间情期(P<0.01);LHR mRNA表达量分别为19.8±2.63、30.1±1.81、85.3±0.63、1.0±1.37,其中发情后期表达量最高,极显著高于间情期(P<0.01)。甘加型藏羊FSHR和LHR发情周期在mRNA水平上表达量不相同,呈现一种动态变化趋势。这一研究结果为藏羊的生殖内分泌调控机制研究提供了分子水平的试验数据和进一步研究依据。