LHRH及4F_3B_(10)对体外培养HeLa细胞作用的研究

为了研究促黄体素释放激素(LHRH)及4F3B10对宫颈癌He La细胞的作用,试验以Westernblot方法检测了细胞上LHRH受体的表达情况,并利用CCK-8试剂盒检测了LHRH及4F3B10对HeLa细胞的影响。结果表明:LHRH作用He La细胞48 h后,细胞透明并有着较强折光性;在一定浓度范围内,LHRH浓度与细胞增长呈正相关关系;而4F3B10作用He La细胞48 h后,细胞色暗,折光性较差,一定浓度4F3B10与细胞增长呈负相关关系。说明在一定浓度范围内LHRH促进He La细胞生长,而4F3B10抑制He La细胞生长并具有诱导细胞凋亡作用。

LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的：探讨一种新型免疫毒素LHRH-PE40与人结肠癌细胞系Lovo表面LHRH受体结合的特性，观察其对细胞增殖产生的抑制作用及检测细胞凋亡。方法：用^125Ⅰ标记法检测LHRH-PE40与Lovo结合的特异性；MTT比色法检测LHRH-PE40对胃癌细胞的杀伤活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：人结肠癌细胞系Lovo细胞表面可见配基一受体特异性结合，LHRH-PE40对Lovo细胞的半数致死量为0．24mg·L^-1，0．1～10．0mg·L^-1 LHRH-PE40作用于Lovo细胞，其凋亡明显（P〈0．01）。结论：结肠癌细胞Lovo细胞表面存在LHRH受体，LHRH-PE40对结肠癌细胞的增殖状态有明显的抑制作用及促凋亡作用。

LHRH-PE40与正常肝组织和肝癌细胞表面LHRH受体结合特性的比较研究

目的 探讨重组促性腺激素释放激素 绿脓杆菌外毒素 4 0 (LHRH PE4 0 )与正常肝脏组织和肝癌细胞表面受体结合特性的差异。方法 用放射性配基结合分析的方法测定亲和力和受体容量。结果 LHRH PE4 0与肝癌细胞HEPG细胞的亲和力Kd为 (0 .4 3± 0 .12 )nmol·L-1,受体容量Bmax为 (0 .37± 0 .15 )nmol·mg-1,与正常肝脏组织未见结合。结论 重组毒素LHRH PE4 0和肝癌细胞HEPG的表面受体有较强的结合 ,而和正常肝脏组织无特异性结合。

LHRH及其受体对前列腺癌的作用研究进展

近 5 0年来 ,激素治疗作为治疗前列腺癌的一种方法 ,在大多数病例中取得了显著疗效。对于LHRH类药物的研究取得了诸多进展 ,对LHRH及其受体自身的分布与功能也有多方面的发现 ,本文将国外近年来对LHRH及其受体的基础研究与前列腺癌的病理联系、临床上的药物匹配、与外科治疗及放疗的相互作用。

半胱胺盐酸盐和LHRH-A对黄鳍鲷IGF-Ⅰ基因表达和生长的影响

本文以黄鳍鲷 (Sparuslatus)为研究对象 ,利用GeneRaceTM 技术 ,从其肝组织中克隆出类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )cDNA ,并应用半定量RT PCR方法研究了半胱胺盐酸盐 (Cysteaminehydrochloride)和LHRH A对其肝组织IGF Ⅰ基因表达的影响。黄鳍鲷IGF ⅠcDNA全长为 84 0bp ,编码 185aa多肽 ;序列分析表明 ,黄鳍鲷IGF Ⅰ基因编码的氨基酸序列与金鱼的同源性为 75 8% ,与牙鲆的同源性为 86 5 % ,与同属鲷科的黑鲷同源性高达 10 0 % ,证明鱼类类胰岛素生长因子是非常保守的 ,E区域分析结果表明黄鳍鲷IGF Ⅰ属Ea 4型。在饲料中投喂CSH、LHRH A等添加剂 ,实验组黄鳍鲷鱼种的相对生长率、垂体GH含量、肝脏IGF ⅠmRNA水平均显著高于对照组。以上结果提示 :CSH、LHRH A能促进黄鳍鲷生长激素的合成和IGF Ⅰ基因的表达 。

LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组(高、低剂量组和对照组),各25尾。高剂量组埋植促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)缓释剂,剂量为300μg/kg体重,低剂量组为100μg/kg体重,对照组埋植不含LHRHA的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素(E2、T);解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10—30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1.055%,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末(核偏位);低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1.858%,低剂量组为0.987%;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRHA缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRHA缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素(E2、T)只与卵黄生成有关,与排卵无关。

长效LHRH拮抗剂的设计、合成和生物活性

根据抗蛋白酶降解的长效肽设计思想,合成了一系列新型结构的LHRH拮抗剂类似物.体内生物活性评价结果表明,所设计的多肽具有比母体肽和阳性对照更长的体内抑制睾酮作用时间和较低的最低有效剂量,证实了该设计思想的可行性,并为开发长效LHRH拮抗剂药物提供了新的候选化合物.

LHRH-PE40注射剂对体外培养人肿瘤细胞系的细胞毒作用

目的 观紊ＬＨＲＨ－ＰＥ４０注射剂对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒作用。方法 用ＭＴＴ检恻 ＬＨＲＨ－ＰＥ４０对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒作用，找出敏感肿瘤细胞系。结果ＬＨＲＨ－ＰＥ４０对体外培养的多 种人肿庙细胞具有细胞毒作用，细胞对药物的敏感程度依次为：ｓｍｍｕｕ７７２１（人肝癌）＜ＨＥＰＧ２（人肝癌）＜ＨＣＴ－８(人结肠癌）＜ＭＣＦ－７（人乳腺癌）＜Ａ５４９（人肺腺癌）＜ＭＧＣ－８０３（人胃癌）。结论 为动物体内的药效学研究和临 床用药提供依据。

野生石鲽精巢发育及注射LHRH-A对血浆T水平的影响研究

采用常规石蜡切片,组织染色法和放射免疫测定方法(RIA)对石鲽(Kareius bicoloratus)精巢的发育状况和生殖季节血浆睾酮(T)对注射外源促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A)的反应进行研究。结果表明,石鲽精巢为小叶型,精巢发育分为6个时期。性腺成熟系数(GSI),肝重指数(HSI)和肥满度(CF)呈现显著的季节变化。注射LHRH-A后6 h,T含量显著上升,之后的12 h、24 h逐渐下降,48 h又显著回升,几乎达到注射前的8倍;对照组血浆T含量在注射后6 h显著下降,12 h变化不大;24 h又显著回升,48 h继续回升。

LHRH-PE40与宫颈癌组织结合特性的研究

目的观察LHRH-PE40对各种病理型宫颈癌组织的结合能力,为其临床应用提供理论依据。方法采用免疫荧光法检测LHRH-PE40与正常宫颈组织及宫颈癌组织的结合能力。结果宫颈结缔组织、鳞状上皮的荧光结合率为0%。宫颈癌组织荧光结合率为74%,弱阳性及阴性表达病例中,高分化鳞状细胞癌占67%,中低分化鳞状细胞癌占15%,两者差异有显著意义(P<0.05)。中强阳性表达病例中,高分化鳞状细胞癌仅占37%,中低分化鳞状细胞癌占86%,两者差异有显著意义(P<0.05)。5例强阳性表达病例均为高分化腺癌。结论高分化鳞状细胞癌与LHRH-PE40结合能力最弱,子宫颈腺癌与LHRH-PE40结合能力最强。

LHRH类似物对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察LHRH类似物的体内抗肝癌细胞增生活性,为LHRH类似物用于肝癌的内分泌治疗提供实验依据。方法:实验选用5-7周龄♂BALB/c裸鼠20只,分治疗组(丙氨瑞林瘤内注射组)和对照组(生理盐水瘤内注射组),用人肝癌hHCC细胞系建立肝癌荷瘤裸鼠模型,观察LHRH类似物丙氨瑞林(LHRH-A)对裸鼠移植瘤生长的影响;并分别用H-E染色和免疫细胞化学技术检测瘤组织的病理组织学改变和GnRH受体及凋亡蛋白Bax表达的变化。结果:LHRH-A瘤内注射(剂量为75μg/d)可显著抑制肝癌移植瘤的生长。治疗3 wk后治疗组裸鼠肿瘤体积(1885.9±738.3mm^3)明显小于对照组裸鼠的肿瘤体积(4223.4±1027.6mm^3),两组间有统计学差异(P<0.005);LHRH-A治疗3wk后的抑瘤率可达58％;治疗组裸鼠存活期(87.8±5.3d)较对照组(64.6±6.8d)显著延长(P<0.05);治疗3wk后病理组织学发现治疗组瘤组织中癌细胞核分裂象减少,腺样癌组织、凋亡细胞数增多;治疗组瘤组织中表达GnRH受体的癌细胞数增加(72.5％ vs 56.4％,P<0.05),Bax阳性细胞比率增加(53.8％ vs 41.5％,P<0.05)。结论:LHRH-A具有显著抑制肝癌裸鼠移植瘤细胞增生的活性,LHRH受体和凋亡蛋白Bax可能参与了LHRH-A对肝癌细胞增生的抑制作用。

LHRH刺激雄性大鼠垂体LH分泌高峰时细胞形态变化的图象分析

应用ABC亲和组织化学顺序、MIS－I计算机图象处理系统测定外源性LHRH刺激雄性大鼠LH分泌高峰前后LH细胞面积、细胞内液泡面积和细胞形状等形态参数的变化。结果表明：雄性大鼠LH基础分泌时，LH细胞处于贮存状态：大细胞（＞340μm2）占LH阳性细胞56．7％，小细胞（＜190μm2）占2．2％，40％细胞内含有大量液泡，细胞形状大多偏向圆形。注射LHRH30min后，血中LH浓度显著升高，LH细胞平均面积明显减小；60min时，血中LH释放达到高峰，相应的形态学特征是大细胞降低至4％，小细胞增加到66％。随着细胞内液泡的大量消失，52．6％的细胞偏向不规则形状。LH分泌高峰后，血液LH浓度逐渐恢复到基础分泌水平，但随着细胞内LH贮存的增加，细胞和细胞内液泡平均面积逐渐增加，大多数细胞又偏向圆形。结果提示，合大量液泡的偏圆形大细胞同LH大量贮存有关。而液泡的消失以及大量小细胞和不规则形状细胞的出现同LH大量释放有密切联系。由此作者认为：LH细胞内液泡的动态变化以及由此产生的细胞大小、细胞形状和细胞结构的变化可以作为促性腺激素分泌的重要形态学观察指标。

LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用

目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用。方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性。将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用。结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2·103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68·49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制。结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用。

LHRH神经元在奶山羊下丘脑和隔区的分布-ABC法研究

本文应用免疫组化ABC法来研究三头成年雌性奶山羊的LHRH核周的及其神经纤维在下丘脑及隔区的分布。结果表明:LHRH核周体形态不规则,有突起,胞体和胞突内充满棕黑色的免疫反应颗粒。核周体主要分布在;(1)嗅脑隔区内由隔三角核、隔内侧核、视前正中核、视前内侧核、视前外侧核、斜角带核、前联合核构成的一条背腹走向的疏松细胞带。(2)由视前交叉上核、视前室周核、视上核、腹内侧核、腹外侧核、弓状核构成的一条斜向于正中隆起的细胞带。每头羊在以上两个细胞带内可查到112～173个LHRH核周体。 LHRH神经纤维呈明显的串珠状,长短与粗细均不一致,除了在上述各核团内有不同程度的分布外,还在正中隆起、血管终板器、灰结节、第三脑室室周均有较多的分布。此外在血管和脑室附近还可见到神经纤维终枝的分布。

LHRH离子电渗透皮给药系统的研究 Ⅰ.LHRH的离子电渗透皮吸收

研究了影响LHRH体外离子电渗透过裸鼠皮肤的因素。发现2500Hz(占空比3∶1)的方波电流体外透皮效果最好,且透皮速率随着电流密度的增加而增加。LHRH在皮肤中会滞留,外加电场撤去后,LHRH仍持续透过。采用交变电渗技术可以达到脉冲电渗效果,因而可模拟LHRH体内分泌的模式。

投喂LHRH-A粗品对雌性金鲫促性腺激素分泌和卵巢发育的作用

研究投喂不同剂量LHRH-A粗品对雌性金鲫GtH分泌和卵巢发育的作用。以LHRH-A粗品0.01 mg/g饲料和0.1 mg/g饲料的剂量投喂6周后,与对照组相比,金鲫血清的GtH水平显著升高;部分卵母细胞已发育至Ⅳ+++时相,GSI明显增长。这些结果表明将LHRH-A粗制品拌入饲料长期投喂金鲫后,能使血清GtH水平明显提高,进而促进性腺的发育成熟。

LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合特性的检测

目的检测LHRH-PE40融合蛋白是否保留了LHRH与癌细胞表面其相应受体特异性结合的性质。方法在Hela细胞培养液中,分别加入LHRH和LHRHPE40,经结晶紫染色法检测A值。另取宫颈癌组织切片,分别加LHRH-PE40和LHRH后,再加兔抗PE40血清和羊抗兔IgG异硫氰酸荧光素,在荧光显微镜下观察荧光强度。结果随着LHRH与LHRHPE40的摩尔数之比由100/1、250/1增加到500/1,细胞毒性的效果逐渐减弱。当LHRH/LHRH-PE40达到500/1时,肿瘤细胞表面的LHRH受体饱和;LHRH/LHRHPE40达750/1时,其A值与500/1时的A值接近。宫颈癌组织加入LHRH竞争后,荧光强度较仅加LHRHPE40组明显减弱。结论重组毒素LHRH-PE40仍保留了与癌细胞LHRH受体结合的特性。

4岁内单纯性乳房早发育女童性激素及LHRH激发试验研究

目的了解4岁内单纯性乳房早发育女童的下丘脑-垂体-性腺轴的分泌特征以区别于中枢性及周围性性早熟。方法 374例患儿按照年龄分为6个组,检测促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、雌激素(E2)的基础水平;其中306例行LHRH激发试验,以戈那瑞林作为激发药物,注射前及注射后30、60min抽取静脉血检测FSH和LH的激发值。结果FSH的基础水平[总平均值(4.68±2.32)mIU/mL]显著高于LH[(0.20±0.09)mIU/mL];FSH在大于0.5～1.0岁、>1.0～1.5岁2个年龄组分泌水平较高(P<0.05),随后分泌逐渐下降;LH在大于0.5～1.0岁年龄组分泌水平较高(P<0.05),之后呈逐渐下降趋势。LHRH激发试验中,FSH的激发峰值[总平均值(34.82±12.28)mIU/mL]显著高于LH[(6.71±2.93)mIU/mL],LH/FSH峰值比[总平均值(0.206±0.083)]在各年龄组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);LH峰值在各年龄组之间比较差异无统计学意义(P>0.05),30min达到者234例(76.47%);FSH峰值在大于1.0～1.5岁、>1.5～2.0岁年龄组水平较高(P<0.05),60min达到者274例(89.54%)。E2和PRL在各年龄组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4岁内单纯性乳房早发育女童在该年龄阶段具有分泌特征。

融合蛋白LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合的特性

目的 :探讨重组毒素 LHRH- PE40与癌细胞表面 LHRH受体结合的特性。方法 :用放射性配基结合分析的方法测定亲和力和受体容量。结果 :LHRH- PE40与 Hela细胞的亲和力 :Kd=( 0 .36± 0 .1 2 ) nmol,容量 Bmax=( 0 .2 3± 0 .1 5 )μmol· g-1;与 Hep2细胞亲和力 :Kd=( 0 .33±0 .1 1 ) nmol,容量 Bmax=( 0 .46± 0 .1 2 ) μmol· g-1。结论 :重组毒素 LHRH-