LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合特性的检测

目的检测LHRH-PE40融合蛋白是否保留了LHRH与癌细胞表面其相应受体特异性结合的性质。方法在Hela细胞培养液中,分别加入LHRH和LHRHPE40,经结晶紫染色法检测A值。另取宫颈癌组织切片,分别加LHRH-PE40和LHRH后,再加兔抗PE40血清和羊抗兔IgG异硫氰酸荧光素,在荧光显微镜下观察荧光强度。结果随着LHRH与LHRHPE40的摩尔数之比由100/1、250/1增加到500/1,细胞毒性的效果逐渐减弱。当LHRH/LHRH-PE40达到500/1时,肿瘤细胞表面的LHRH受体饱和;LHRH/LHRHPE40达750/1时,其A值与500/1时的A值接近。宫颈癌组织加入LHRH竞争后,荧光强度较仅加LHRHPE40组明显减弱。结论重组毒素LHRH-PE40仍保留了与癌细胞LHRH受体结合的特性。

融合蛋白LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合的特性

目的 :探讨重组毒素 LHRH- PE40与癌细胞表面 LHRH受体结合的特性。方法 :用放射性配基结合分析的方法测定亲和力和受体容量。结果 :LHRH- PE40与 Hela细胞的亲和力 :Kd=( 0 .36± 0 .1 2 ) nmol,容量 Bmax=( 0 .2 3± 0 .1 5 )μmol· g-1;与 Hep2细胞亲和力 :Kd=( 0 .33±0 .1 1 ) nmol,容量 Bmax=( 0 .46± 0 .1 2 ) μmol· g-1。结论 :重组毒素 LHRH-

LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的：探讨一种新型免疫毒素LHRH-PE40与人结肠癌细胞系Lovo表面LHRH受体结合的特性，观察其对细胞增殖产生的抑制作用及检测细胞凋亡。方法：用^125Ⅰ标记法检测LHRH-PE40与Lovo结合的特异性；MTT比色法检测LHRH-PE40对胃癌细胞的杀伤活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：人结肠癌细胞系Lovo细胞表面可见配基一受体特异性结合，LHRH-PE40对Lovo细胞的半数致死量为0．24mg·L^-1，0．1～10．0mg·L^-1 LHRH-PE40作用于Lovo细胞，其凋亡明显（P〈0．01）。结论：结肠癌细胞Lovo细胞表面存在LHRH受体，LHRH-PE40对结肠癌细胞的增殖状态有明显的抑制作用及促凋亡作用。

LHRH-PE40与正常肝组织和肝癌细胞表面LHRH受体结合特性的比较研究

目的 探讨重组促性腺激素释放激素 绿脓杆菌外毒素 4 0 (LHRH PE4 0 )与正常肝脏组织和肝癌细胞表面受体结合特性的差异。方法 用放射性配基结合分析的方法测定亲和力和受体容量。结果 LHRH PE4 0与肝癌细胞HEPG细胞的亲和力Kd为 (0 .4 3± 0 .12 )nmol·L-1,受体容量Bmax为 (0 .37± 0 .15 )nmol·mg-1,与正常肝脏组织未见结合。结论 重组毒素LHRH PE4 0和肝癌细胞HEPG的表面受体有较强的结合 ,而和正常肝脏组织无特异性结合。

腹腔注射LHRH-A对黑鲷生长激素及其受体的影响

以海水硬骨鱼类黑鲷为研究对象,腹腔注射溶于生理盐水的促性腺激素,释放激素(gonadotropin releasinghormone,GnRH)的类似物(analogueofluteinizinghormone releasinghormone,LHRH A),对照组注射生理盐水.24h后注射LHRH A组黑鲷血清生长激素(growthhormone,GH)水平显著高于对照组(p<0 05),于36h又恢复到对照组水平.注射LHRH A组肝脏生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR)及GHRmR NA均与对照组无显著差异.结果表明,腹腔注射LHRH A刺激了处于性腺成熟期黑鲷GH的分泌,但对黑鲷肝脏GHR及其基因表达无明显影响.

合浦珠母贝生殖腺及消化道GnRH及其受体的免疫组织化学研究

目的 :观察合浦珠母贝生殖腺及消化道促性腺激素释放激素 (Gonadotropin releasinghormone,GnRH)及其受体的表达及分布 ,为进一步研究GnRH对合浦珠母贝生殖和消化功能的调控提供形态学依据 .方法 :利用免疫组织化学ABC法和SP法 .结果 :在消化道的上皮细胞 ,固有层细胞和生精小管上皮细胞 ,GnRH及其受体均呈阳性反应 ,阳性反应物分布在细胞质内 ,细胞核呈阴性反应 ,卵巢间质细胞均呈弱阳性反应 .结论 :合浦珠母贝生殖腺及消化道既能分泌GnRH又能表达其受体 ,说明GnRH可能通过自分泌或旁分泌作用来调节合浦珠母贝的繁殖及消化功能 。

GnRHⅠ,GnRHⅡ及其受体在人卵巢恶性上皮性肿瘤细胞中的表达及意义

目的:探讨促性腺激素释放激素(GnRH)Ⅰ,GnRHⅡ及其受体在卵巢恶性上皮性肿瘤中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化SP法,检测39例卵巢恶性上皮性肿瘤中GnRHⅠ,GnRHⅡ及其受体的表达并与22例卵巢良性上皮性肿瘤作对照.分析GnRHⅠ,GnRHⅡ及其受体表达与卵巢恶性上皮性肿瘤分化的关系.结果:①卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中GnRHⅠ表达阳性率分别为54.5%,79.5%,恶性肿瘤中GnRHⅠ表达阳性率高于良性肿瘤.两者有明显差异.②卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中GnRHⅡ蛋白表达阳性率分别为95.5%,100%,两者无明显差异.③卵巢良性和恶性上皮性肿瘤中GnRH受体表达阳性率分别为81.8%,53.8%,恶性肿瘤中GnRH受体表达阳性率低于良性肿瘤.④GnRHⅠ,GnRH受体表达率与恶性上皮性肿瘤组织学分级有关.其分级越高,GnRHⅠ,GnRH受体表达率亦越高.结论:GnRH自分泌调节系统与恶性上皮性卵巢肿瘤的发生有关.并且Gn-RHⅠ及其受体表达与组织学分级有关.

促性腺激素释放激素类似物在妇科恶性肿瘤中的应用

根据作用机制不同,促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)可分为两类:激动剂和拮抗剂。研究证实,约80%的卵巢癌以及子宫内膜癌能够表达GnRH及其受体,GnRH-A通过间接抑制下丘脑-垂体-性腺轴或通过自分泌及旁分泌直接抑制肿瘤细胞的增殖。GnRH-A曾被用于治疗晚期或复发的子宫内膜癌和卵巢癌,但疗效不明显。而目前研究的热点是将GnRH-A用于保留早期子宫内膜癌患者的生育功能以及保护肿瘤化疗患者的卵巢功能。GnRH-A还可用于妇科恶性肿瘤的靶向治疗。

人甲状腺肿瘤促性腺激素释放激素受体的免疫组化

目的 探讨人甲状腺肿瘤是否存在促性腺激素释放激素受体 (Gn RH- R)及细胞定位 .方法 从我院普通外科收集病例标本 ,分为甲状腺腺瘤组和甲状腺癌组 ,以瘤旁甲状腺及正常甲状腺为对照 ,采用兔抗 Gn RH抗独特型多克隆抗体的免疫组织化学 ABC法 ,确定 Gn RH- R在甲状腺肿瘤中的定位 ,并结合图像分析检测 Gn RH- R在两种肿瘤中相对含量的变化 .结果 甲状腺腺瘤及甲状腺癌细胞均呈较强的Gn RH- R免疫反应阳性 ,阳性物质分布在胞质 ,胞核呈阴性 .甲状腺瘤的阳性信号强于甲状腺癌 .瘤旁甲状腺及正常甲状腺滤泡上皮细胞免疫反应阳性较弱 ,胞质深染 ,呈棕褐色 ,胞核淡染 ,未见有阳性物质分布 .图像分析结果 ,甲状腺瘤组单位面积免疫反应阳性物质的相对含量为 0 .0 74± 0 .0 13,甲状腺癌组为 0 .0 33± 0 .0 11,甲状腺瘤组相对含量显著高于甲状腺癌组 (P<0 .0 5 ) .瘤旁及正常甲状腺组为 0 .0 18± 0 .0 0 7,其相对含量较肿瘤组低 (P<0 .0 5 ) .结论 人甲状腺肿瘤中有Gn RH- R存在 . Gn RH- R含量的多少可能与甲状腺肿瘤的分化程度相关 .我们推测 Gn RH可能参与甲状腺肿瘤发生的调节 .

丹参多酚酸对免疫性不孕大鼠的治疗作用及对下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的探讨丹参多酚酸对免疫性不孕大鼠的治疗作用及对下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)的影响。方法取50只未孕雌性SD大鼠,采用人精液注射免疫的方法建立抗精子抗体阳性的免疫性不孕大鼠模型,将建模成功大鼠采用随机数字表法分为模型组(9只)、强的松组(10只)和丹参多酚酸低剂量组(9只)、中剂量组(10只)、高剂量组(10只),另取10只未孕雌性大鼠为正常对照组。强的松组经腹腔注射给予5 mg/kg强的松,丹参多酚酸低、中、高剂量组分别经腹腔注射给予10、20、40 mg/kg丹参多酚酸,正常对照组和模型组均给予等量生理盐水,每日1次,共14 d。各组雌性大鼠与正常雄性大鼠按3∶1数量比合笼2周,统计各组大鼠受孕率;放射免疫法测定血清中促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)以及雌二醇(E2)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠卵巢组织病理改变情况;实时定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫印迹法检测大鼠卵巢卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)、雌激素受体α(ERα)mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠受孕率,血清GnRH、FSH、LH、E2含量降低(P<0.05),卵巢内黄体和成熟卵泡明显减少,颗粒细胞层数减少,囊状卵泡较多,FSHR、LHR、ERαmRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,强的松组和丹参多酚酸中、高剂量组大鼠受孕率,血清GnRH、FSH、LH、E2含量升高(P<0.05),囊状卵泡数目减少,颗粒细胞层数增多,有成熟卵泡和黄体生成,FSHR、LHR、ERαmRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。结论丹参多酚酸可通过调控HPOA促进卵泡成熟治疗免疫性不孕。

Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PE40与HeLa细胞上LHRH受体结合的抑制作用

目的探讨Spiegelmer NOX 1255对促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素40(Luteinizing hormone-releasing hor-mone-Pseudomonas aeruginosa exotoxin 40,LHRH-PE40)与HeLa细胞上促黄体激素释放激素(LHRH)受体结合的抑制作用。方法分别将25μmol/L的LHRH-PE40、PEA和PE40与HeLa细胞共孵育24 h后,观察细胞的形态学变化;用Spiegelmer NOX1255特异性结合LHRH-PE40上的LHRH,光学显微镜观察Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PE40的抑制作用,ELISA检测Spiege-lmer NOX 1255对LHRH-PE40与LHRH受体结合的抑制作用。结果 LHRH-PE40和PEA可直接杀伤HeLa细胞,而PE40不能对HeLa细胞产生毒性作用;Spiegelmer NOX 1255能够结合LHRH-PE40中的LHRH,抑制LHRH-PE40与LHRH受体的结合及PE40的毒性作用。结论 LHRH-PE40对HeLa细胞的毒性作用是通过细胞表面的LHRH受体产生的;Spiegelmer NOX 1255可阻断LHRH-PE40与HeLa细胞表面LHRH受体的结合。

LHRH受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力

目的探讨人促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力。方法取外科手术收集的50份喉鳞癌及20份癌旁组织标本,采用Western blot法检测LHRH受体的表达,免疫荧光分析法检测LHRH受体的亚细胞定位,ELISA法检测HEp-2细胞膜表面LHRH受体与LHRH-PE40的亲和力。结果 LHRH受体在喉癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P<0.001);LHRH受体在喉癌组织中定位于细胞膜和细胞质,而在癌旁组织中定位于整个腺体周边;LHRH受体在HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的结合显示出线性和饱和性,且可被LHRH直接特异性抑制。结论 LHRH受体在喉癌组织中的过度表达及其在喉癌细胞表面与LHRH-PE40的高亲和力表明,其可能是LHRH-PE40的一个潜在的治疗靶点。

LHRH-PE40对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用

目的 研究促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素(Luteinizing hormone releasing hormone-Pseudomonas aeru-gionosa exotoxin 40,LHRH-PE40)对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用。方法用LHRH-PE40处理A375细胞,透射电镜观察细胞结构的改变;DNA ladder和流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果经LHRH-PE40作用后,透射电镜观察可见A375细胞核聚集于一侧;DNA ladder检测发现,A375细胞的DNA电泳图像呈梯形条带;流式细胞术检测结果显示,A375细胞出现明显的二倍体峰,细胞周期也发生了相应的改变。结论 LHRH-PE40对A375细胞的细胞毒性作用可以有效诱导A375细胞凋亡。

促性腺激素释放激素受体mRNA在正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达

目的探讨促性腺激素释放激素受体(GnRH R)mRNA在正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达。方法采用原位杂交技术,检测23份增生期正常子宫内膜、30份分泌期正常子宫内膜及30份子宫内膜腺癌组织中GnRH RmRNA的表达。结果正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中GnRH RmRNA均呈阳性表达,其阳性信号物质位于细胞质。增生期及分泌期正常子宫内膜组织GnRH RmRNA的阳性表达率分别为17%(4/23)和17%(5/30),两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜腺癌组织GnRH RmRNA的阳性表达率为40%(12/30),明显高于正常子宫内膜组织[17%(9/53),P<0.05]。结论GnRH可直接作用于子宫内膜产生内分泌作用,癌变的子宫内膜细胞表面GnRH R明显增多。

达那唑诱导的雌性性早熟大鼠GnRH及其受体mRNA的表达

目的 观察达那唑对雌性大鼠下丘脑 垂体 靶腺轴及下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA表达的影响。方法 5天龄雌性大鼠皮下一次注射 3 0 0 μg达那唑以诱导真性性早熟。从 2 5日龄起观察和记录阴门开启鼠龄和从阴门开启日起进行阴道涂片以确定第一个动情周期。检查阴道涂片和体重及垂体、肾上腺、子宫、卵巢器官重量 ,观察雌激素依赖的阴道脱落细胞的周期性变化和主要器官的发育情况。RT PCR法观察雌性大鼠下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达。结果 5日龄雌性大鼠给予皮下注射达那唑 ,可诱导大鼠阴门提前开启和建立性周期的时间提前 ,子宫和卵巢的重量明显增加 ,下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达升高。结论 达那唑对雌性大鼠下丘脑 垂体 卵巢轴有多层次的作用 ,可诱导雌性大鼠下丘脑 垂体

天蚕素B-黄体生成素释放激素结合部位重组基因的构建及其抑癌功能的研究

目的构建天蚕素 B-黄体生成素释放激素结合部位(CB-LHRH')重组基因,探讨 CB-LHRH'蛋白成为新型抗肿瘤靶向药物的可能性。方法设计并人工合成 CB-LHRH′重组基因序列,应用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达目的蛋白并通过蛋白斑点印迹法鉴定,采用二甲氧唑黄(XTT)比色法检测不同剂量的目的蛋白对卵巢上皮性癌细胞株 SKOV3(LHRH 受体阴性)和子宫内膜癌细胞株 HEC-1B(LHRH 受体阳性)细胞的生长抑制率,并进行镜下形态观察。结果蛋白斑点印迹法检测结果显示,重组杆状病毒感染的 Sf9细胞裂解液呈现棕色,证实 CB-LHRH'蛋白已表达。重组杆状病毒感染的昆虫细胞系 Sf9细胞裂解液对 SKOV3及 HEC-1B 细胞的生长抑制率,随作用时间的延长和剂量的增加而增加,SKOV3细胞的生长抑制率从(5.03±0.08)%增加至(53.24±1.22)%,HEC-1B细胞的生长抑制率从(5.13±0.37)%增加至(56.16±1.08)%。相同剂量的重组杆状病毒感染的 Sf9细胞裂解液,作用相同时间,其对 HEC-1B 细胞的生长抑制率高于 SKOV3细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。经重组杆状病毒感染的 St9细胞裂解液作用后,镜下可见癌细胞出现明显改变甚至成片坏死崩解为无定形的颗粒状物质。结论 CB-LHRH'蛋白可有效杀伤 LHRH 受体阳性的HEC-1B 细胞,有望成为治疗表达 LHRH 受体的肿瘤的抗肿瘤靶向药物。

丙氨瑞林对人子宫内膜癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制研究

目的探讨不同剂量的醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长及其可能的作用机制。方法建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,选32只雌性荷瘤裸鼠随机分为4组,即空白对照组、醋酸丙氨瑞林干预组(20μg/kg、40μg/kg、80μg/kg),不同剂量醋酸丙氨瑞林组均采取肌肉注射方式连续给药,4周后处死裸鼠,将移植瘤完整取出,测量肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率,并应用免疫组织化学法检测瘤组织中TGF-β1、Smad2/3、Smad7蛋白的表达。结果实验对照组、低、中、高剂量醋酸丙氨瑞林组中移植瘤生长曲线斜率依次减小,生长速度依次减慢。低、中、高剂量醋酸丙氨瑞林抑瘤率分别为(13.03±5.4)%、(26.42±7.3)%、(43.27±6.9)%,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。随着醋酸丙氨瑞林浓度的升高,各干预组TGF-β1、Smad2/3蛋白表达水平明显升高,Smad7蛋白表达水平明显下降,且与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论醋酸丙氨瑞林对子宫内膜癌细胞株Hec-1-B裸鼠皮下移植瘤生长有抑制作用,且呈一定的剂量依赖效应,其作用机制可能与调节TGF-β1/Smads信号转导通路有关。

促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A对肿瘤细胞的靶向性作用

目的探讨重组促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A(Luteinizing hormone releasing hormone-pseudomonasexotoxin A,LHRH-PE40)与肿瘤细胞和正常细胞膜表面受体特异性结合的差异。方法常规培养Hep-2、A549及LO2细胞,通过细胞毒性试验观察LHRH-PE40对3种细胞的形态学影响及生长抑制作用;通过LHRH-PE40与LHRH受体的结合试验及LHRH对LHRH-PE40竞争性抑制试验,测定LHRH-PE40在不同细胞中膜表面受体结合的差异。结果 LHRH-PE40对Hep-2、A549细胞具有明显的杀伤作用,细胞收缩变圆,色暗,折光性差,裂解死亡,杀伤作用随LHRH-PE40浓度的增大而增强,IC50值分别为0.45和0.19μmol/L,而对LO2细胞毒性作用较弱;LHRH-PE40可与Hep-2和A549细胞受体结合密切,A490值较高,与两种细胞的结合力随着时间的延长而增加,与LO2细胞结合较弱;LHRH可以竞争性拮抗抑制LHRH-PE40与Hep-2、A549细胞的结合,结合力随着LHRH浓度的增高而递减,对LHRH-PE40和LO2细胞结合影响较小。结论 LHRH-PE40可特异性结合癌细胞表面LHRH受体,从而发挥对肿瘤细胞的靶向杀伤作用。