单核细胞增多性李斯特菌LIPI-1全基因克隆与序列分析

参考GenBank中单核细胞增多性李斯特菌(LM)第I毒力岛(LIPI-1)有关基因序列设计引物,分段扩增、克隆了分离菌株XFL0605LIPI-1毒力岛全基因序列,序列全长8 558 bp,包括完整的prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB6个基因。对LIPI-1编码的6个毒力基因进行序列分析,各毒力基因反映的进化关系不尽一致,表明李斯特菌株在获得外源性毒力基因方面具有不同步性,各毒力基因来源也不尽相同。应用相应软件对各毒力基因编码蛋白的信号肽、跨膜区进行预测,确定了基因序列中调控蛋白PrfA结合区核苷酸序列。分析并确认了hlyA基因及推导氨基酸序列PEST基序和C端保守11肽序列。研究还发现LM菌株XFL0605actA基因编码604个氨基酸,缺失了105 bp富脯氨酸重复片段编码碱基,只有2个E/DFPPPPXD/E重复序列。

LIPI评分对PD-1/PD-L1抑制剂治疗非小细胞肺癌效果与预后的价值分析

目的探讨肺癌免疫治疗预后指数(LIPI)对程序性死亡受体1(PD-1)及程序性死亡受体1配体(PD-L1)抑制剂治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的预测价值。方法选取2020年4月—2021年4月山东第一医科大学第三附属医院肿瘤内科收治的180例NSCLC患者。根据LIPI评分分为良好组、中等组、较差组,分别有56、82和46例。患者均接受PD-1/PD-L1抑制剂单一治疗或联合含铂双药化疗方案。比较各组肿瘤疗效、免疫组织化学指标[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)]、血清指标[NK细胞活化性受体(NKG2D)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)]、肺癌生存质量测定量表(FACT-L)、预后[无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)、6个月生存率、1年生存率],采用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果良好组、中等组ORR高于较差组。较差组治疗前后PI3K、PKB、mTOR的差值高于良好组、中等组,良好组低于中等组。较差组治疗前后NKG2D的差值低于良好组、中等组,治疗前后IFN-γ、IL-6的差值高于良好组、中等组,中等组治疗前后NKG2D的差值低于良好组,治疗前后IFN-γ、IL-6的差值高于良好组。较差组治疗前后FACT-L评分的差值低于良好组、中等组,中等组低于良好组。较差组PFS、OS短于良好组、中等组,中等组短于良好组。结论LIPI评分可用于评估PD-1/PD-L1抑制剂治疗NSCLC患者的效果与预后,LIPI评分高的患者在治疗中获益更高、预后更好。

食源性单增李斯特菌毒力岛基因检测与致病性

为了解食源性单增李斯特菌分离株的毒力岛1(LIPI-1)和毒力岛2(LIPI-2)的基因及致病性.利用PCR方法对8株分离株LIPI-1和LIPI-2进行基因检测,小鼠腹腔接种分离株菌悬液5×10^7CFU/只,进行致病性的初步试验.结果显示,LIPI-1的6个毒力基因除actA基因检出率为50.0%外,hly、prfA、plcA、plcB、mpl的检出率为100.0%;LIPI-2中inlA、inlB、inlC基因检出率为100.0%,inlD和inlE基因检出率分别为87.5%和75.0%,inlF和inlG毒力因子基因的检出率较低,分别为50.0%和37.5%.小鼠致病性试验显示,8株分离株均能致死小鼠,致死率在50.0%~100.0%.其中,LM5567和LM5570在5d内全部死亡,致死率为100.0%,表明这2株菌对小鼠有强致病力.说明LIPI-1基因检出率高于LIPI-2的基因检出率;菌株的致病性与毒力岛基因的携带率无明显相关,但分离株对小鼠均有致病性,提示食品安全不容忽视.本研究为食源性单增李斯特菌毒力岛基因携带率与致病力的关系提供铺垫.

单核增生性李斯特氏菌mpl和plcB基因分布

为了研究mpl和plcB基因在单核细胞增生李斯特菌中的分布状况,为单核细胞增生李斯特菌的防治及追溯提供依据。本试验以分离自生肉、熟肉制品、冷冻食品、水产品、蔬菜等6类不同来源共105株单核细胞增生李斯特菌株作为研究对象,利用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌mpl、plcB基因的分布进行检测。结果表明:所有菌株均有这2个基因中的一个或全部,总检出率为100%。其中,mpl基因总检出率为82.9%,plcB基因的总检出率为98.1%。食品来源不同,单核细胞增生李斯特菌mpl、plcB基因的检出率不同,且同一来源的菌株其mpl和plcB的检出率也不同,表明不同来源以及不同的毒力基因在单核细胞增生李斯特菌中的分布存在差异。

三株不同毒力单增李斯特菌第一毒力岛基因全序列的克隆及遗传变异分析

为分析单增李斯特菌重要毒力因子的遗传进化关系,并进一步探讨不同毒力菌株重要毒力因子的分子差异,分段扩增、克隆了3株不同毒力及不同血清型菌株的第1毒力岛(LIPI-1)全基因序列,对3株菌LIPI-1的6个毒力基因分别测序并进行了序列和系统进化分析。对其中毒力差异明显的2株菌,在分析其毒力表型的基础上,对其进行了分子特征和遗传变异分析。结果表明各毒力基因同源性各异,6个毒力基因反映出的进化关系不一致。弱毒株N21与强毒株Lmo0586相比,具有相似的溶血活性以及更强的溶脂活性。2株菌的调控序列prfA无明显差异;2株菌hly序列中的PEST基序有1个氨基酸发生了变化;2株菌的actA序列差异最显著,强毒株Lmo0586比弱毒株N21少105个核苷酸,造成35个氨基酸的缺失,该序列位于ActA蛋白的脯氨酸重复区内。