非瑟酮调节LKB1-AMPK-mTOR-p70S6K通路改善大鼠少弱精子症

目的研究非瑟酮对少弱精子大鼠的睾丸及精子保护作用,并探究其机制。方法构建大鼠少弱精子模型,将大鼠随机分为空白组、模型组、非瑟酮低、中、高剂量治疗组、LKB1激动剂组,每组各10只。ELISA法检测各组卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinising hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、催乳素(prolactin,PRL)水平;流式细胞术检测精子细胞凋亡;HE染色检测大鼠睾丸组织损伤;透射电镜检测精子细胞超微结构;qRT-PCR和Western blot检测LKB1、AMPK、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达。结果与空白组相比,模型组和LKB1激动剂组FSH、LH、PRL、T等激素水平明显降低,精子细胞出现凋亡,睾丸损伤严重,LKB1、p-AMPK/AMPK表达明显上调,mTOR、p-p70S6K/p70S6K表达下调(P<0.05);与模型组相比,不同剂量的非瑟酮治疗后,精子细胞凋亡数明显减少,FSH、LH、PRL、T等激素水平明显上升,LKB1、p-AMPK/AMPK明显下调,mTOR、p-p70S6K/p70S6K明显上调(P<0.05)。结论非瑟酮可有效治疗少弱精症大鼠,其作用机制可能与LKB1-AMPK-mTOR-p70S6K信号通路有关。

四物汤通过激活LKB1/AMPK通路对多囊卵巢综合征大鼠的改善作用

目的基于肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路探讨四物汤对多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠的改善作用及相关机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、达英-35+二甲双胍组(0.2+230 mg·kg^(-1))和四物汤低、中、高剂量组(1.62、3.24、6.48 g·kg^(-1)),每组10只;采用灌胃1 mg·kg^(-1)来曲唑混悬液,每日1次,连续21 d,制备PCOS大鼠模型;各组均灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续30 d。采用ELISA法检测大鼠血清中血糖、胰岛素、雌二醇(E_(2))、睾酮(T)、促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)和促黄体生成素(LH)水平,计算胰岛素抵抗(IR)指数;测定并计算大鼠卵巢系数;HE染色法观察大鼠卵巢组织病理变化;免疫组织化学法检测大鼠卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白表达水平;实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织中LKB1、AMPK mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的血糖、胰岛素水平及IR指数明显升高(P<0.05),血清中T、GnRH、LH水平明显升高(P<0.05),E_(2)、FSH水平明显降低(P<0.05);大鼠的卵巢系数明显升高(P<0.05),卵巢组织中闭锁卵泡增多,囊性病变增加;卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,达英-35+二甲双胍组和四物汤低、中、高剂量组大鼠的血糖、胰岛素水平及IR指数明显降低(P<0.05),血清中GnRH、LH水平明显降低(P<0.05),FSH水平明显升高(P<0.05);达英-35+二甲双胍组和四物汤中剂量组大鼠血清中E_(2)水平明显升高(P<0.05),T水平明显降低(P<0.05);达英-35+二甲双胍组和四物汤低、中、高剂量组的大鼠卵巢系数明显降低(P<0.05),卵巢组织囊性病变明显减轻;卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论四物汤对PCOS大鼠性激素水平、IR及卵巢囊性改变具有明显改善作用,其机制可能与激活LKB1/AMPK通路有关。

紫檀芪调节LKB1/AMPK信号通路减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠氧化应激损伤

目的:分析紫檀芪调节肝激酶B1/腺苷酸活化蛋白激酶(LKB1/AMPK)信号通路减轻缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠氧化应激损伤的机制。方法:构建72只HIBD新生大鼠模型,并分为模型组、紫檀芪低剂量组(15 mg/kg)、紫檀芪高剂量组(30 mg/kg)、紫檀芪高剂量+compound C组(紫檀芪30 mg/kg+compound C 20 mg/kg),每组18只,另选取12只新生大鼠为假手术组。采用水迷宫实验评估大鼠学习与记忆能力;红四氮唑(TTC)染色法测定大鼠脑梗死面积;测定大鼠脑含水量;检测大鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;蛋白质印迹法测定海马组织LKB1/AMPK信号通路相关蛋白。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期加长,脑梗死面积、脑含水量、脑组织MDA水平升高,穿越平台次数减少,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平降低(P<0.05)。与模型组相比,紫檀芪低剂量组、紫檀芪高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,脑梗死面积、脑含水量、脑组织MDA水平降低,穿越平台次数增多,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平升高(P<0.05),且紫檀芪低、高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与紫檀芪高剂量组相比,紫檀芪高剂量+compound C组大鼠逃避潜伏期加长,脑含水量、脑组织MDA水平升高,穿越平台次数减少,脑组织上清液SOD、GSH-Px及海马组织p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平降低(P<0.05)。结论:紫檀芪可能通过促进LKB1/AMPK/Nrf2信号通路介导的抗氧化应激,减轻新生大鼠HIBD。

高龄孕鼠子代脑海马星形胶质细胞和神经元初级纤毛功能缺陷可能与LKB1/AMPK通路促进凋亡相关

目的探讨高龄妊娠子代脑海马星形胶质细胞和神经元初级纤毛与凋亡的变化情况以及LKB1/AMPK通路在其中的作用。方法采用12月龄SD雌鼠与3月龄SD雄鼠交配产下子代作为高龄(advanced maternal age,AMA)组,3月龄SD雌鼠与3月龄SD雄鼠交配产下子代作为适龄(control,Ctl)组,于生后第14、28、60天(P14、P28、P60)对两组(各时间点每组14只,均雌雄各半)进行下列研究:苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和尼氏染色观察海马神经元形态、数量及其内部尼氏体的变化;免疫荧光检测海马初级纤毛标志物抗ADP核糖基化因子相似蛋白-13B(anti-ADP-ribosylation factor-like protein 13B,ARL13B)表达,Western blot检测海马鞭毛内运输蛋白88(intraflagellar transport 88,IFT88)表达,评估初级纤毛发生功能变化;TUNEL染色及Western blot检测促凋亡基因Bax表达蛋白(BAX)、抑凋亡基因Bcl-2表达蛋白(BCL-2)水平,观察海马内细胞凋亡变化;Western blot检测肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1)、单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及其对应的磷酸化蛋白表达水平,评估LKB1/AMPK通路变化。结果与Ctl组相比:HE染色、尼氏染色结果显示,AMA组在P14时海马神经元数量明显减少(P<0.05),AMA组在各时间点海马神经元形态和尼氏体数量、形态均存在异常变化;AMA组ARL13B阳性细胞发生率在P14(P<0.05)和P28(P<0.001)时均显著下降,ARL13B长度在P14和P28显著缩短(P均<0.05),同时,AMA组IFT88蛋白表达在P14时明显下降(P<0.01);TUNEL染色发现AMA组在P14时海马内细胞凋亡率明显增高(P<0.05);Western blot结果显示AMA组在P14时BAX蛋白表达显著升高(P<0.001),BCL-2蛋白表达显著降低(P<0.01);AMA组在P14时磷酸化LKB1表达明显下降(P<0.05),磷酸化AMPK表达水平在P28和P60时明显升高(P均<0.01),磷酸化mTOR表达在P60时明显下降(P<0.05)。结论高龄妊娠子代幼年期脑海马存在神经元损伤、初级纤毛发生缺陷和生长功能抑制,以及凋亡异常激活,同时高龄妊娠子代脑海马星形胶质细胞和神经元初级纤毛调控的LKB1/AMPK通路在各年龄期均存在异常活化。

LKB1、VEGFR2在非小细胞肺癌组织中表达及临床意义

目的探究LKB1、VEGFR2在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法收集病理确诊的NSCLC 52例患者,分别取材自病灶癌组织及癌旁正常肺组织,检测其LKB1、VEGFR2的表达水平,分析其表达情况与临床病理特征的相关性。结果在癌组织中LKB1阳性表达率低于正常组织(61.54%VS96.15%),VEGFR2阳性表达率高于正常组织(57.69%VS5.77%);在淋巴转移、有吸烟史、中低分化、鳞癌、肿瘤直径≥3 cm、分期Ⅲ-Ⅳ患者中LKB1阳性率更低,VEGFR2阳性率更高,鳞癌高于腺癌;二者表达率呈负相关(P均<0.05)。结论LKB1、VEGFR2表达与肺癌临床病理特征密切相关,二者参与肺癌的发生发展;LKB1低表达与VEGFR2高表达提示患者淋巴转移以及低分化程度;二者表达呈负相关。

外泌体介导miR-335-5p通过靶向LKB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨外泌体中microRNA-335-5p(miR-335-5p)被胶质瘤细胞摄取并作用于肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)影响胶质瘤细胞侵袭的分子机制。方法通过外泌体提取试剂盒提取外泌体;运用透射电镜、粒度仪、Western blot法鉴定分离获取的外泌体;RT-PCR检测不同肿瘤细胞来源外泌体中miR-335-5p的表达量;外泌体摄取实验检测胶质瘤细胞对外泌体的摄取情况;Transwell实验检测加入外泌体后胶质瘤细胞的侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p是否靶向结合LKB1;Transwell实验检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞的侵袭能力;Western blot法检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞中LKB1和上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达水平。结果LN229细胞来源的外泌体中miR-335-5p表达水平明显高于H4细胞来源的外泌体;过表达miR-335-5p后LN229细胞侵袭能力增强;miR-335-5p靶向结合LKB1 mRNA的3′UTR区;miR-335-5p通过负向调控LKB1诱导胶质瘤细胞发生上皮-间质转化。结论外泌体中的miR-335-5p被胶质瘤细胞摄取并通过抑制LKB1蛋白表达诱导细胞发生上皮-间质转化,从而促进胶质瘤细胞的侵袭。

西红花苷通过LKB1/AMPK/mTOR通路抑制食管癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的探讨西红花苷对食管癌细胞细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其可能机制。方法以人食管癌Eca-109细胞为受试对象,采用CCK-8法检测不同浓度西红花苷对细胞的抑制作用,筛选最佳浓度和干预时间。将食管癌Eca-109细胞分为对照组、西红花低、中、高剂量组,分别按照0μmol/L、17μmol/L、34μmol/L、68μmol/L给予西红花苷干预,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot及RT-qPCR法分别检测各组细胞LKB1、AMPK、m TOR mRNA和蛋白表达水平。结果Transwell侵袭和细胞凋亡实验结果表明,与空白对照组比较,低、中、高剂量西红花苷组细胞穿过基膜的数量减少,凋亡率增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Western blot和RT-qPCR结果显示,与空白对照组比较,低、中、高剂量西红花苷组细胞LKB1、AMPK m RNA和蛋白表达水平升高,mTOR mRNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论西红花苷对食管癌可能有抑制作用,其机制可能与调控LKB1/AMPK/mTOR信号通路相关。

芍药苷调节LKB1-AMPK信号通路对LPS诱导的牙周膜干细胞凋亡和成骨分化的影响

目的:探讨芍药苷(PF)调节肝激酶B1(LKB1)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(PDLSCs)凋亡和成骨分化的影响。方法:收集对数生长期PDLSCs,分为对照组、LPS组(10μg/mL),LPS+PF低浓度(PF-L,10μg/mL LPS+5μmoL/L PF)组、LPS+PF中浓度(PF-M,10μg/mL LPS+10μmoL/L PF)组、LPS+PF高浓度(PF-H,10μg/mL LPS+20μmoL/L PF)组、LPS+PF-H+LKB1抑制剂(radicicol,10μg/mL LPS+20μmoL/L PF+10μmoL/L radicicol)组。ELISA检验细胞中炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6]水平;茜素红染色观察矿化结节变化;碱性磷酸酶(ALP)检测细胞成骨分化;流式细胞仪检测细胞凋亡;qRT-PCR检测成骨基因(OPN、RUNX2及OCN)表达水平;Western blot检测LKB1-AMPK通路蛋白及凋亡蛋白(caspase-1)表达水平。结果:与对照组相比,LPS组矿化结节减少,细胞凋亡率及caspase-1表达、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著增加,ALP水平及OPN、RUNX2、OCN表达、LKB1与AMPK磷酸化水平显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+PF-L组、LPS+PF-M组、LPS+PF-H组矿化结节明显增多,细胞凋亡率及caspase-1表达、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低,ALP水平及OPN、RUNX2、OCN表达、LKB1与AMPK磷酸化水平显著增加,均呈现剂量依赖性(P<0.05);但radicicol逆转了PF-H对LPS诱导的PDLSCs凋亡和成骨分化的作用(P<0.05)。结论:PF通过上调LKB1-AMPK信号通路,抑制LPS诱导的PDLSCs凋亡、促进成骨分化。

甘草素调节LKB1/AMPK信号通路对冠心病大鼠的心脏保护作用研究

目的探讨甘草素(Liq)调节肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路对冠心病大鼠的心脏保护作用。方法Wistar大鼠随机分为对照组及造模组,造模组通过高脂饲料喂养以及腹腔注射垂体后叶素建立冠心病大鼠模型,将造模成功的冠心病大鼠随机分为冠心病组、Liq低剂量(Liq-L)组(100 mg/kg Liq)、Liq高剂量(Liq-H)组(300 mg/kg Liq)、Liq-H+Radicicol组(300 mg/kg Liq+40 mg/kg Radicicol)。干预结束后,检测心功能[左心室收缩末期直径(LVSD)、射血分数(EF)、左心室舒张末期直径(LVDD)和左心室缩短分数(FS)]及血脂水平[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)];ELISA检测血清中炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]及氧化应激因子[谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)]水平;分离心脏组织,HE染色观察组织病理变化;Western Blot检测p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平。结果与对照组相比,冠心病组大鼠心脏组织排列紊乱,有大量炎性细胞浸润,大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TC、TG、LDL、LVSD、LVDD、MDA显著增加,p-AMPK/AMPK、LKB1表达、HDL、EF、FS、SOD、GSH显著降低(P<0.05);与冠心病组相比,Liq-L组、Liq-H组病理损伤得到缓解,IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TC、TG、LDL、LVSD、LVDD、MDA显著降低,p-AMPK/AMPK、LKB1表达、HDL、EF、FS、SOD、GSH显著增加(P<0.05);与Liq-H组相比,Liq-H+Radicicol组病理损伤加重,IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TC、TG、LDL、LVSD、LVDD、MDA显著增加,p-AMPK/AMPK、LKB1表达、HDL、EF、FS、SOD、GSH显著降低(P<0.05)。结论Liq可能通过激活LKB1/AMPK信号通路发挥对冠心病大鼠心脏的保护作用。

百色市壮族人群宫颈鳞癌患者的Claudin-1和LKB1表达及诊断价值

研究Claudin-1、LKB1在子实体瘤中的表达及其与子实体瘤的关系。方法 探讨Claudin-1、LKB1在子宫颈癌中的作用。结果 1Claudin-1的表达在正常人宫颈、CIN和子宫颈组织中均有增加,LKB1的表达则减少。2.Claudin-1高表达,LKB1表达降低,病理分级高表达,淋巴结转移,中后期高表达。我们前期研究发现3claudin-1和LKB1之间存在着显著的负相关性。结论 Claudin-1高表达、LKB1低表达可能与宫颈癌发生发展有关。Claudin-1上调、LKB1下调可作为判断宫颈癌进展及预后判断的指标。

结肠癌组织中LKB1的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的探讨LKB1在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤上皮-间质转化的关系。方法采用免疫组化法检测75例结肠癌组织及对应癌旁正常结肠组织中LKB1、上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关标志物E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达,分析LKB1表达与结肠癌临床病理特征及EMT的关系。结果 49例结肠癌组织中LKB1低表达,55例正常结肠组织中LKB1高表达;LKB1表达降低与淋巴结转移、TNM肿瘤分期相关(P<0.05);E-cadherin、N-cadherin、vimentin分别在25例、48例、26例结肠癌组织中高表达,LKB1表达与E-cadherin表达呈正相关(r=0.648,P<0.05),与Ncadherin(r=-0.891,P<0.05)和vimentin(r=-0.660,P<0.05)表达呈负相关。结论 LKB1在结肠癌组织中表达下调,与EMT的发生呈正相关,可作为结肠癌转移发生的预测指标。

LKB1-AMPK-mTOR信号传导通路在肿瘤中的研究进展

肿瘤可以认为是一种基因疾病,其中癌基因的激活和抑癌基因的失活是肿瘤发生、发展过程中最为关键的环节之一。近年来,一个新的抑癌基因LKB1,又名STK11（serine threonine protein kinase11）,在肿瘤中的作用引起了越来越多的关注。

LKB1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨LKB1蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化方法检测76例非小细胞肺癌中LKB1蛋白的表达情况。结果 LKB1蛋白在肺癌组织及癌旁正常肺组织中均有表达,LKB1在正常肺组织的阳性表达率显著高于癌组织(90.78%vs 65.79%,P<0.01)。LKB1蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中的表达无显著性差异。LKB1蛋白在高分化肿瘤中的表达阳性率明显高于中-低分化肿瘤(81.82%vs53.49%,P<0.05)。LKB1蛋白在无淋巴结转移组的阳性表达率明显高于淋巴结转移阳性组(89.29%vs 52.08%,P<0.01)。结论 LKB1蛋白的低表达与肺癌的发生有关,并且影响肿瘤的分化及淋巴结转移,可能影响肺癌的预后。

LKB1在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的探讨抑癌基因LKB1在子宫内膜样腺癌及正常组织中的表达差异及其与肿瘤临床病理因素和微血管密度的关系。方法应用免疫组化方法检测LKB1在50例子宫内膜样腺癌和30例子宫内膜单纯性增生组织中的表达,并通过检测CD34在子宫内膜样腺癌的表达确定肿瘤微血管密度。结果 LKB1在子宫内膜样腺癌中的表达低于子宫内膜单纯性增生组织(P=0.033);在子宫内膜样腺癌中,LKB1的低表达与肿瘤细胞低分化、肌层浸润≥1/2及高微血管密度相关(P=0.022,P=0.035,P=0.030)。结论 LKB1能够抑制子宫内膜样腺癌的发生、新生血管形成及侵袭。

LKB1调控Peutz-Jeghers综合征错构瘤及肠上皮细胞中的上皮间质转化

目的探讨LKB1在Peutz-Jeghers综合征(PJS)错构瘤及肠上皮细胞中对上皮间质转化(EMT)调控作用。方法采用免疫组化法检测20例PJS错构瘤标本及10例正常肠道组织中LKB1、ecadherin、vimentin蛋白的表达。Masson三色染色法分析胶原纤维沉积。选取NCM460人肠上皮细胞株,慢病毒转染后建立LKB1敲低及空载体稳定表达株。以CCK8实验和transwell迁移实验评价LKB1敲低对细胞增殖、迁移的影响。运用WB、q PCR、免疫荧光检测LKB1敲低后对细胞中EMT相关蛋白ecadherin、vimentin、ncadherin、snail、slug表达的影响。结果与正常肠组织相比,PJS错构瘤中LKB1和ecadherin蛋白表达下降,而vimentin蛋白表达增加。Masson染色提示错构瘤中胶原纤维沉积增多,沉积面积扩大。与空载体组相比,LKB1敲低的NCM460细胞增殖、迁移能力明显增强(P<0.01),细胞中ecadherin表达降低,ncadherin、vimentin、snail、slug表达增高。结论LKB1可能通过调控EMT从而影响PJS错构瘤的形态改变及纤维化进程,提示EMT可能成为PJS治疗的新靶点。

LKB1基因对卵巢颗粒细胞类固醇激素生成相关基因的调控作用

【背景】颗粒细胞类固醇激素的合成能力对卵泡发育及成熟具有重要作用,但其关键的调控因子尚不完全清楚。笔者前期的研究表明肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)基因参与细胞的脂类代谢,类固醇激素的合成与脂类代谢密切相关,并且有研究结果亦显示LKB1敲除可引起小鼠卵巢早衰,表明LKB1对维持卵巢的功能很关键,其在颗粒细胞的确切功能需要进一步研究。【目的】探究LKB1在牛卵泡中的表达模式及其对颗粒细胞类固醇激素生成相关基因的调控作用,为母牛繁殖生理调控研究提供理论依据。【方法】采用免疫组织化学染色对LKB1蛋白在卵泡中进行定位研究;同时分离培养牛原代颗粒细胞,并以促卵泡素受体(follicle stimulating hormone receptor, FSHR)蛋白作为标记基因,细胞免疫荧光染色鉴定颗粒细胞及纯度;然后以原代颗粒细胞为模型,采用siRNA沉默LKB1的技术,利用qRT-PCR方法检测LKB1功能缺失对类固醇激素合成相关基因表达的影响,另一方面采用腺病毒过表达LKB1,qRT-PCR和ELISA技术验证LKB1对类固醇激素合成相关基因表达的调控作用及雌二醇分泌。【结果】1) LKB1蛋白在卵泡中的细胞均表达,但颗粒细胞的染色信号强于膜细胞,进一步的定量分析显示颗粒细胞的表达量显著高于卵泡膜细胞。2)分离培养的牛原代卵泡颗粒细胞贴壁生长、细胞形态多呈圆形,能被颗粒细胞标志基因FSHR抗体标记。3) RNAi技术能显著抑制LKB1的表达。与对照相比,siRNA1和siRNA2干扰LKB1的效率分别为48%(P<0.05)和52%(P<0.05);沉默LKB1显著降低颗粒细胞类固醇激素合成基因STAR (P<0.01)、CYP11A1 (P<0.01)和CYP19A1 (P<0.05)的表达,分别下调了约为对照组的60%、80%和50%。4) LKB1过表达腺病毒及对照组对颗粒细胞均具有高的感染效率,LKB1过表达效率高达10倍(P<0.01);过表达LKB1显著上调STAR (P<0.01)、CYP11A1(P<0.01)和CYP19A1 (P<0.05)的表达,进一步研究显示LKB1基因功能获得促进颗粒细胞雌二醇的分泌(P<0.05)。【结论】LKB1在卵泡颗粒细胞中高表达,促进类固醇激素生成基因STAR、CYP11A1和CYP19A1的表达和雌二醇的分泌。本研究将为LKB1调控牛颗粒细胞类固醇激素合成的功能提供直接的理论依据。

运动对肥胖状态下LKB1-AMPK-ACC信号传导通路的影响

肥胖已经成为危险人类健康的常见慢性疾病,而运动是目前公认的治疗肥胖最为有效的方法之一。AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)是一种比较重要的代谢性应激蛋白激酶,在全身的能量平衡中起着总开关的作用。LKB1可以活化细胞中的AMPK,AMPK使ACC(乙酰辅酶A羧化酶)磷酸化失活,脂肪酸合成减少、氧化分解增加,从而预防肥胖的发生发展。肥胖状态下,AMPK磷酸化水平降低,ACC活性增强,脂肪酸合成增加、氧化速率下降。而运动是改善肥胖的重要手段,可以使AMPK磷酸化增强,ACC活性减弱。主要阐述肥胖状态下LKB1-AMPK-ACC信号传导通路各级联蛋白的变化趋势,以及运动干预对各级联蛋白含量的影响。

LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体的制备及其应用

目的制备LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体,并以其检测细胞中LKB1的表达。方法用生物信息学方法选取LKB1Thr336位点附近10个氨基酸,且使Thr336位点磷酸化,并铰链到BSA上。以此为抗原免疫家兔,制备抗血清,纯化后通过ELISA法检测抗体效价,Westernblot法检测抗体特异性,并用LKB1抗体和p-LKB1(Thr336)抗体分别检测正常细胞及肿瘤细胞中LKB1的表达。结果纯化后的p-LKB1(Thr336)抗体效价为1∶1000;LKB1抗体不仅识别His-LKB1蛋白,而且识别p-LKB1(Thr336)抗原,而p-LKB1(Thr336)抗体仅识别p-LKB1(Thr336)抗原;在正常细胞HL7702和HEK293中,LKB1表达较多,而在HeLa细胞中,LKB1基本没有表达;在这3种细胞中,p-LKB1(Thr336)基本没有表达;在肿瘤细胞S180、COS-7和Caco2中,LKB1和p-LKB1(Thr336)均有表达,p-LKB1表达相对较多。结论已制备了特异性的p-LKB1(Thr336)多克隆抗体,LKB1-Thr336位点的磷酸化可能是某些肿瘤发生的特征,有望成为肿瘤诊断的指标之一。

LKB1和VEGFR_2评价肺腺癌预后的意义

目的探讨LKB1、VEGFR2在肺腺癌中的表达情况,分析其预后意义。方法应用免疫组化方法检测46例肺腺癌中LKB1、VEGFR2的表达情况。结果 LKB1在癌旁正常肺组织、淋巴结转移阴性组肺腺癌、Ⅰ～Ⅱ期肺腺癌中的表达阳性率明显高于肺腺癌组织、淋巴结转移阳性组肺腺癌和ⅢA期肺腺癌(82.61%vs 63.04%、75.00%vs 44.44%、75.00%vs35.71%),差异有统计学意义(P<0.05)。VEGFR2在癌旁正常肺组织、淋巴结转移阴性组肺腺癌、Ⅰ～Ⅱ期肺腺癌中的表达阳性率则明显低于肺腺癌组织、淋巴结转移阳性组肺腺癌和ⅢA期肺腺癌(34.78%vs 58.70%、46.43%vs 77.78%、46.88%vs85.71%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LKB1、VEGFR2在肺腺癌中的表达情况可能与肺腺癌患者的预后有关,LKB1低表达、VEGFR2高表达可能提示预后不良。

化痰消瘀方对胃癌前病变大鼠bcl-2、bax、mTOR及LKB1表达的影响

目的观察化痰消瘀方对胃癌前病变大鼠胃黏膜bcl-2、bax、mTOR、LKB1表达的影响。方法将100只大鼠随机分为正常组17只和造模组83只。正常组给予正常饮食,造模组采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常法造模。将造模成功大鼠随机分为模型组、化痰消瘀低剂量组、化痰消瘀中剂量组、化痰消瘀高剂量组和维霉素组。正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,各给药组分别给予相应药物灌胃,1次/d,连续12周。37周末处死所有大鼠,取胃窦及胃体组织,镜下观察各组大鼠胃黏膜组织病理变化,计算胃癌前病变发生率;免疫组化法检测胃黏膜组织中bcl-2、bax、mTOR、LKB1蛋白表达情况。结果模型组胃癌前病变发生率为84.6%,各给药组胃癌前病变发生率均明显低于模型组(P均<0.05)。模型组大鼠bcl-2、mTOR蛋白表达水平明显高于正常组(P均<0.05),bax、LKB1蛋白表达水平明显低于正常组(P均<0.05)。各给药组bcl-2、mTOR蛋白表达水平明显低于模型组(P均<0.05),且化痰消瘀方中高剂量组明显低于维霉素组(P均<0.05);各给药组bax、LKB1蛋白表达水平明显高于模型组(P均<0.05),但化痰消瘀方低、中、高剂量组与维霉素组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论化痰消瘀方可逆转胃癌前病变的发生,作用机制可能与其能下调bcl-2、mTOR蛋白的表达,上调bax、LKB1蛋白的表达有关。