硫酸软骨素对LLO诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1的影响

为研究李斯特菌溶血素(LLO)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)分泌NO、内皮素(ET-1)的影响,以及硫酸软骨素(CS)通过调节细胞微环境保护RIMVECs的作用,将体外培养的RIMVECs分为LLO+CS组、LLO组、CS组、空白组,经过MTT比色法测定细胞生长情况,硝酸还原酶法测定细胞上清液细胞因子NO含量以及酶联免疫法检测ET-1含量,并用原位杂交方法对结果进行验证。结果表明:LLO可抑制RIMVECs增殖活性,提高NO、ET-1分泌量且高于正常水平,并导致NO/ET-1比值失衡(下降);而CS可提高RIMVECs细胞的增殖活性,并显著上调NO/ET-1比值。由此可知,CS可通过改善LLO引起细胞因子NO和ET-1失衡而起到保护微血管内皮细胞的作用。

重组E.coli LLO/WT1诱导树突状细胞成熟并促进特异性抗肿瘤免疫

目的:观察重组疫苗E.coli LLO/WT1诱导人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟及其致敏的T细胞对WT1+肿瘤细胞的杀伤作用.方法:以E.coli为对照,采用E.coliLLO/WT1刺激健康人外周血树突状细胞后,流式细胞术分析DC的CD83,CD86和HLA-DR的表达,MTT法观察活化DC促进T细胞增殖和杀伤WT1+人胃癌细胞SGC-7901的效果,ELISA检测DC及DC和T细胞混合培养上清液内IL-12和IFN-γ的含量.结果:E.coliLLO/WT1较E.coli刺激的DC表达更高水平的CD83,CD86和HLA-DR,其阳性率分别为78.1%,83.4%,93.2%和65.8%,61.2%,75.8%;两组DC培养上清内IL-12的含量分别为(270.42±3.85)ng/L和(204.17±4.23)ng/L(P<0.05);E.coli LLO/WT1活化的DC较E.coli活化的DC更明显地促进了同源T细胞增殖,混合培养细胞上清液内IFN-γ的含量也更高,分别为(86.32±2.00)ng/L和(44.71±1.45)ng/L(P<0.05);活化的T细胞发挥了更强的溶解WT1+SGC-7901的作用,其杀伤率分别为68.44±3.78和36.76±2.63(P<0.05).结论:重组疫苗E.coliLLO/WT1有效地活化了人外周血树突状细胞,并促进了WT1+特异性抗肿瘤T细胞免疫.

LLO对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响

为探讨李斯特菌溶血素(LLO)导致大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)损伤的作用机制,将体外培养的RIMVECs分为对照组和LLO组,观察细胞形态变化,测定细胞生长情况,并检测细胞培养上清液中NO、ET-1浓度变化。结果表明:LLO组RIMVECs的细胞间隙变大,有大量细胞碎片漂浮;当LLO浓度达到50ng/m L以上时,测得细胞增殖(OD值)均呈极显著下降(P<0.01);12 h内,NO、ET-1分泌量高于正常水平。试验表明,LLO引起RIMVECs细胞因子NO、ET-1分泌量升高,导致细胞微环境紊乱,是LLO导致肠黏膜微血管内皮细胞损伤的机制之一。

面向连接的LLO型分层协议网的性能评价

在单数据单元确认的条件下,考虑纠错再送,且扩展窗口宽度w=2。对虚拟连接LLO型分层协议网络进行性能分析,得到了数据单元传输总时延的表达式,然后对数据单元的传送总时延进行了模拟试验及分析。实验结果表明w=2、数据单元在数十字节时,网络传输效率明显得到了改善。

丹皮酚对LLO诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1的影响

为了研究李斯特菌溶血素(LLO)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)分泌一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的影响,阐释作为治疗李斯特菌病方剂中单味中药丹皮的有效成分丹皮酚(Pae)调节LLO诱导细胞分泌紊乱的作用机理。试验将培养的RIMVECs分为LLO+Pae组、LLO组、Pae组、空白组,通过MTT比色法测定细胞生长情况;硝酸还原酶法测定细胞上清液细胞因子NO浓度以及酶联免疫法检测ET-1浓度;并用原位杂交方法对结果进行验证;结果显示LLO组与其他各组相比:细胞增殖显著性下降;12小时内,NO、ET-1分泌量高于正常水平,并导致NO/ET-1比值失衡(下降);而LLO+Pae组NO/ET-1的比值显著上调;由此可见,Pae可以通过改善LLO引起细胞因子NO、ET-1失衡,有效调节细胞微环境,部分解释了中药丹皮治疗李斯特菌病的作用机理。

单增李斯特菌溶血素(LLO)的原核表达及其生物学活性鉴定

利用生物软件设计单增李斯特菌溶血素蛋白的基因hly的引物,通过PCR扩增hly基因,并将其克隆至PET28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21进行优化表达。用镍柱纯化表达产物LLO,通过免疫印记鉴定其免疫原性,并通过溶血实验鉴定其溶血活性。琼脂糖凝胶电泳结果表明PCR扩增出1 590 bp的片段,经测序鉴定其序列同源性可达99%。SDS-PAGE结果表明诱导表达的产物大小约为58 kD,其最优化的表达条件是28°C下用0.1 mmol/L IPTG诱导6 h。Western blotting结果表明重组表达的LLO具有免疫原性;溶血实验表明重组表达的LLO具有较强的溶血活性,其溶血效价可达1:1 024。这为制备针对单增李斯特菌的单克隆抗体及其检测方法的建立奠定了基础。

Co_(41)Ni_(32)Al_(27-x)Si_x合金的马氏体相变和磁性转变

利用金相显微组织分析技术、示差扫描量热法(DSC)和振动磁力计(VSM),考察了Co41Ni32Al27-xSix合金中Si元素含量x对马氏体相变和铁磁性转变的影响,用X射线衍射方法分析马氏体相的结构类型.增加x能够显著提高合金的马氏体相变温度,并且同时提高铁磁性转变Curie点;在x≤5的范围内,x增加1可以造成马氏体相变温度提高50-60 K,同时Curie点提高大约10 K;马氏体相的晶体结构仍然是L10型有序结构,但是随着x的增加,单胞体积减小.讨论了马氏体相变温度和Curie点同时提高的原因.

户内变电站热湿传递机理及气流组织分析

通过采用现场实测与数值模拟相结合的方法,构建“电气设备负荷-设备温湿度-室内环境参数-室外气象参数”的数值分析模型,本文揭示了江苏地区采用标准化方案建设的110kV模块变电站内部实际热湿环境问题现状和产生机理,确定了多因素影响下内部环境热湿传递过程规律及气流组织分布。结果表明中午12时至下午18时由设备损耗发热导致室内温度具有明显滞后现象,电容器、主变压器损耗发热量周期分别为48h和24h,与损耗发热量变化对应的室内温差分别为3.6℃和5.8℃;研究发现露点温度范围在(23.0~26.0)℃,温度控制阈值应高于露点温度以避免设备凝露;自然通风形式下热羽流现象导致设备上方空间存在积热区,同侧下进上出的通风形式导致气流短路现象。

单增李斯特菌Hly基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为获得单增李斯特菌溶血素(Listeriolysiono,LLO)蛋白及其多克隆抗体。根据单增李斯特菌溶血素蛋白的基因Hly序列设计了一对特异性引物,扩增出Hly基因,克隆入原核表达载体p ET-32a,并转化于大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的作用下重组LLO蛋白成功表达。SDS-PAGE结果表明重组蛋白分子量约为69.3 ku,且主要以包涵体形式表达LLO蛋白。将重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗LLO抗体。Western-blot检测到一条约69.3 ku的特异性条带,表明该抗体具有较强的特异性。单增李斯特菌溶血素基因Hly在大肠杆菌中已成功表达,且制备的多克隆抗体可用于LLO蛋白的检测。

激光剥离GaN表面的抛光技术

激光剥离(LLO)技术是研制新型氮化镓(GaN)基谐振腔结构光电子器件的关键技术。然而LLO后的GaN表面往往具有较大的粗糙度,而制作谐振腔结构器件需要很高的表面平整度,因此需要对LLO后的GaN表面进行抛光。分别采用金刚石粉抛光液和胶粒二氧化硅抛光液进行机械抛光和化学机械抛光(CMP),并对比了两种方法获得的抛光结果,研究发现前者会在抛光后的GaN表面引入划痕,而采用后者可以得到亚纳米级平整度的表面。进一步的实验结果表明,胶粒二氧化硅抛光液同样适用于图形化衬底外延片激光剥离后的GaN表面抛光。

重组产单核细胞李斯特菌溶血素的应用研究

李氏杆菌溶血素（Listeriolysin,LLO）是产单核细胞李斯特菌的主要毒力因子,为探索LLO的免疫保护性和作为诊断抗原的可行性,本研究用重组LLO抗原和单核细胞增多性李氏杆菌（Listeria monocytogenes,LM）全菌分别免疫BALB/c小鼠和家兔,定期采血,ELISA检测抗LLO的抗体水平,并分别对免疫和对照动物攻毒致死剂量的LM,分析重组LLO抗原的免疫保护性。结果表明,小鼠和家兔在二免后10-20 d内LLO的抗体即可达到峰值,而且免疫动物能有效抵抗LM的感染。因此,重组LLO不仅可以用作动物LM的诊断抗原,而且具有作为基因工程疫苗的潜力。

产单核细胞李斯特菌溶血素的纯化

本文旨在探讨产单核细胞李斯特菌溶血素(LLO)的纯化方法。将产单核细胞李斯特菌(LM)接种于BHI液体培养基中培养,得到含LLO的培养液上清(LLO1),再经70%饱和硫酸铵沉淀、透析,得到溶血素粗提物(LLO2),LLO2经凝胶过滤层析,聚乙二醇浓缩,得到活性峰收集液(LLO3)。通过以上三步的纯化,溶血素的比活提高160倍,纯化蛋白在SDS-PAGE中呈现一条带,达电泳级纯度。

产单核细胞李斯特菌溶血素O基因在大肠杆菌中的优化表达及ELISA检测方法的建立

在克隆产单核细胞李斯特菌(LMO)hlyA基因并构建其原核表达载体的基础上,进一步对IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等影响目的蛋白表达的重要条件进行了优化。根据确定的最佳诱导条件,使目的蛋白获得了高效表达。对表达的李斯特菌溶血素O(LLO)进行了纯化,以其作为靶抗原,采用间接ELISA方法检测了动物血清中的特异性LLO抗体。结果表明,用表达产物作为靶抗原可对LMO感染动物进行初步诊断,为建立基于LLO的动物李斯特菌病血清学诊断技术奠定了基础。

单增李斯特菌溶血素O的功能研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm,简称单增李斯特菌)是一种普遍存在的革兰阳性食源性病原体,可引起人类和一些动物的李斯特菌病。侵袭性李斯特菌病通常很严重,临床上表现为自然流产、败血症和脑膜脑炎,也可表现为发热性胃肠炎综合症。成孔蛋白单增李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO,由hly基因编码)是一种重要的毒力因子,属于胆固醇依赖性细胞溶解素(cholesterol-dependent cytolysins,CDC)毒素,其通过膜穿孔机制介导Lm从吞噬体逃逸并引起李斯特菌病。最近的研究表明LLO除了主要的膜穿孔作用,还存在其他功能,在Lm感染过程中扮演了重要的角色。从LLO的功能和作用机制等方面综述了近些年对该毒素的研究进展,以便更好地理解单增李斯特菌的感染机制,为防治李斯特病的相关研究提供参考。

基于重组李氏杆菌溶血素的阻断ELISA检测病原菌的研究

为建立利用重组李氏杆菌溶血素(LLO)检测单核细胞增生李氏杆菌的ELISA方法,试验首先优化了重组李氏杆菌溶血素的表达条件,获得纯度较高的包涵体之后,用亲和层析法纯化重组李氏杆菌溶血素蛋白,并用纯化蛋白免疫试验兔获得诊断抗体,然后建立阻断ELISA检测单核细胞增生李氏杆菌的方法,并分析最低检测菌数。结果表明:在振摇培养条件下,当IPTG浓度为0.6 mmol/L、诱导温度为37℃、菌液OD600值为0.25时开始诱导,诱导时间为150 m in,重组李氏杆菌溶血素的表达量最大;纯化蛋白浓度为480μg/mL,具有免疫活性。说明建立的检测方法特异性好,最低检测菌数为4.8×106个/mL。提示利用重组李氏杆菌溶血素检测单核细胞增生李氏杆菌的ELISA方法是可行的,具有潜在的应用价值。

刘翔110m栏的比赛特征与竞技状态优化研究

对刘翔2005年、2006年和2007年(截止8月31日)110m栏的比赛特征进行了分析、研究,结合其近几年身体机能变化和比赛规律,对其竞技状态优化进行了探讨,并提出了相应的建议。

非保向力作用下起重机吊臂起升平面外整体稳定特征方程及应用

研究了起重机吊臂在端部牵索非保向力作用下起升平面外整体屈曲临界力的计算方法，给出通用的屈曲特征方程及实用算式。

现代运动训练新理念——以刘翔的110m栏训练为例

以刘翔的110m栏训练为例,从专项训练过程的可控性角度谈训练周期,从生物适应现象角度谈训练负荷认识上的变化,从专项训练过程的可控性谈高效率的全面训练,从认识论角度分析练习的次序,探讨现代运动训练新理念。

巴尔加斯·略萨:一只啄食腐肉的“兀鹫”

巴尔加斯·略萨获得2010年度诺贝尔文学奖对人们重新聚焦拉美文学具有重要的意义。略萨以文学介入生活、介入政治,具有小说家与政治家的双重文化身份。他如一只啄食社会腐肉的兀鹫,用文学对抗社会黑暗、腐朽的独裁政治。在对拉美社会权力结构精细的描绘中,他以虚构小说的方式将理想与现实两个世界对举连通;从而在立体的艺术世界中,扫荡着现实社会生活的荒谬,呼唤人类的尊严。