腺病毒LMP-3表达载体转染骨髓基质干细胞后BMP-2、OSX表达研究

目的探讨骨矿化蛋白LMP-3促进骨形成及骨修复重建的分子机制。方法通过腺病毒LMP-3表达载体转染骨髓间充质干细胞,RT-PCR法检测LMP-3、BMP-2、OSX表达变化,检测相关因子表达情况。结果腺病毒LMP-3表达载体转染骨髓基质干细胞,发现BMP-2 m RNA、OSX m RNA的表达增高,促进骨形成。结论 LMP-3作用机制是通过上调BMP、OSX等骨诱导因子的基因表达,促进成骨细胞分化成熟,从而促进骨形成,LMP在骨形成研究方面具有一定潜力。

LMP-1与LMP-3真核双表达质粒的构建及体外表达

目的:构建真核双表达质粒pBudCE4.1-LMP-1-LMP-3,并检测其在体外的表达。方法:采用人工设计合成人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)和LIM矿化蛋白-3(LIM mineralization protein-3,LMP-3)基因片段,分别连接于中介质粒Puc57,经酶切、测序鉴定后,LMP-1和pBudCE4.1先连接,经酶切鉴定,再连接LMP-3,重组双表达质粒行酶切、测序鉴定。用脂质体包裹转染骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),按转染情况分为5组:未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染LMP-1基因组(C组)、转染LMP-3基因组(D组)、转染LMP-1和LMP-3双基因组(E组)。采用RT-PCR和Western blot检测LMP-1和LMP-3的表达。结果:酶切及测序证实质粒Puc57-LMP-1、Puc57-LMP-3及其pBudCE4.1-LMP-1-LMP-3真核双表达质粒构建成功。该双表达质粒在体外转染骨髓MSCs后可表达LMP-1和LMP-3分子。对RT-PCR及Western blot检测结果行灰度值测量显示:LMP-1 mRNA及蛋白水平的表达,A、B组与C、D、E组间差异有统计学意义(P<0.05),C组与E组差异无统计学意义(P>0.05);LMP-3 mRNA及蛋白水平的表达,A、B组与C、D、E组间差异有统计学意义(P<0.001),D组与E组差异有统计学意义(P<0.05),C组及D组在LMP-1及LMP-3的表达上的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建真核双表达质粒pBudCE4.1-LMP-1-LMP-3,证实转染的骨髓MSCs能在体外同时表达LMP-1和-LMP-3分子。