沉默CD147对前列腺癌LNCaP细胞糖酵解的影响

目的:探讨CD147对前列腺癌(PCa)LNCaP细胞糖酵解的影响,为PCa临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点。方法:采用慢病毒感染系统建立沉默CD147的细胞作为LNCaP/shCD147组,同时设立阴性对照组(LNCaP/scramble组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组LNCaP细胞中CD147 mRNA表达水平,试剂盒检测2组LNCaP细胞中乳酸(LA)、丙酮酸(PA)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度及2组LNCaP细胞中丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)和己糖激酶(HK)酶活性,Western blotting法检测2组LNCaP细胞中CD147、HK2、肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)和丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白表达水平。结果:与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中CD147 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),表明成功构建沉默CD147的PCa LNCaP细胞模型。与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中LA、PA和ATP浓度明显降低(P<0.05或P<0.01)。与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中PK、PFK1和HK酶活性明显降低(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中HK2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:沉默CD147通过调节糖酵解代谢产物、限速酶活性和相关蛋白表达水平抑制LNCaP细胞糖酵解过程。

恩杂鲁胺对前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响及其机制研究

探讨雄激素受体抑制剂恩杂鲁胺对人前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响。使用CCK8实验检测LNCaP细胞对恩杂鲁胺的IC50,将加入等体积DMSO的LNCaP细胞定义为对照组,LNCaP细胞以IC50浓度的恩杂鲁胺慢性处理1个月设为实验组。β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老;克隆形成实验检测细胞增殖;蛋白免疫印记实验检测雄激素受体,衰老标志蛋白的表达情况和信号转导机制。结果显示LNCaP细胞在1 μM (IC50)剂量恩杂鲁胺慢性暴露后,雄激素受体被抑制,细胞发生衰老,表现为β-半乳糖苷酶染色增多,衰老标记蛋白p16,p21表达上调。通过对信号转导研究发现,实验组中YAP1磷酸化水平降低,入核增多,YAP1可能是恩杂鲁胺致LNCaP细胞衰老的关键信号。

靶向TRPV6的siRNA对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的体外研究

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术阻断前列腺癌LNCaP细胞中瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚家族6(TRPV6)基因的表达,探讨TRPV6基因沉默对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:针对TR-PV6基因,构建2条小干扰RNA(siRNA)序列;在脂质体介导下转染前列腺癌LNCaP细胞,用RT-PCR测定TRPV6mRNA的表达;MTT法和流式细胞技术测定siRNA对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:两条siRNA序列均能有效地阻断LNCaP细胞中TRPV6基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),且mRNA表达随着转染时间的延长而减少,转染72h后TRPV6mRNA的表达减少至对照组的27%和23%;siRNA转染能显著抑制LNCaP细胞增殖,转染48h细胞增殖抑制率最高,分别为34.53%和29.32%,与转染24h和72h比较有统计学意义(P<0.05);转染48h后,siRNA转染组G0～G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少,与空白对照组及阴性对照组相比有统计学差异(P<0.01);siRNA转染组细胞的凋亡率分别为14.45%和12.73%,显著高于空白对照组及阴性对照组3.78%和5.22%(P<0.05)。结论:针对TRPV6的siRNA在体外能有效地抑制LNCaP细胞TRPV6mRNA的转录,同时能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加。

下调基因PTTG1表达对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨下调垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)表达对雄激素非依赖性前列腺癌LNCa P-AI细胞增殖、侵袭、凋亡,以及对雄激素拮抗剂敏感性的影响。方法:LNCa P-AI细胞转染靶向PTTG1基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测PTTG1、p-Akt、p-ERK等蛋白表达水平,琼脂糖凝胶电泳法检测PTTG1 mRNA表达水平。结果:siRNA有效抑制了PTTG1的表达;下调PTTG1表达有效抑制了LNCa P-AI细胞在去雄激素培养液中的增殖,24、48、72 h抑制率分别为(19.47±2.12)%、(24.01±2.13)%、(48.02±2.22)%,组间比较有显著性差异(P<0.05);降低其侵袭力,Transwell试验显示,对照组、转染24、48、72 h后穿过聚碳酸酯膜细胞个数分别为111.11±13.47、74.67±9.85、56.44±8.66、37.33±6.14,组间比较有显著性差异(P<0.01);siRNA-PTTG1转染LNCa P-AI细胞后,空白对照组、转染24、48、72 h后凋亡率分别为(2.17±0.49)%、(18.32±0.94)%、(19.94±1.30)%、(21.73±1.88)%,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。siRNA联合氟他胺组对LNCa P-AI增殖的抑制作用和促凋亡作用显著强于siRNA或者氟他胺组,并呈氟他胺浓度相关性;50 nmol/L氟他胺、siRNA联合50 nmol/L氟他胺对LNCa P-AI的抑制率分别为(27.13±3.52)%、(67.51±5.13)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05);凋亡率分别为(3.94±0.48)%、(19.93±1.72)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05);100 nmol/L氟他胺、siRNA联合100 nmol/L氟他胺的抑制率分别为(43.72±3.90)%、(73.19±4.78)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05);凋亡率分别为(5.33±0.66)%、(23.43±1.76)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论:siRNA下调PTTG1表达能够抑制LNCa P-AI的增殖和侵袭,促进凋亡,提高了LNCa P-AI细胞对雄激素拮抗剂氟他胺的敏感性,抑制PTTG1表达可能会强化雄激素剥夺治疗晚期前列腺癌的作用。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立

目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI。方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适应无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系。MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平。结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系。LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%。结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程。

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的探讨复方中药紫龙金 (简称紫龙金 )对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用机制。方法应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响 ,应用RT PCR方法检测前列腺特异性抗原基因 (PSA)和雄激素受体 (AR) ,凋亡相关基因bcl 2和bax蛋白表达的影响 ;应用Westernblot方法测定对bcl 2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G0 /G1期阻滞和诱导凋亡作用 ,作用 72h时IC50 为 0 .79mg/ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl 2的表达 ,降低bcl 2蛋白表达 ,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0 /G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl 2基因表达 ,降低bcl 2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。

依立雄胺对前列腺癌细胞(LNCaP)前列腺特异性抗原和Bcl-2蛋白体外表达的抑制作用

目的 为研究依立雄胺治疗前列腺癌的可能性及可能机制 ,探讨依立雄胺体外对人激素依赖型前列腺癌细胞 (LNCaP)生长及前列腺特异性抗原(PSA)与Bcl 2蛋白表达的作用。方法 用 5 ,15和4 5 μmol·L- 1的依立雄胺作用LNCaP细胞 3d或 7d后 ,相差显微镜进行细胞形态学观察 ;台盼蓝染色活细胞计数 ,绘制 7d的生长曲线 ;应用流式细胞仪分析依立雄胺对LNCaP细胞凋亡的影响 ;应用免疫组化ABC比较经依立雄胺作用后LNCaP细胞PSA与Bcl 2蛋白的表达强度。结果 4 5 μmol·L- 1的依立雄胺作用LNCaP细胞 3d后 ,可使其明显的皱缩脱壁 ,部分细胞膜破裂。在 5 ,15和 4 5 μmol·L- 1的依立雄胺作用 7d后 ,可明显抑制LNCaP细胞的生长 ,抑制率分别达 4 0 .0 % ,4 7.4 %和 5 4 .3% ;流式细胞仪分析显示上述浓度的依立雄胺可诱导细胞凋亡 ,凋亡率分别为 3.5 % ,15 .8%和 2 5 .0 % ,而对照组为2 .2 % ;免疫组化分析表明依立雄胺可降低LNCaP细胞PSA和Bcl 2蛋白的表达。结论 在上述浓度下依立雄胺可特异性的抑制LNCaP细胞的生长和PSA与Bcl

灵芝酮三醇对人前列腺癌细胞LNCaP生长的影响及其对5α-还原酶的抑制作用

本文用四唑盐(MTT)比色法和酶联免疫(ELISA)法研究了灵芝酮三醇对雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和分泌前列腺特异性抗原(PSA)的抑制作用,另外还运用高效液相色谱法研究了灵芝酮三醇对5α-还原酶的抑制作用。结果显示,灵芝酮三醇对LNCaP细胞的增殖和分泌PSA的作用均呈现浓度依赖性抑制。另外,灵芝酮三醇对5α-还原酶的抑制作用也呈现浓度依赖性,作用浓度为2.5 mM时,其对5α-还原酶的抑制率为51.88%。结果表明灵芝酮三醇对LNCaP的抑制用既与其细胞毒性有关也与其对雄激素的抑制作用有关。

姜黄素对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响

目的:姜黄素对前列腺癌细胞株LNCap增殖和凋亡的影响。方法:用不同剂量的姜黄素分别处理LNCap细胞,显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;然后检测姜黄素处理LNCap细胞后培养液中总前列腺特异抗原(PSA)的变化,并用免疫印迹W estern b lotting技术检测雄激素受体(AR)的表达。结果:姜黄素能够抑制前列腺癌细胞LNCap的增殖和生长,40μmol/L作用24 h最强,细胞存活率为对照的40%;姜黄素诱导LNCap细胞凋亡,细胞形态呈凋亡特征,且40μmol/L作用最强,凋亡率为9.23%;姜黄素抑制LNCap细胞PSA表达,且40μmol/L姜黄素处理细胞24 h对PSA表达的抑制作用最强,PSA含量仅为对照的20%;W estern b lotting检测结果显示姜黄素抑制AR的表达,并且对AR表达的抑制程度依赖于姜黄素的浓度。结论:姜黄素抑制LNCap细胞增殖,诱导细胞凋亡,且表现出时间和剂量依赖性。姜黄素抑制LNCap细胞PSA与AR受体的表达。

激素递减法成功建立雄激素非依赖性LNCaP细胞亚系

目的:利用激素递减法对LNCaP细胞进行去雄环境培养,建立雄激素非依赖的LNCaP细胞(LNCaP-AI)亚系并予以鉴定。方法:利用活性炭处理的血清培养模拟去雄细胞环境,逐步递减培养基中激素10d,后完全在非雄培养,共连续培养3个月,直到LNCaP细胞重新进入快速生长期,利用CCK-8法、放免法、RT-PCR法分别测定细胞生长曲线、PSA及雄激素(AR)表达情况。结果:LNCaP细胞在激素递减后,生长缓慢,呈神经内分泌样改变和成簇生长,经过共3个月的连续非雄培养,细胞重新恢复以前的形态及生长。CCK-8测定提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中生长,放免法提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中恢复分泌PSA功能,RT-PCR方法提示LNCaP-AI细胞显著高表达AR。结论:激素递减方法可以3个月左右有效地建立雄激素非依赖的LNCaP细胞亚系。

二甲双胍抑制IL-6诱导的LNCaP增殖及上皮-间质转化

目的初步探讨二甲双胍抑制前列腺癌发展的作用。方法使用慢病毒感染构建IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6(IL-6过表达病毒转染)和LNCaP-ctr(空病毒转染),运用激光共聚焦扫描确定转染效果,ELISA检测LNCaP、LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr细胞IL-6分泌水平,倒置显微镜观察细胞形态。实验分为LNCaP-ctr组、LNCaP-IL-6组、LNCaP-ctr+二甲双胍组和LNCaP-IL-6+二甲双胍组,MTT技术检测相对细胞数量,流式细胞技术检测二甲双胍对细胞周期的影响。实验分为LNCaP-IL-6和LNCaP-IL-6+二甲双胍组,运用细胞迁移实验检测两组细胞迁移速度,Western blot技术检测两组细胞TWIST和E-Cadherin表达水平。结果激光共聚焦扫描和ELISA检测证明IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6构建成功,LNCaP-IL-6细胞IL-6分泌水平约为LNCaP-ctr的5 000倍。MTT实验显示第5天LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.4倍,处理组的LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.6倍;流式细胞仪检测显示二甲双胍阻滞LNCaP的细胞周期为S期。细胞形态学观察和Western blot检测证实IL-6诱导LNCaP发生上皮-间质转化,细胞迁移实验显示二甲双胍可抑制LNCaP-IL-6细胞的迁移,Western blot进一步证实二甲双胍降低LNCaP-IL-6 TWIST表达及升高E-Cadherin表达。结论二甲双胍能够抑制IL-6诱导的LNCaP细胞的上皮-间质转化。

黄精凝集素PCL-2诱导人前列腺癌LNCap细胞凋亡及机制研究

研究黄精凝集素PCL-2对人前列腺癌LNCap细胞生物活性和可能的抗肿瘤机制。从黄精药材中提取分离得到黄精凝集素PCL-2,体外培养LNCap细胞,采用WST-1和集落形成实验评价PCL-2对LNCap细胞的增殖作用;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测LNCap细胞内ROS含量;qRT-PCR和Western blot法检测PCL-2对LNCap细胞中相关基因和蛋白表达的影响。研究结果显示PCL-2能显著抑制LNCap细胞的增殖,促进细胞中ROS生成;PCL-2通过上调LNCap细胞中Bax、Caspase-3及Caspase-9基因mRNA和蛋白表达并下调Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平诱导LNCap细胞凋亡。本研究结果表明PCL-2诱导LNCap细胞凋亡活性作用显著,可作为抑制前列腺癌的潜在药物。

高压氧对人前列腺癌LNCaP细胞株小鼠荷瘤模型作用的研究

目的:评估应用高压氧治疗前列腺癌放疗后出血性膀胱炎的安全性,探讨高压氧对体内前列腺癌细胞生长的影响。方法:采用人前列腺癌LNCaP细胞株皮下接种构建小鼠荷瘤模型(n=30),随机分为对照组(n=15)和实验组(n=15)。对照组常压常氧条件下饲养,实验组每周进行5次0.2MPa高压氧暴露,共计20次。连续观察4周两组移植瘤生长体积的变化,应用免疫组化法比较两组瘤体组织相关病理学特征指标:瘤体微血管密度(CD34)、瘤细胞增殖(Ki-67蛋白)以及瘤细胞凋亡(p53、p27蛋白)。结果:肿瘤接种后第28天,对照组移植瘤体积为(122.0±8.2)mm3,实验组为(120.0±7.9)mm3,两组差异无显著性(P>0.05);对照组移植瘤CD34及Ki-67、p53、p27蛋白表达的阳性细胞率分别为(36.2±4.9)%、(75.3±8.4)%、(44.2±5.7)%、(61.5±5.5)%,实验组分别为(39.3±5.2)%、(78.1±7.6)%、(40.4±6.2)%、(63.7±5.1)%,病理学特征均无显著性差异(P>0.05)。结论:高压氧对小鼠荷瘤模型前列腺癌细胞生长无促进作用,对前列腺癌中新生血管也无明显影响。

SCID小鼠原位接种LNCaP前列腺癌模型的建立

通过在SCID小鼠前列腺内接种LNCaP前列腺癌细胞建立了原位接种模型并探讨其应用价值。用微量注射器在SCID小鼠的前列腺左右背外侧叶包膜下接种小鼠前列腺癌LNCaP细胞106个建立原位移植瘤模型,以皮下移植瘤模型作为对照比较两者的生存期、肿瘤转移发生情况,并在电镜下观察LNCaP前列腺肿瘤细胞和小鼠正常前列腺组织细胞的特征。结果发现原位模型组小鼠平均生存时间为(21±2.1)d较对照组(35.0±4.5)d明显缩短,差异非常显著(P<0.01);原位模型组小鼠全部发生肿瘤转移,其中盆腔淋巴和肺的转移发生率分别为100%(15/15)、60%(9/15);电镜观察发现SCID小鼠的正常前列腺细胞与癌变后的细胞体积及细胞器均有很大差异。SCID小鼠的前列腺癌原位移植瘤模型较好地模拟了人癌体内的自然生长状况,为进行前列腺癌的研究提供有用的工具。

多肽K237与前列腺癌细胞系LNcap的亲和性

目的:研究多肽K237与前列腺癌细胞系LNcap的亲和性。方法:采用免疫组化染色和RT-PCR,检测与K237结合的VEGF受体KDR的表达;用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察多肽K237与前列腺癌细胞系LNcap的结合能力。结果:前列腺癌细胞系LNcap中有KDR的表达;流式结果显示:多肽K237以浓度依赖性与LNcap细胞结合。激光共聚焦显微镜可观察到,多肽K237结合在LNcap细胞的胞浆和胞膜中。结论:多肽K237对前列腺癌细胞系LNcap具有较高的亲和性,为利用多肽K237通过抑制自分泌途径从而抑制前列腺癌细胞的增殖提供了基础,为肿瘤的治疗提供了新的方法。

环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡作用及对PCA3基因表达的影响

目的:探讨环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的作用及对PCA3基因表达的影响。方法:不同浓度环巴胺(1、5、10、15μmol/L)干预LNCaP细胞,以只加入RPMI 1640培养液为空白对照组,分别在不同作用时间(24、48、72h),用MTT法检测其对细胞增殖的抑制、流式细胞术观察细胞凋亡率变化、Hoechst染色观察凋亡细胞形态变化、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)观察对PCA3基因表达的影响。结果:5、10、15μmol/L环巴胺对LNCaP细胞增殖均有显著抑制作用,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01),10μmol/L组于48h达到半数抑制量(IC50);10、15μmol/L组24、48、72hLNCaP细胞的凋亡率分别为37.21%、57.38%、57.98%和21.16%、71.31%、72.90%,与空白对照组相比差异均有显著性(P<0.01)。随着环巴胺浓度增大和作用时间的延长,LNCaP细胞凋亡显著增加。PCA3基因的表达随着环巴胺浓度的上升呈现明显的递减趋势,较空白对照组显著降低(P<0.01)。浓度为10μmol/L时,不同作用时间PCA3基因的表达均极低。结论:环巴胺浓度为10、15μmol/L作用48、72h时能够明显抑制LNCaP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并显著下调LNCaP细胞PCA3基因的表达。

比卡鲁胺联合环王巴明对人前列腺癌细胞LNCaP增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨比卡鲁胺联合环王巴明治疗前列腺癌的可行性及机制。方法用不同浓度比卡鲁胺、环王巴明及二者联合处理前列腺癌细胞LNCaP,MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹技术检测有活性Caspase-3的表达。结果比卡鲁胺、环王巴明随各自浓度增加,LNCaP细胞抑制率均逐渐增加,且呈时间和剂量依赖性,分别于50、5μmol/L浓度达到IC50。50μmol/L比卡鲁胺、5μmol/L环王巴明及二者联合处理48 h后细胞凋亡率分别为21.65%±3.05%、40.42%±5.43%、57.49%±5.95%,两两比较,P均<0.01。比卡鲁胺联合环王巴明后有活性Caspase-3蛋白表达明显增多。结论比卡鲁胺与环王巴明联合存在协同作用,可抑制LNCaP细胞增殖,诱导凋亡;其作用可能通过Caspase-3介导。

维生素E琥珀酸酯对顺铂抑制LNCaP细胞PSA分泌和诱导细胞凋亡的影响

[目的]从细胞水平研究维生素E琥珀酸酯(VES)对顺铂(CP)引起的前列腺癌(LNCaP)细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并分析其对前列腺特异性抗原(PSA)表达的影响。[方法]VES、CP及二者联合分别作用LNCaP 24h或48 h,采用MTT法测定其对细胞生长的抑制作用,用荧光染色和透射电镜等形态学方法检测细胞凋亡,并用酶免疫法检测前列腺癌细胞特异性抗原(PSA)的表达情况。[结果]CP、VES和二者合用的IC50分别为1.92 mg.L-1、16.7 mg.L-1和1.02 mg.L-1;CP 4 mg.L-1、VES 25 mg.L-1和二者合用的凋亡率分别为37.2%、57.4%和77.8%;VES可以加强CP抑制LNCaP细胞分泌PSA的作用。[结论]VES可增强CP抗LNCaP细胞的作用。

野生型KLF6对前列腺癌LNCaP细胞的作用

目的:探讨野生型抑癌基因KLF6对前列腺癌LN-CaP细胞的生长增殖、细胞周期和侵袭转移能力的影响及其可能的作用机制.方法:利用RT-PCR法克隆目的基因KLF6,并将含KLF6的pEGFP-C1质粒转染入LNCaP细胞.分为转染组和对照组分别进行MTT法观察LNCaP细胞的生长抑制率,流式细胞仪观察细胞周期比例变化和凋亡率,细胞爬片划痕法观察LNCaP细胞的侵袭转移能力变化.结果:转染了野生型抑癌基因KLF6的前列腺癌LNCaP细胞生长抑制率为(31.9±4.7)%,对照组为0%,差异有统计学意义(P<0.01),细胞周期比例表现为G2/M期减少,G0/G1期比例增加为(75.0±8.8)%,对照组为(55.9±7.1)%,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡峰为(29.3±3.7)%,对照组为(8.6±0.9)%,差异有统计学意义(P<0.01);每毫米划痕区内迁移入的细胞数为102.8±15.4,对照组为(192.7±25.2),差异有统计学意义(P<0.05).结论:野生型抑癌基因KLF6的转染可以明显抑制前列腺癌LNCaP细胞的生长增殖,并诱导其调亡,使其侵袭转移能力下降,其机制可能与野生型抑癌基因KLF6部分地逆转LNCaP细胞的恶性表型有关.

双氢睾酮对LNCaP细胞系Smad3和Smad4转录及表达的影响

目的:探讨双氢睾酮(DHT)对前列腺癌细胞系LNCaP中转化生长因子β(TGFβ)信号通路的下游信号蛋白Smad3、Smad4的基因转录及表达是否有影响,氟他胺对这些影响有无拮抗作用。方法:用含不同浓度DHT(2、10、50nmol/L)和氟他胺(100nmol/L)的RPMI1640培养液培养LNCaP细胞株。RTPCR检测LNCaP细胞中Smad3、Smad4mRNA水平,Western印迹法检测Smad3、Smad4蛋白表达情况。结果:与不含DHT和氟他胺的对照组比较,10、50nmol/LDHT明显增强LNCaP细胞中Smad3mRNA的表达(P<0.05),不同浓度的DHT均使Smad3蛋白的表达增高(P<0.05),氟他胺明显抑制DHT的这种增强作用(P<0.05);10nmol/L浓度的DHT对Smad4mRNA的转录有明显的抑制作用(P<0.05),这种抑制作用受氟他胺的抑制,不同浓度的DHT均可以使Smad4蛋白的表达下降,而且下降程度要比Smad4mRNA下降更为明显(P<0.05),氟他胺能够减轻这种抑制作用。结论:DHT能够增强Smad3mRNA的转录和表达,而对Smad4mRNA的转录和表达有抑制作用,氟他胺可以不同程度地抑制DHT的这些作用。雄激素受体(AR)信号通路和TGFβ信号通路可能在Smads水平上存在交联。