LOXL4基因对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其预后价值

目的探讨类赖氨酰氧化酶4(lysyl oxidase-like 4,LOXL4)基因表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其预后价值。方法利用在线工具基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)两个独立的数据集(GSE14407和GSE18520)检索LOXL4基因在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的差异表达,并通过单因素、多因素Cox回归分析进一步分析LOXL4是否是影响患者生存的预后指标。使用GEO与癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据评估LOXL4基因在卵巢癌中的预后价值。采用慢病毒将含有针对LOXL4基因干扰片段和无意片段的质粒分别转染SKOV-3细胞,分别命名为sh-LOXL4组和sh-NC组。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。将上述两组细胞分别接种至裸鼠皮下成瘤,观察LOXL4对体内肿瘤生长的影响。结果在GSE14407和GSE18520中,LOXL4基因在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织(P<0.05)。单因素、多因素Cox回归分析结果提示,LOXL4表达上调是卵巢癌的独立预后因素(P<0.05)。GEO与TCGA数据生存分析提示,LOXL4基因高表达的患者总生存率更低(P<0.05)。细胞增殖实验和平板克隆形成实验均表明,与sh-NC组比较,sh-LOXL4组卵巢癌SKOV-3细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。细胞迁移和侵袭实验均表明,与sh-NC组比较,sh-LOXL4组SKOV-3细胞的迁移能力和侵袭能力明显减弱(P<0.05)。裸鼠成瘤实验表明,与sh-NC组比较,sh-LOXL4组移植瘤体积和质量明显减少(P<0.05)。结论LOXL4基因在卵巢癌组织中高表达,其可能通过促进卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭等生物学行为影响患者预后。

LOXL4 mRNA在膀胱癌中的表达及意义

膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,但其发生、发展的机制不清楚.通过采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测58例膀胱癌组织、12例对照膀胱组织LOXL4(lysyl oxidase-like protein4)mRNA的表达及其与临床分期、病理分级的关系.研究发现,58例膀胱癌组织中,LOXL4 mRNA阳性表达率为24.1%(14/58),对照膀胱正常组织中LOXL4 mRNA阳性表达率为100%(12/12),膀胱癌组LOXL4 mRNA阳性表达率明显低于对照组(P<0.05).在膀胱癌组织不同临床分期中,Ta～1期阳性表达率为40%(10/25),T2～4期阳性表达率为12.1%(4/33),T2～4期膀胱癌组LOXL4mRNA阳性表达率低于Ta～1期膀胱癌(P<0.05).不同病理分级膀胱癌组织中,G1阳性表达率为42.9%(9/21),G2～3阳性表达率为13.5%(5/37),G2～3膀胱癌组LOXL4 mRNA阳性表达率低于G1膀胱癌(P<0.05).结果表明膀胱癌组LOXL4 mRNA表达水平明显低于正常对照组,LOXL4 mRNA的表达与膀胱癌的临床分期和病理分级呈负相关.提示LOXL4失表达、低表达可能是膀胱癌发生、发展的关键因素之一.

赖氨酰氧化酶样-4与尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体在人宫颈癌细胞中的表达及意义

目的探讨赖氨酰氧化酶样基因-4(LOXL4)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)在人宫颈癌细胞株中的表达。方法采用半定量RT-PCR方法检测人宫颈癌细胞株Hela、ME180、HCC94中LOXL4、uPA和uPAR mRNA的表达,同时运用Western blot技术检测各细胞中LOXL4蛋白的翻译情况。结果 LOXL4mRNA在三株人宫颈癌细胞株中表达差异有统计学意义(P<0.01),其中在Hela细胞株中表达浓度最高,ME180细胞株表达浓度次之,而HCC94细胞株表达浓度最低;而uPA、uPAR mRNA表达浓度水平在HCC94细胞中最高,明显高于Hela、ME180细胞的表达浓度水平(P<0.05)。结论 LOXL4、uPA、uPAR基因表达可能与宫颈癌细胞的侵袭和迁移有关。

赖氨酰氧化酶样蛋白4在人类恶性肿瘤发生与发展中的作用

赖氨酰氧化酶样蛋白4(lysyl oxidase like 4,LOXL4)是一种属于赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)蛋白质家族的分泌型铜依赖性胺氧化酶,参与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的组装和维持。LOXL4蛋白在人类肝癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、头颈鳞癌、食管癌和结直肠癌中表达上调,而在人类膀胱癌和肺癌中表达下调并抑制肿瘤的生长,表明LOXL4蛋白在不同类型的人类恶性肿瘤中具有促癌或抑癌的双向作用。肿瘤细胞外泌体中的LOXL4蛋白通过催化作用产生过氧化氢,后者直接激活FAK/Src信号通路,并促进细胞基质粘附和细胞迁移。外泌体介导的LOXL4还可以通过激活PI3K/Akt信号通路来促进肿瘤细胞的增殖和免疫逃逸。肿瘤细胞中的LOXL4可以经外泌体转运至巨噬细胞,进一步通过STAT1和STAT3介导的信号通路激活细胞免疫抑制功能和激活程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)表达,触发巨噬细胞的免疫抑制功能,促进肿瘤细胞的免疫逃逸。此外,LOXL4蛋白还能通过激活p53蛋白和抑制Ras/ERK信号转导通路发挥抑癌功能。本文主要总结了LOXL4蛋白的结构、功能及其在人类恶性肿瘤发生发展的作用机制,进一步探讨LOXL4蛋白在恶性肿瘤研究中的应用前景,为恶性肿瘤的临床诊断、治疗和筛选预后标志物提供理论基础和参考依据。

实时荧光定量PCR检测人宫颈癌细胞赖氨酰氧化酶样-4基因的表达

目的:利用实时荧光定量PCR检测赖氨酰氧化酶样-4(Lysyloxidase-like 4,LOXL4)基因在Hela、ME180、HCC94人宫颈癌细胞中的表达情况。方法:提取3株体外培养宫颈癌细胞株的总RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR扩增,结合内参基因GAPDH及标准曲线比较LOXL4 mRNA在Hela、ME180和HCC94 3株体外培养的人宫颈癌细胞中的表达。结果:LOXL4基因在3株人宫颈癌细胞中均有表达,但表达水平存在统计学差异,以Hela的表达为参照(Ratio=LOXL4/GAPDH=1.00),ME180的表达水平为6.80E-3,HCC94细胞株表达丰度最低为5.62E-4。结论:建立了LOXL4基因在宫颈癌细胞表达的检测平台,为宫颈癌早期诊断及预测预后提供可借鉴的观察指标。