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左旋紫草素抑制NF-κB信号通路保护LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤 被引量:3
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作者 侯金秋 邹楠 +3 位作者 袁今奇 杜梦鸽 张薇 秦冬梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期130-138,共9页
目的探讨左旋紫草素(L-Shikonin,L-SK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞的体外抗炎作用及其对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用。方法体内实验采用LPS/D-GalN建立小鼠急性肝损伤模型,考察存活率和各组小鼠... 目的探讨左旋紫草素(L-Shikonin,L-SK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞的体外抗炎作用及其对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用。方法体内实验采用LPS/D-GalN建立小鼠急性肝损伤模型,考察存活率和各组小鼠的肝脾指数变化,测定血清中AST、ALT、AKP与肝组织匀浆中的NO含量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,HE染色观察各组小鼠肝组织病理切片。体外实验采用MTT法检测细胞存活率、Griess法检测NO含量、RT-PCR和Western blot检测分别考察L-SK对LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子的mRNA和相关通路蛋白表达水平的影响。结果体内实验结果表明,L-SK可明显改善急性肝损伤小鼠的肝脾指数,血清中AST、ALT和AKP水平明显下降,肝匀浆中的NO和MDA含量明显下降,SOD活性提高,能明显改善小鼠肝组织病理性损伤。体外实验结果表明,L-SK能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中的INOS、COX2、IFN-β以及促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA表达,并且明显抑制INOS、COX2蛋白表达以及NF-κB信号通路蛋白表达。结论L-SK在LPS诱导的RAW264.7细胞的体外炎症中具有良好的抗炎作用,通过抑制NF-κB信号通路中的磷酸化p65以及IKKα/β的蛋白表达,从而发挥体外抗炎作用,同时L-SK对小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗炎作用相关。 展开更多
关键词 左旋紫草素 lps/d-galn 肝损伤 脂多糖 RAW264.7细胞 NF-κB
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紫丁香苷对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用研究 被引量:3
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作者 胡闪闪 胡红杰 +6 位作者 徐艳萍 何灵芝 卢玉洁 黄伊芹 程明 李恭贺 司红彬 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第4期120-126,共7页
旨在探究紫丁香苷(syringin,SY)对脂多糖(LPS)联合D-半乳糖胺盐酸盐(D-GalN)、(LPS/D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其潜在机制。将40只昆明鼠随机分为4组,分别为正常对照组(NC)、LPS/D-GalN模型(LD)组、SY低剂量(LSY+LD)组、S... 旨在探究紫丁香苷(syringin,SY)对脂多糖(LPS)联合D-半乳糖胺盐酸盐(D-GalN)、(LPS/D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其潜在机制。将40只昆明鼠随机分为4组,分别为正常对照组(NC)、LPS/D-GalN模型(LD)组、SY低剂量(LSY+LD)组、SY高剂量(HSY+LD)组,每组10只。LSY+LD组、HSY+LD组采用腹腔注射方式给予SY(25、50 mg/kg),NC组和LD组分别腹腔注射等量的生理盐水,连续3 d,在第3天预防性给药1 h后,腹腔注射LPS/D-GalN建立急性药物肝损伤模型。造模6 h后,试验小鼠眼静脉取血,处死小鼠;检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;检测肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)的水平,观察肝脏氧化应激的水平;制作肝组织切片,采用苏木精伊红(HE)观察肝脏的组织变化;利用免疫组化观察激活的核转录因子p65(NF-κBp65)入核状态;ELISA法检肝匀浆IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的水平。结果表明:与NC组相比,LD组AST、ALT的水平显著增高(P<0.01),肝血管严重出血,肝脏大面积实质性坏死,胞核碎裂、崩解,肝脏中SOD、GSH、CAT水平显著降低(P<0.05),NF-κBp65核转移率提高,肝脏中IL-6,IL-1β、TNF-α炎性因子水平显著升高(P<0.01);SY组可显著降低小鼠血清中AST、ALT的活性(P<0.05),肝组织病理变化明显减轻,肝脏SOD、CAT的活性与GSH的水平提高(P<0.05);NF-κBp65核转移发生抑制;IL-6,IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结果表明SY(25、50 mg/kg)对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝脏损伤具有保护作用且具有剂量依赖性,其作用机制与SY可提高抗氧化酶活性,抑制炎性因子的产生有关。 展开更多
关键词 紫丁香苷 脂多糖(lps)联合D-半乳糖胺盐酸盐 急性肝损伤
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LPS/D-GaLN诱导大鼠急性肝损伤动物模型的建立 被引量:7
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作者 刘江凯 刘香丽 +3 位作者 李聪聪 董永春 刘少颖 刘雪涛 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期175-178,共4页
目的建立脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GaLN)诱导大鼠急性肝损伤动物模型。方法将32只SD大鼠随机分为四组,腹腔注射不同剂量的LPS及300mg/kg的D-GaLN后观察大鼠的存活状态及存活时间,筛选最佳造模LPS剂量。确定最佳剂量后,另选40只SD大... 目的建立脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GaLN)诱导大鼠急性肝损伤动物模型。方法将32只SD大鼠随机分为四组,腹腔注射不同剂量的LPS及300mg/kg的D-GaLN后观察大鼠的存活状态及存活时间,筛选最佳造模LPS剂量。确定最佳剂量后,另选40只SD大鼠随机分为8、24、48、72h模型组及对照组,模型组腹腔注射最佳剂量LPS/D-GaLN后,分别在造模8、24、48、72h处死,对照组给予同等剂量生理盐水腹腔注射。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化,观察肝组织病理变化。结果通过观察大鼠存活时间,结合肝组织病理表现,确定LPS(30μg/kg)/D-GaLN(300mg/kg)为最佳造模剂量;观察到造模后大鼠血清ALT、AST及TNF-α、IL-6水平显著升高,在24h达到高峰,之后逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理表现为肝细胞肿胀变性,出现片状坏死、融合坏死、炎症细胞浸润等表现。结论成功建立了LPS/D-GaLN诱导大鼠急性内毒素肝损伤动物模型,有利于保肝药物疗效的观察和机制的深入研究。 展开更多
关键词 脂多糖/D-氨基半乳糖(lps/d-galn) 内毒素 肝损伤 动物模型
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沙棘多糖提取物对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其对TLR4,SOCS3表达的调控 被引量:11
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作者 王雪 张威 +6 位作者 刘欢 谢基明 董仕超 陈俊娜 王岩 刘芳 王玉珍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1457-1460,共4页
目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、... 目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200 mg/kg沙棘多糖溶液连续灌胃14 d。通过腹腔注射LPS(10μg/kg)和DGal N(700 mg/kg)建立急性肝损伤模型,阳性药物组在建模前腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)。建模4 h后采集血清和肝脏组织,检测血清ALT和AST水平,HE染色观察沙棘多糖提取物对肝损伤的影响。Western blot检测TLR4,SOCS3的表达情况。结果:沙棘多糖提取物显著降低了LPS/D-Gal N诱导的小鼠血清中ALT和AST水平(P<0.01,P<0.05);HE染色观察显示,沙棘多糖明显减轻了肝细胞损伤和炎性细胞浸润。Western blot检测表明,沙棘多糖提取物抑制了LPS/D-Gal N诱导的TLR4的表达,但是对SOCS3的表达影响不明显。结论:沙棘多糖提取物有效抑制了LPS/D-Gal N诱导的肝损伤,这种保护作用可能是通过抑制TLR4的表达来发挥作用的,而非通过调控SOCS3来实现的。 展开更多
关键词 沙棘多糖 lps d-galn 肝损伤 TLR4 SOCS3
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樟芝多糖通过下调TLR4-MyD88-NF-κB信号的表达改善LPS/D-GalN诱导的肝细胞凋亡及小鼠肝损伤 被引量:7
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作者 李文燕 韩晨阳 +2 位作者 杨毅 郭丽 王真 《中药材》 CAS 北大核心 2018年第11期2671-2675,共5页
目的:研究樟芝多糖对LPS/D-GalN诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制。方法:建立LPS/D-GalN诱导的NCTC1469细胞凋亡模型,采用CCΚ-8法检测细胞存活率,硫代巴比妥酸法检测MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平,化学比色法检测LDH、ALT、AST水平... 目的:研究樟芝多糖对LPS/D-GalN诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制。方法:建立LPS/D-GalN诱导的NCTC1469细胞凋亡模型,采用CCΚ-8法检测细胞存活率,硫代巴比妥酸法检测MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平,化学比色法检测LDH、ALT、AST水平,二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH水平,Western blot检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。建立LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤模型,HE染色检测小鼠肝脏病理,化学比色法检测血清LDH、ALT、AST水平,免疫组织化学检测NF-κB表达,Wstern blot检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB表达。结果:细胞实验中,LPS/D-GalN可诱导NCTC1469细胞的凋亡,上调细胞中TLR4、MyD88、NF-κB表达和培养基中LDH、ALT、AST、MDA水平,下调细胞中SOD、GSH水平,樟芝多糖能提高细胞存活率,下调细胞中TLR4、MyD88、NF-κB表达和LDH、ALT、AST、MDA水平,上调SOD、GSH水平。动物实验中LPS/D-GalN可诱导小鼠肝损伤,上调外血清LDH、ALT、AST水平和肝组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达,樟芝多糖能下调小鼠血清LDH、ALT、AST水平和肝组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达。结论:樟芝多糖可通过下调TLR4-MyD88-NF-κB信号表达保护LPS/D-GalN诱导的肝细胞凋亡及急性肝损伤。 展开更多
关键词 樟芝多糖 lps/d-galn 肝损伤 凋亡
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ATF4在CCl4和LPS/D-GalN介导小鼠肝损伤中的保护作用 被引量:3
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作者 秦蜀 陈润 +6 位作者 赵晓芳 王勇 向远彩 罗国松 周虹 代荣阳 张春燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第13期2146-2150,共5页
目的利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究。方法建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-Gal N急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其... 目的利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究。方法建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-Gal N急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其mRNA水平。采用CRISPR-Cas9技术敲低ATF4后,分析检测两种模型中小鼠血清AST和ALT水平。为进一步探明ATF4的作用,采用内质网应激诱导剂衣霉素处理小鼠,Western blot检测小鼠肝、肺组织中ATF4、磷酸化-eIF2α、总eIF2α和Bip的蛋白水平。RT-PCR检测肝脏XBP1 mRNA的剪接形式(活性形式)和未剪接形式(非活性形式)。结果小鼠肝脏中的ATF4蛋白与其他组织相比异常增高。衣霉素能诱导小鼠体内内质网应激反应(如e IF 2α磷酸化),却引起小鼠肝脏中ATF4蛋白降低。在CCl4慢性肝损伤模型和LPS/D-GalN急性肝损伤小鼠模型中,肝脏ATF4蛋白明显降低。CRISPR-Cas9敲低肝脏ATF4后,两种小鼠模型中的血清AST和ALT进一步升高。结论 ATF4在小鼠肝损伤中起保护作用。 展开更多
关键词 ATF4 CCL4 lps/d-galn 肝损伤
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LPS/D-GalN诱发NF-κB转基因小鼠急性致死性肝损伤模型的建立 被引量:7
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作者 潘庆军 朱学芝 刘渊 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第4期1-5,I0001,I0002,共7页
目的以NF-κB转基因BALB/c小鼠建立一个LPS/D-GalN诱发的急性致死性肝损伤模型。方法采取腹腔注射高剂量的LPS/D-GalN建立急性致死性肝损伤小鼠模型,观察模型小鼠的促炎症细胞因子水平和NF-κB的活性改变,以及肝脏功能和病理改变情况。... 目的以NF-κB转基因BALB/c小鼠建立一个LPS/D-GalN诱发的急性致死性肝损伤模型。方法采取腹腔注射高剂量的LPS/D-GalN建立急性致死性肝损伤小鼠模型,观察模型小鼠的促炎症细胞因子水平和NF-κB的活性改变,以及肝脏功能和病理改变情况。结果模型组小鼠生存时间为8~10 h,模型建立后小鼠血清TNF-α、IL-6和MCP-1水平显著升高,在2~4h达到高峰;肝脏外观出现瘀血和出血,肝脏小叶被严重破坏,肝细胞严重坏死和出血;血清ALT/AST水平在模型诱发后持续迅速上升;整体成像显示NF-κB的活性在4~6 h达到高峰。正常对照组小鼠以上指标无显著变化。结论成功建立LPS/D-GalN诱发的NF-κB转基因小鼠的急性致死性肝损伤模型。 展开更多
关键词 急性致死性肝损伤 脂多糖/D-氨基半乳糖 NF-ΚB 细胞因子 转基因小鼠
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脂多糖/氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型的建立和评价 被引量:2
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作者 何佳 刘根玉 +2 位作者 张耀林 张军 王庆阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期495-500,共6页
目的建立脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型.方法体外培养小鼠原代肝细胞,待其稳定贴壁生长后,加入(0.1、0.5、1、5)ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)和5 mg/mL D-GalN进行处理,全自动生化分析仪检测细胞上清丙氨酸氨... 目的建立脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型.方法体外培养小鼠原代肝细胞,待其稳定贴壁生长后,加入(0.1、0.5、1、5)ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)和5 mg/mL D-GalN进行处理,全自动生化分析仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性反映肝细胞损伤.诱导骨髓来源巨噬细胞成熟,通过1μg/mL LPS刺激巨噬细胞产生TNF-α;巨噬细胞培养上清联合5 mg/mL D-GalN或50 ng/mL放线菌素D(ActD)处理原代肝细胞24 h,检测ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.原代肝细胞和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)共培养,LPS联合D-GalN或ActD对共培养体系处理24h,检测共培养细胞上清ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.结果TNF-α和D-GalN联合处理原代肝细胞,细胞培养上清ALT活性升高,表明肝细胞发生损伤.LPS刺激BMDM表达TNF-α明显增加,BMDM上清联合D-GalN能引起肝细胞培养上清ALT活性升高和肝细胞皱缩、破碎.肝细胞和BMDM共培养体系中,LPS联合D-GalN能够引起肝细胞损伤;但LPS联合ActD不能引起肝细胞损伤,显微镜观察发现巨噬细胞大量变圆、皱缩,提示巨噬细胞早于肝细胞发生死亡.结论LPS/D-GalN能在体外诱导肝细胞损伤;在利用BMDM和原代肝细胞共培养体系评价损伤效应时,应当用D-GalN而不是ActD作为转录抑制剂. 展开更多
关键词 脂多糖 D-氨基半乳糖(d-galn) 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 肝细胞损伤
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中药干预LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的研究进展
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作者 张俊立 谭婉莹 扈晓宇 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第9期101-107,I0015,共8页
急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)病情危重,病死率高,内科综合治疗疗效尚不满意,肝移植受限于肝源供给不足难以广泛开展。中药治疗可减轻肝脏损伤,延缓病情发展,降低病死率。基于动物模型积极筛选有效中药并阐述其作用机制具有重要... 急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)病情危重,病死率高,内科综合治疗疗效尚不满意,肝移植受限于肝源供给不足难以广泛开展。中药治疗可减轻肝脏损伤,延缓病情发展,降低病死率。基于动物模型积极筛选有效中药并阐述其作用机制具有重要意义。D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine, D-GalN)可以引起肝细胞大量坏死,而脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)可以模拟肝细胞大量死亡后的机体免疫应答,LPS联合D-GalN诱导建立的ALF模型更符合临床实际。因此,基于LPS/D-GalN构建的ALF模型,归纳总结可有效干预ALF的常见中药及其有效活性成分,并详细阐述其作用机制,以期对中药有效性评价、试验思路及临床合理应用提供参考。 展开更多
关键词 中药 脂多糖 D-氨基半乳糖胺 急性肝衰竭 有效成分 作用机制
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姜状三七皂苷R1对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤的保护作用研究
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作者 郭彭莉 曾梦楠 +5 位作者 刘萌 张宇涵 张梓玉 梁书蕾 郑晓珂 冯卫生 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2287-2291,共5页
目的:姜状三七皂苷R1对急性肝损伤的干预作用及其作用机制。方法:通过腹腔注射10μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN建立急性肝损伤小鼠模型,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化;生化法检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过... 目的:姜状三七皂苷R1对急性肝损伤的干预作用及其作用机制。方法:通过腹腔注射10μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN建立急性肝损伤小鼠模型,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化;生化法检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;小动物活体成像观察2-DG和PEG在小鼠体内的荧光强度;流式细胞术检测肝细胞的活性氧和凋亡水平。结果:与模型组比较,各剂量姜状三七皂苷R1可改善急性肝损伤小鼠肝脏病理损伤;降低小鼠血清ALT、AST水平和小鼠体内2-DG和PEG的荧光强度(P<0.01);降低肝细胞活性氧水平、血清MDA含量和小鼠肝脏组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的水平(P<0.01,P<0.05);提高SOD和GSH-Px水平(P<0.05,P<0.01)。结论:姜状三七皂苷R1介导氧化应激和炎症来发挥抗急性肝损伤的作用。 展开更多
关键词 姜状三七皂苷R1 急性肝损伤 炎症 氧化应激 脂多糖 D-氨基半乳糖
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电针通过恢复肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB 轴减轻大鼠实验性类风湿性关节炎
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作者 周伟 汪昌参 +4 位作者 张辽 刘磊 贺飞 杨影 汪富 《长春中医药大学学报》 2024年第5期517-522,共6页
目的探讨电针通过恢复肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB轴减轻大鼠实验性类风湿性关节炎(RA)的效果。方法从50只清洁级Wistar雄性大鼠中随机抽取10只作为正常组,其余40只建立RA大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、电针组,其中电针... 目的探讨电针通过恢复肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB轴减轻大鼠实验性类风湿性关节炎(RA)的效果。方法从50只清洁级Wistar雄性大鼠中随机抽取10只作为正常组,其余40只建立RA大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、电针组,其中电针组给予电针疗法治疗,正常组、模型组不作处理,记录不同时间点模型组、电针组关节肿胀度(joint swelling degree,JSD)、关节炎指数(arthritis index,AI)。实验结束后,观察各组关节超微结构变化、肠道微生物群变化、炎症因子水平及LPS-TLR4-NF-κB信号通路因子mRNA、蛋白表达情况。结果干预后,电针组JSD、AI明显低于模型组(P<0.05);与正常组比较,模型组滑膜组织增生,细胞膜破坏严重且不完整,伴大量炎性细胞浸润,电针治疗后,大鼠滑膜组织增生情况、炎性细胞浸润情况、粗面内质网扩张情况明显改善,核膜边缘清晰;与模型组比较,电针组的肠道微生物群相对丰度、炎症因子水平、LPS-TLR4-NF-κB信号通路相关mRNA水平均有改善(P<0.05)。结论电针疗法可有效改善RA大鼠关节症状、抑制炎症因子表达,其机制可能与调节肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 动物实验 电针 肠道微生物群 lps-TLR4-NF-κB轴
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布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 廖倩 向梦玲 +4 位作者 凌洪权 董春霞 骆璐 吴胜昔 曾政 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 北大核心 2024年第8期291-297,共7页
制备布鲁氏菌LPS特异性单克隆抗体,为建立布鲁氏菌病血清学及新型免疫传感器检测方法提供有效试剂。将天然提取的布鲁氏菌LPS抗原使用长程免疫法腹腔注射BALB/c小鼠,经过5次常规免疫及1次加强免疫后,取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2... 制备布鲁氏菌LPS特异性单克隆抗体,为建立布鲁氏菌病血清学及新型免疫传感器检测方法提供有效试剂。将天然提取的布鲁氏菌LPS抗原使用长程免疫法腹腔注射BALB/c小鼠,经过5次常规免疫及1次加强免疫后,取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,使用间接酶联免疫吸附试验(iELISA)对杂交瘤细胞进行筛选,并对纯化后的单克隆抗体进行生物特性鉴定。结果表明:筛选出3株稳定分泌单抗的阳性细胞株,分别命名为2-4A、3-4E、5-10B;经过亚型鉴定,3-8E、2-4A为IgG1亚型,5-10B为IgG2b亚型。将5-10B细胞株使用腹腔注射法制备腹水,并通过Protein A柱纯化腹水。纯化后单抗达到了电泳纯,BCA法测定其浓度最高可达1.431 8 mg·mL^(-1), ELISA效价达到1∶512 000,间接ELISA结果显示制备的抗体具有良好的特异性。研究制备的高特异性、高活性的单克隆抗体可为后续布鲁氏菌病特异性诊断技术研究提供参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 lps 细胞融合 单克隆抗体 生物特性鉴定
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甘草多糖对LPS诱导小鼠睾丸炎的调节作用
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作者 李美艳 邢晓莹 +3 位作者 李娜 张椰莉 乔宏萍 武晓英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2741-2750,共10页
本研究旨在探讨甘草多糖(glycyrrhiza polysaccharide, GPS)对LPS诱导小鼠睾丸炎的调节作用及其可能机制。将60只8周龄的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为6组(每组10只):空白对照组、模型组(LPS组)、阳性对照组(地塞米松组)、GPS低中高剂量组(... 本研究旨在探讨甘草多糖(glycyrrhiza polysaccharide, GPS)对LPS诱导小鼠睾丸炎的调节作用及其可能机制。将60只8周龄的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为6组(每组10只):空白对照组、模型组(LPS组)、阳性对照组(地塞米松组)、GPS低中高剂量组(100、200、400 mg·kg^(-1))。试验前20 d GPS低中高剂量组灌胃给予相应剂量的GPS,其他组灌胃同等剂量的生理盐水,第21天模型组腹腔注射5 mg·kg^(-1) LPS,其他组腹腔注射等量的生理盐水,2 h后,阳性对照组灌胃给予5 mg·kg^(-1)的地塞米松,12 h后,按照动物伦理学标准处死小鼠,收集小鼠血液及睾丸组织。运用HE染色法观察小鼠睾丸组织结构形态学变化,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中睾酮激素(testosterone, T)含量及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平,南京建成试剂盒检测氧化损伤指标(T-SOD、CAT、GSH)变化,实时荧光定量PCR法检测睾丸组织中紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1)、炎症因子(IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α)及细胞焦亡关键因子(caspase-1、NLRP3、GSDMD)mRNA表达变化,Western blot法检测IL-18、IL-1β、NLRP3、GSDMD的蛋白表达水平。结果显示,阳性对照组与GPS中高剂量组可以显著缓解LPS诱导的小鼠睾丸组织结构损伤,增加血清睾酮含量,改善氧化损伤,降低促炎因子mRNA表达水平,并抑制细胞焦亡发生。综上所述,GPS可以有效缓解LPS诱导的睾丸炎损伤,其作用机制可能与改善睾丸组织氧化损伤,抑制细胞焦亡,阻止炎症反应相关。 展开更多
关键词 甘草多糖 lps 睾丸炎 细胞焦亡
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RANKL对LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的作用研究
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作者 杨慧琳 马晓聪 +1 位作者 曲波 崔英俊 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2024年第8期11-15,共5页
文章研究利用LPS诱导建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型,过表达RANKL后,采用MTT法检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中奶牛乳腺上皮细胞活力,采用荧光定量PCR技术检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中炎症因子IL1β、IL6、i NOS、TNF-α的m RNA表达,... 文章研究利用LPS诱导建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型,过表达RANKL后,采用MTT法检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中奶牛乳腺上皮细胞活力,采用荧光定量PCR技术检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中炎症因子IL1β、IL6、i NOS、TNF-α的m RNA表达,探讨RANKL对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的作用。结果表明,以10μg/mL LPS处理奶牛乳腺上皮细胞24 h建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型,RANKL可显著提高奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中奶牛乳腺上皮细胞活力,降低奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中IL1β、IL6、i NOS的mRNA表达,同时显著降低奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中TNF-α的mRNA及蛋白表达。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 RANKL lps 炎症因子
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MNQ的一种衍生物对LPS体外诱导的牛卵巢卵泡颗粒细胞炎性损伤的保护作用
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作者 杨小峰 秦小伟 吕丽华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2032-2041,共10页
旨在采用凤仙花(Impatiens balsamina L)提取物2-甲氧基-1,4-萘醌(MNQ)的衍生物D_(19)消除体外暴露于脂多糖(LPS)中牛卵巢卵泡颗粒细胞(GCs)的炎症反应,并缓减由LPS引起的卵泡GCs功能性紊乱。本研究采集性成熟且健康的荷斯坦牛卵巢组织... 旨在采用凤仙花(Impatiens balsamina L)提取物2-甲氧基-1,4-萘醌(MNQ)的衍生物D_(19)消除体外暴露于脂多糖(LPS)中牛卵巢卵泡颗粒细胞(GCs)的炎症反应,并缓减由LPS引起的卵泡GCs功能性紊乱。本研究采集性成熟且健康的荷斯坦牛卵巢组织,分离并培养卵泡GCs。MTT法测定D_(19)和LPS对卵泡GCs存活率的影响。试验分为3组:对照组、LPS处理组和D_(19)联合LPS处理组,每组3个重复。qRT-PCR测定炎性因子和类固醇合成相关基因的相对表达量。TEM观察D_(19)对细胞炎性损伤的保护作用。ELISA检测培养液上清中雌二醇(E_(2))和孕酮(P_(4))的含量。结果表明,D_(19)对卵泡GCs作用12 h的最大安全浓度为64μmol·L^(-1)。LPS浓度为10μg·mL^(-1)时,作用12 h对卵泡GCs存活率影响不大,但炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的相对表达量显著升高(P<0.01),D_(19)+L组与LPS组比较炎性因子的相对表达量却显著降低(P<0.01)。通过TEM观察表明D_(19)对LPS引起的细胞器结构性损伤具有保护作用。ELISA结果表明,LPS处理后培养液中E_(2)和P_(4)的含量显著降低(P<0.01),qRT-PCR检测到类固醇合成相关基因CYP19A1、CYP11A1、3β-HSD和STAR的相对表达量也显著降低(P<0.01)。但D_(19)联合LPS处理后,E_(2)和P_(4)分泌量以及类固醇合成相关基因的相对表达量均比LPS组显著升高(P<0.01)。本研究证明MNQ的衍生物D_(19)具有消除LPS体外诱导卵泡GCs炎症反应的功能,并能一定程度缓减LPS导致的卵泡GCs功能性紊乱。 展开更多
关键词 MNQ D_(19) lps GCS 炎症反应
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基于肠道菌群-LPS/TLR4通路探讨野菊花提取物对“过食膏粱厚味”致高尿酸血症大鼠的作用
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作者 焦琳 庞敏霞 +5 位作者 董英杰 苏洁 俞静静 颜美秋 陈素红 吕圭源 《浙江中医药大学学报》 CAS 2024年第8期915-928,共14页
[目的]研究野菊花提取物(Chrysanthemi Indici Flos extract,CYM.E)对“过食膏粱厚味”致高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠的治疗作用及机制。[方法]将64只大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,别嘌醇10 mg·kg^(-1)组,苯溴马隆5 m... [目的]研究野菊花提取物(Chrysanthemi Indici Flos extract,CYM.E)对“过食膏粱厚味”致高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠的治疗作用及机制。[方法]将64只大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,别嘌醇10 mg·kg^(-1)组,苯溴马隆5 mg·kg^(-1)组,CYM.E15、30、60、90 mg·kg^(-1)组,每组8只。除正常对照组外,其余各组均灌胃脂肪乳剂,建立拟人“过食膏粱厚味”致HUA大鼠模型。实验期间测定血清尿酸(uric acid,UA)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-c)水平;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和血浆脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法测定小肠中TNF-α、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的mRNA表达;免疫印迹法检测小肠中TLR4蛋白表达;应用16S rDNA测序技术,对肠道菌群进行操作分类单元(operational taxonomic units,OTU)分类,选择合适的OTU进行结构分析、LEfSe差异贡献分析等。[结果]CYM.E能显著降低模型大鼠血清UA、TC、LDL-c、IL-6和TNF-α水平;显著降低血浆LPS水平;同时显著下调小肠组织TNF-αmRNA、TLR4 mRNA表达和TLR4蛋白表达,改善肠道的微炎症状态;增加乳酸杆菌、双歧杆菌的丰度与种类,降低拟杆菌、大肠杆菌的丰度与种类。[结论]CYM.E具有降低血清UA水平、调节血脂、减低炎症损伤、减少LPS释放等作用,可能通过调节肠道微生态发挥作用。 展开更多
关键词 高尿酸血症 脂肪乳剂 野菊花 动物模型 脂代谢 微炎症 肠道微生态 lps/TLR4
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青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响 被引量:1
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作者 李莉 孙颖颖 +4 位作者 白莹 胡罗文 魏庆庆 严宇鹏 王冀 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期731-735,共5页
目的:探究青藤碱(SIN)通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及J... 目的:探究青藤碱(SIN)通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果:LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高(P<0.05);Bcl-2、P62蛋白水平均降低(P<0.05)。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控(P<0.05)。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用(P<0.05)。结论:SIN可通过调控JNK/c-Jun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。 展开更多
关键词 青藤碱 JNK/c-Jun信号通路 lps 肺上皮细胞 凋亡 自噬
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蝙蝠草醇提物对D-GalN/LPS所致小鼠急性肝功能衰竭的影响 被引量:1
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作者 杨雯琪 朱华 +3 位作者 罗静 许立拔 韦安达 谢凤凤 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2002-2006,共5页
目的研究蝙蝠草醇提物对D-GalN/LPS所致小鼠急性肝衰竭的作用及相关机制。方法小鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组(50 mg/kg)和蝙蝠草醇提物低、中、高剂量组(188、375、750 mg/kg),每组20只。给药组灌胃给予相应药物,正常组和模... 目的研究蝙蝠草醇提物对D-GalN/LPS所致小鼠急性肝衰竭的作用及相关机制。方法小鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组(50 mg/kg)和蝙蝠草醇提物低、中、高剂量组(188、375、750 mg/kg),每组20只。给药组灌胃给予相应药物,正常组和模型组小鼠灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠,连续给药13 d。末次给药后,除正常组小鼠外,其余小鼠腹腔注射D-GalN(700 mg/kg)和LPS(25μg/kg)复制急性肝衰竭模型。记录6 h内小鼠存活率、肝系数,检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平,HE染色观察组织病理学,ELISA法检测肝组织白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫组化法检测肝组织环氧合酶-2(COX-2)和一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果与模型组比较,蝙蝠草醇提物各剂量组6 h内小鼠存活率,肝系数,血清AST、ALT水平,肝组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平和iNOS、COX-2蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),肝组织病理损伤减轻。结论蝙蝠草醇提物能有效拮抗D-GalN/LPS所致小鼠肝衰竭,其机制可能与抑制COX-2、iNOS表达有关。 展开更多
关键词 蝙蝠草 醇提物 急性肝衰竭 d-galn/lps COX-2 iNOS
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苦郎树枝叶水提物对LPS所致发热家兔的解热机制
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作者 许立拔 王冰冰 +5 位作者 秦丹 韦安达 玉焕 吴冰燕 丘芬 谢凤凤 《中国兽药杂志》 2024年第5期45-55,共11页
研究苦郎树枝叶水提物的解热作用及其机制。采用耳缘静脉注射脂多糖(LPS,4μg/kg)复制家兔发热模型,水提物剂量设定为1、2、和4 g/kg,按5 mL/kg单次灌胃给药,药后检测肛温,测定血清肝功能和内生致热原指标水平,HE染色法检测肝组织和下... 研究苦郎树枝叶水提物的解热作用及其机制。采用耳缘静脉注射脂多糖(LPS,4μg/kg)复制家兔发热模型,水提物剂量设定为1、2、和4 g/kg,按5 mL/kg单次灌胃给药,药后检测肛温,测定血清肝功能和内生致热原指标水平,HE染色法检测肝组织和下丘脑组织病理学改变,免疫组化染色法检测肝组织COX-2和下丘脑TLR4、NF-κB、COX-2表达水平。结果表明,水提物各剂量组均可显著降低肛温(P<0.05或P<0.01),降低血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β、IL-6和PGE_2水平(P<0.05或P<0.01),明显减轻肝组织和下丘脑组织病理学损伤,降低肝组织COX-2和下丘脑TLR4、NF-κB、COX-2表达水平(P<0.05或P<0.01)。苦郎树枝叶水提物具有良好的解热作用,其机制可能与增强肝功能、消除血液内生致热原及下调肝组织COX-2和下丘脑TLR4、NF-κB、COX-2表达水平有关。 展开更多
关键词 苦郎树 水提物 lps 解热作用 保护机制
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Dietary supplementation of benzoic acid and essential oils combination enhances intestinal resilience against LPS stimulation in weaned piglets 被引量:1
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作者 Chang Cui Yulong Wei +9 位作者 Yibo Wang Wen Ma Xiaoyu Zheng Jun Wang Ziwei Ma Caichi Wu Licui Chu Shihai Zhang Wutai Guan Fang Chen 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期878-897,共20页
Background The benefits of combining benzoic acid and essential oils(BAO)to mitigate intestinal impairment during the weaning process have been well established,while the detailed underlying mechanism has not been ful... Background The benefits of combining benzoic acid and essential oils(BAO)to mitigate intestinal impairment during the weaning process have been well established,while the detailed underlying mechanism has not been fully elucidated.Previous research has primarily focused on the reparative effects of BAO on intestinal injury,while neglecting its potential in enhancing intestinal stress resistance.Methods In this study,we investigated the pre-protective effect of BAO against LPS-induced stress using a modified experimental procedure.Piglets were pre-supplemented with BAO for 14 d,followed by a challenge with LPS or saline to collect blood and intestinal samples.Results Our findings demonstrated that BAO supplementation led to significant improvements in piglets’final weight,average daily gain,and feed intake/body gain ratio.Additionally,BAO supplementation positively influenced the composition of intestinal microbiota,increasing beneficial Actinobacteriota and Alloprevotella while reducing harmful Desulfobacterota,Prevotella and Oscillospira.Furthermore,BAO supplementation effectively mitigated oxidative disturbances and inflammatory responses induced by acute LPS challenge.This was evidenced by elevated levels of T-AOC,SOD,and GSH,as well as decreased levels of MDA,TNF-α,and IL-6 in the plasma.Moreover,piglets subjected to LPS challenge and pre-supplemented with BAO exhibited significant improvements in intestinal morphological structure and enhanced integrity,as indicated by restored expression levels of Occludin and Claudin-1 compared to the non-supplemented counterparts.Further analysis revealed that BAO supplementation enhanced the jejunal antioxidative capacity by increasing GSH-Px levels and decreasing MDA levels under the LPS challenge and stimulated the activation of the Nrf2 signaling pathway.Additionally,the reduction of TLR4/NF-κB/MAPK signaling pathways activation and proinflammatory factor were also observed in the jejunal of those piglets fed with BAO.Conclusions In summary,our study demonstrates that pre-supplementation of BAO enhances the anti-stress capacity of weaned piglets by improving intestinal microbiota composition,reinforcing the intestinal barrier,and enhancing antioxidative and anti-inflammatory capabilities.These effects are closely associated with the activation of Nrf2 and TLR4/NF-κB/MAPK signaling pathways. 展开更多
关键词 ANTI-STRESS Benzoic acid Essential oils INTESTINE lps Weaned piglets
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