结核分枝杆菌Lrp基因(Rv2779c)敲除菌株的构建与功能初探

目的为深入研究结核分枝杆菌Rv2779c基因的功能,构建针对该基因的敲除突变菌株。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Rv2779c基因上下游大约500 bp左右的片段作为同源重组的左右臂,并将同源重组左右臂构建到p0004s穿梭质粒上,将p0004s同源重组质粒构建到phAE159质粒中形成噬菌粒,包装形成的噬菌体侵染H37Rv后将同源重组元件整合到基因组中,通过重组元件中的潮霉素抗性标记对阳性克隆进行筛选,同时利用左右臂扩增及内部片段扩增的原理,对抗性筛选阳性克隆进行鉴定。比较Rv2779c基因敲除突变株与H37Rv标准菌株在正常7H9完全培养基及含高浓度利福平培养基中的生长差异。结果成功构建了包含Rv2779c上下游序列同源重组臂的p0004s-ΔRv2779c重组质粒,并将该质粒与含有分枝杆菌温度敏感型元件的phAE159质粒连接获得重组噬菌粒,最后将包装成功的噬菌体侵染H37Rv获得抗性筛选阳性的克隆菌株,PCR表明结核分枝杆菌Rv2779c基因敲除成功。Rv2779c基因敲除对结核分枝杆菌在正常培养基中生长几乎没有影响,但显著降低了结核分枝杆菌在高浓度利福平培养基中的存活率。结论首次成功构建了结核分枝杆菌Rv2779c敲除菌株,为后续进一步研究Rv2779c基因的功能奠定了重要基础。初步研究发现该基因影响结核分枝杆菌在含利福平培养基中的持留生长。

肺癌患者FLK-1、LRP和MDR1的表达与临床研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体 (Flk 1),肺耐药蛋白 (LRP)基因以及多药耐药基因 (MDR1)蛋白与肺癌患者临床及病理指标的关系。方法:用免疫组化技术(ABC法)对原发性肺癌组织中三种基因的表达进行检测。结果: 70例肺癌中,非小细胞肺癌MDR1阳性率 49. 2% (29 /59),明显高于小细胞肺癌 (SCLC) 18. 2% (2 /11)(P<0. 05);非小细胞肺癌LRP阳性率 69. 5% (41 /59),明显高于小细胞肺癌 27. 3% (3 /11) (P<0. 05)。腺癌中MDR1与LRP的表达明显高于鳞癌(P<0. 05)。LRP与Flk 1在NSCLCs中共同表达 49. 2% (29 /59),LRP的表达与肺癌的组织学分级相关,MDR1和LRP的表达与肺癌的组织学类型有关,Flk 1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0. 05)。Flk 1+LRP均阳性、FLK 1+LRP+MDR1均阳性、中药治疗、复发与患者的生存率有关(P<0. 05)。结论:FLK 1、LRP和MDR1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。

HER-2及LRP在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体-2(HER-2)和肺耐药蛋白(LRP)的表达及与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学(IHC)EnVision二步法,检测70例非小细胞肺癌组织和35例相应癌旁正常肺组织中HER-2和LRP的表达情况,并结合其临床病理特征进行分析。结果在非小细胞肺癌组织中,HER-2和LRP的阳性表达率分别为31.4%、72.9%,均分别高于癌旁正常肺组织的表达(P<0.05)。HER-2在腺癌中的阳性表达率为46.0%,在鳞癌中为15.2%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。HER-2的表达与淋巴结转移、病理分级、临床分期间无明显差异(P>0.05);LRP在腺癌中的阳性表达率为78.4%,在鳞癌中为66.7%(P>0.05)。LRP的表达与淋巴结转移、病理分级及临床分期间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HER-2、LRP在非小细胞肺癌组织中有不同程度的表达,检测两者有助于该癌化疗药物的选择及预后的判断。

非小细胞肺癌患者MDR1、FLK-1和LRP的表达及其临床意义

目的:研究多药耐药基因(MDR1)、血管内皮生长因子受体(Flk-1)、肺耐药蛋白(LRP)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法:用免组化技术(ABC法)对38例术前未进行化疗及放疗的NSCLC组织中MDR1、Flk-1、LRP表达进行检测。结果:在38例非小细胞肺癌组织中,MDR1、Flk-1、LRP基因阳性表达率分别为42.1%(16/38)、57.9%(22/38)和44.7%(17/38),其共同表达率(MDR1+LRP)为13(34.2%),(Flk-1+LRP)为12(31.6%),(Flk-1+MDR1+LRP)为10(26.3%);MDR1蛋白阳性的肺癌患者出现肺门淋巴结转移率较高,与TNM分期和有无淋巴结转移等各项病理因素无明显相关(P>0.05);LRP的表达与肺癌的组织学类型有关,腺癌中LRP的表达明显高于鳞癌(P<0.05),高分化高表达,而与TNM分期、有无淋巴结转移无明显相关(P>0.05);Flk-1与TNM分期相关,(P<0.05),Flk-1、LRP蛋白表达阳性的肺癌患者出现肺门淋巴结转移率较高,但无统计学意义(P>0.05);MDR1+LRP、Flk-1+LRP和Flk-1+MDR1+LRP基因的表达率在NSCLC的不同病理类型及组织分化程度的表达差异无统计学意义(P>0.05);MDR1+LRP、复发与患者的预后有关(P<0.05)。结论:MDR1、FLK-l和LRP基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。

急性髓性白血病患者LRP、MRP基因表达

目的 :研究急性髓性白血病LRP基因、MRP基因表达与疗效的关系。方法 :用RT -PCR法检测 37例急性髓性白血病LRP基因、MRP基因表达 ,按此两种基因表达分成LRP - /MRP -、LRP - /MRP +、LRP + /MRP -、LRP + /MRP +共 4组 ,统计比较各组疗效。结果 :与LRP - /MRP -组比较 ,其余 3组疗效较低 ,其中LRP + /MRP -组、LRP + /MRP +组存在显著差异 ,但LRP + /MRP +组与LRP + /MRP -组比较疗效基本相同。结论 :急性髓性白血病中存LRP基因表达时 ,治疗疗效差 。

肺癌组织中LRP、GST-π和p53的表达及相关性研究

目的 探讨肺耐药蛋白 (L RP)基因、胎盘型谷胱甘肽 S转移酶 (GST- π)及 p5 3蛋白在肺癌组织中的表达及相关性。方法 应用免疫组化 S- P法检测 5 8例术前未经化疗的肺癌组织中 L RP、GST- π及 p5 3蛋白的表达情况。结果 L RP、GST-π及 p5 3在 5 8例肺癌组织中的阳性表达率分别为 5 5 .17%、6 0 .34%和 74 .14 % ,L RP的表达在不同的组织类型中以腺癌最高 ,达 78.5 7% ,它与鳞癌组相比差异有显著性 (p<0 .0 5 ) ;男女组相比 ,女性组表达率达 78.95 ,差异亦有显著性 (p<0 .0 5 ) ,而与肿瘤的大小及淋巴结转移均无关 (p>0 .0 5 ) ;GST- π的表达在淋巴结转移阳性组高达 78.5 7% ,与阴性组比较差异有显著性 (p<0 .0 5 ) ,而与肿瘤的类型、大小及男女性别无关 (p>0 .0 5 )。 p5 3蛋白在淋巴结转移阳性组为 89.2 9% ,与阴性组相比差异有显著性 (p<0 .0 5 ) ,而 p5 3的表达与肿瘤的类型、大小及性别无明显关系 (p>0 .0 5 ) ;将 L RP、GST-π及 p5 3蛋白的表达进行相关性比较发现 GST-π及 p5 3蛋白的表达关系密切 (p<0 .0 5 )。结论 L RP的表达与肺癌 ,尤其是肺腺癌的耐药有关 ,GST-π及 p5 3蛋白的高表达与肺癌的淋巴结转移相关 ,两者的表达关系密切 。

慢生大豆根瘤菌与竞争结瘤相关的lrp基因的克隆

通过对重组质粒 pGXN30 0中的 2 .3kbEcoRI片段测序分析发现 ,其中含有一完整的lrp基因和部分 putA基因 ,与King等报道的B .japonicum的lrp基因DNA序列有 88%同源性。应用Tn5gusA5定位诱变的方法获得了gusA基因表达的根瘤菌lrp基因突变体GX2 0 10 8。植株试验表明 ,突变株结瘤时间明显推迟 。

耐顺铂相关基因MDR1、MRP、LRP及GST-π在非小细胞肺癌中的表达及与生存相关的Meta分析

目的:采用循证医学系统分析方法了解肿瘤耐顺铂相关基因与非小细胞肺癌的相关性,为科学制定化疗方案提供理论依据。方法:检索中国学术期刊网(CNKI)全文数据库、维普科技期刊、美国国立图书馆PUBMED;检索时间段为1979-2011年;获得符合纳入标准的关于非小细胞肺癌耐药相关基因MDR1、MRP、LRP及GST-π的文献研究27篇;采用Stata11.0进行统计分析。结果:非小细胞肺癌组织与正常肺组织耐药基因表达合并效应显示,非小细胞肺癌组织耐顺铂相关基因表达水平明显高于正常肺组织。4种基因合并OR值并计算95%可信区间,各基因表达结果按照OR值大小顺序,OR值及95%可信区间依次为GST-π30.86(16.03,59.40)、LRP 13.96(9.27,21.01)、MRP 12.69(8.36,19.26)、MDR1 8.03(4.45,14.48),其中LRP及MRP基因3年死亡人数明显高于3年生存人数,OR值及9 5%可信区间分别为LRP 4.75(2.11,10.67)、MRP 4.61(2.28,9.32)。结论:耐顺铂相关基因MRP、LRP、GST-π及MDR1在非小细胞肺癌组织中呈高表达,尤以GST-π基因为著,其余依次是LRP、MRP、MDR1基因。各基因在非小细胞肺癌组织中表达的高低直接影响化疗效果和预后,是非小细胞肺癌化疗耐药中的重要基因。

多药耐药基因产物LRP、GST-π、TopoⅡ在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨大肠癌组织中多药耐药(MDR)基因产物肺耐药相关蛋白(LRP)、谷胱甘肽-S-转移酶π(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学Max VisionTM法检测122例大肠癌组织中LRP、GST-π和TopoⅡ的表达情况,并结合临床病理因素进行分析。结果①在大肠癌组织中LRP、GST-π和TopoⅡ表达的阳性率分别为88.5%,81.1%和77.05%;②LRP表达与性别、年龄、肿瘤大小、部位、临床分期、浸润深度、组织学类型等临床病理因素均无明显相关性(P>0.05);③GST-π在高、中分化腺癌中的阳性表达率明显高于低分化腺癌(P<0.05);④TopoⅡ的表达与大肠癌发生年龄有关,年轻患者其TopoⅡ的表达明显高于≥59岁者(P<0.05)。结论在未化疗过的大肠癌组织中,LRP、GST-π、Topo Ⅱ均有不同程度的高表达,其表达差异与其临床病理学特点具有相关性。因此,联合检测多药耐药基因,对于判断大肠癌患者的预后以及有效的个性化治疗具有重要意义。

阿尔茨海默病患者精神行为障碍与ApoE、LRP基因多态性的关联性分析

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者精神行为障碍与ApoE、LRP基因多态性的关联性分析。方法收集2010年8月至2012年10月AD患者80例,正常对照者80例。结果ε4/4在偏执和妄想观念、幻觉及行为紊乱、攻击方面与其他基因型差异有统计学意义,AD患者ApoE基因频率分布与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组LRP的基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AD患者精神行为障碍与ApoE基因频率多态性存在一定联系,ApoEε4是AD的风险基因,LRP基因多态性和AD的关系有待进一步研究探讨。

费氏中华根瘤菌lrp基因的克隆、突变与功能

通过分子克隆技术,从费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HN01基因组文库中克隆到一个lrp基因.该基因与已报道的苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)1021的lrp基因在核苷酸水平上有89%相似性,在氨基酸水平上有99%相似性.利用自杀质粒pK18mob构建含有lrp基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合后导入原始菌株HN01中,经过同源单交换,获得发生正向插入突变的突变株GXHNLTA和反向插入突变的突变株GXHNLTB.将lrp基因ORF连接到载体pLAFR3上,获得用于互补的质粒pGXHNL100,将该质粒通过三亲本接合导入突变株中,获得互补株GXHNWA、GXHNWB.对野生型菌株、突变株、互补株进一步研究发现,在以脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸为唯一碳、氮源的MM培养基中培养时,突变体GXHNLTA、GXHNLTB的生长均滞后于出发菌株HN01.植株试验表明,突变菌株GXHNLTA、GXHNLB比野生菌株HN01开始结瘤的时间提前1d,在结瘤效率、单株瘤数、瘤重、固氮酶活性方面并无显著差别.

非小细胞肺癌患者Flk-1和LRP的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子受体(Flk-1)、肺耐药蛋白(LRP)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的临床意义。方法用免疫组化技术(ABC法)对NSCLCs组织中两种基因的表达进行检测。结果NSCLCs患者LRP表达率为69.5%(41/59),其中腺癌明显高于鳞癌(P<0.05)。LRP与Flk-1在59例NSCLCs中共同表达29例(49.2%),LRP的表达与肺癌的组织学分级及组织学类型有关,Flk-1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0.05)。Flk-1+LRP、复发与患者的生存率有关(P<0.05)。结论Flk-1和LRP基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。

肺癌患者FLK-1和LRP的实验与临床研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体FLK1和肺耐药蛋白LRP基因在肺癌发生发展过程中的作用。方法:用免疫组化技术(ABC法)对原发性肺癌组织中二种基因的表达进行检测。结果:70例肺癌中,非小细胞肺癌LRP过度表达率为69.5%,明显高于小细胞肺癌LRP过度表达率27.3%(P<0.05);腺癌中LRP的表达明显高于鳞癌(P<0.05)。LRP与FLK1在59例NSCLC中共同表达29例(49.2%),LRP的表达与肺癌的组织学分级、吸烟以及组织学类型有关;FLK1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0.05)。FLK1+LRP、中药治疗、复发与患者的预后有关(P<0.05)。结论:FLK1和LRP基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。

中西药联合对胃癌SGC-7901/ADR细胞LRP、MRP基因表达的影响

目的:探讨中西药联合(班贞1号+5-FU+TMP)对胃癌SGC-7901/ADR细胞MRP、LRP基因表达的影响。方法:以胃癌多药耐药细胞株SGC-7901/ADR为靶细胞,以不加药组为阴性对照组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组、班贞1号组、班贞1号+5-FU组、中西药联合组为实验组,采用半定量RT-PCR法检测SGC-7901/ADR细胞在不同药物作用下MRP、LRP mRNA的表达。结果:5-FU组与阴性对照组相比,MRP、LRP mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。中西药联合组MRP、LRP mRNA表达明显降低,与阴性对照组及其他实验组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:中西药联合能够抑制SGC-7901/ADR细胞MRP、LRP mRNA表达,逆转了SGC-7901/ADR细胞的耐药性,其机制可能与下调MRP、LRP基因表达有关。

Alzheimer病和血管性痴呆患者APOE及LRP基因多态性与认知及精神行为症状相关性研究

目的探讨Alzheimer病(AD)和血管性痴呆(VD)患者APOE及LRP基因多态性与认知及精神行为症状(BPSD)的相关性。方法收集AD患者79例、VD患者85例和健康对照者(对照组)156名,采用简易精神状态检查量表(MMSE)评定认知功能;采用简明精神病量表和汉密尔顿抑郁(HAMD)、焦虑量表(HAMA)评定BPSD。采用PCR-RFLP进行APOEε、LRP基因分型。结果 (1)AD组(17.7%)及VD组(20.5%)APOEε4等位基因频率均高于对照组(5.7%,均P<0.01)。(2)AD组和VD组APOEε4携带者MMSE得分均低于同组APOEε4非携带者〔AD组(13.84±2.32)分vs.(14.78±2.54)分,P<0.01;VD组(15.53±1.87)分vs.(18.45±2.23)分,P<0.01〕。(3)AD组患者APOEε4携带者BPSD比例明显高于APOEε4非携带者(55.56%vs.52.83%,P=0.039)。结论 APOEε4可能是AD、VD患者认知障碍的共同危险因素。APOEε4可能是AD的BPSD危险因素。

广州75岁以上老年人群LRP、α2-MG基因多态性与Alzheimer病的关系

目的了解高龄老年人群A lzheim er病(AD)患者低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)和α2巨球蛋白(α2-MG)基因型的分布,探讨这两种基因多态性和AD的相关关系。方法采用系统整群抽样方法调查广州市荔湾区75岁以上的老年居民3 825例,按DSM-Ⅲ-R和NINCDS/ADRDA的诊断标准,从中筛选出无血缘关系的散发性AD患者190例(其中有部分患者接受抽血检查),并以该人群中的健康老年人作为对照。采用PCR-RFLP技术,检测以上两组老年人LRP和α2-G基因型。结果AD组LRP的C、T基因频率分别为93.8%、6.2%,对照组LRP的C、T基因频率分别为93.0%、7.0%;AD组α2-MG的A2M-1、A2M-2基因频率分别为95.7%、4.3%,对照组α2-MG的A2M-1、A2M-2基因频率分别为98.3%、1.7%。AD组与对照组在LRP或α2-MG的基因型频率及等位基因频率分布上的差异均无显著性(P>0.05)。结论广州市荔湾区75岁以上老年人群LRP和α2-MG基因可能均不是AD发病的遗传危险因素。

PQ-LRP基因沉默对犬小孢子菌生长及毒力的影响

目的探讨PQ-LRP基因对犬小孢子菌生长及毒力的影响。方法野生株和干扰株分别于沙氏培养基(SDA)培养观察菌落形态;米饭培养基行扫描电镜(SEM)透射电镜(TEM)观察超微结构;构建豚鼠感染模型行直接镜检和组织病理检查观察致病情况;液体沙氏培养基加入L-半胱氨酸,RT-PCR检测PQ-LRP基因沉默前后mRNA表达的变化。结果菌落形态:干扰株较野生株生长受限;豚鼠模型:干扰株较野生株不易感染宿主;致病豚鼠毛发皮屑真菌镜检:野生株为发内外孢子,孢子多,菌丝粗细均匀,干扰株为发外孢子,孢子少,菌丝粗细不一、弯曲不自然;豚鼠模型:野生株真皮及皮下组织见感染性肉芽肿改变,干扰株感染性肉芽肿改变不明显;半胱氨酸对犬小孢子菌PQ-LRP基因影响:野生株随半胱氨酸的浓度增加PQ-LRP基因表达水平呈上升趋势,干扰株PQ-LRP基因表达水平无规律性。结论PQ-LRP基因抑制后犬小孢子菌形态有变化、毒力减弱,推测PQ-LRP基因可能是犬小孢子菌致头癣的可能毒力基因之一。

斑贞1号、川芎嗪和5-氟尿嘧啶联合对人胃癌细胞肺耐药蛋白基因表达影响

目的探讨斑贞1号、川芎嗪(TMP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与LRP表达的相关性。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在单纯5-FU和5-FU联合斑贞1号及TMP处理组肺耐药蛋白(LRP)mRNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,LRPmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组LRP mRNA表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论斑贞1号、TMP和5-FU联合逆转SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与LRP基因相关,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。

多药耐药相关蛋白基因在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白基因(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)基因和增值细胞抗原Ki-67在肺癌中的表达及相关性。方法应用免疫组织化学方法,检测110例肺癌组织和22例其他恶性肿瘤(食管癌、胃癌、膀胱癌等)组织中LRP、MRP1及Ki-67的表达情况,并以其中的23例癌旁组织作比较。结果非小细胞肺癌(NSCLC)中MRP1、LRP表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),小细胞肺癌(SCLC)与癌旁组织无显著性差异(P>0.05)。其他恶性肿瘤组织中其表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。Ki-67在各种肿瘤组织中均呈阳性表达,与LRP、MRP1表达无相关性。结论NSCLC存在广泛的原发性多药耐药现象,耐药基因LRP、MRP1参与了肺癌多药耐药的形成,LRP的表达率最高,可作为一项独立的预警指标,耐药与肿瘤细胞增殖无明显相关性。

阿尔茨海默病低密度脂蛋白受体相关蛋白基因两种多态性研究

目的探讨阿尔茨海默病(AD)低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)基因5’端上游调控区插入序列及外显子3C/T两种多态性。方法应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法,检测了56例晚发AD患者和75例正常老年人的LRP基因两种多态性。结果AD组LRP5’端上游调控区插入序列等位基因频率分别为A10.795和A20.205,A1等位基因频率显著高于对照组(X2=8.43,P<0.01);基因外显子3等位基因频率分别为C0.786和T0.214,C等位基因频率显著高于对照组(X2=4.48,P<0.05)。AD与LRP基因5’端上游调控区插入序列多态中的等位基因A1正关联(OR=2.28,P<0.01),与LRP基因外显子多态中的等位基因C正关联(OR=1.83,P<0.05),与等位基因T负关联(OR=0.55,P<0.05)。结论LRPA1等位基因可能是AD发病的危险因素,LRP基因外显子3C等位基因可能促进AD的发病,T等位基因可能具有保护作用。