汉族人群LRRK2基因突变携带者与非携带者患家族性帕金森病的风险预测

目的 探索汉族人群LRRK2基因突变携带者与非携带者患家族性帕金森病(PD)风险差异。方法 收集58例家族性PD患者为试验组,58例非PD患者为对照组,磁共振成像(MRI)确认分组结果;抽取外周血,提取基因组DNA作为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并以产物进行Sanger测序,分析结果。结果 p.G2385R基因突变型在汉族人群中所占的比例最高,且试验组LRRK2基因p.G2385R位点突变型频率分布显著高于对照组(P<0.05),试验组p.G2385R突变型频率高出对照组2.21倍,而其他3组无显著性差异(P>0.05)。结论 4类突变位点中,p.R1441C、p.G2019S和p.K616R 3突变位点对家族性PD风险预测是无意义突变;而p.G2385R突变型与家族性PD具有相关性,且该位点具备预测家族性PD患病的潜在价值。

MicroRNA-205通过甲基化修饰调节帕金森病多巴胺神经元LRRK2表达

目的探讨MicroRNA-205(miR-205)如何调节LRRK2表达从而在帕金森病中发挥作用。方法诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)成为PD细胞模型,检测PD细胞模型中miR-205以及LRRK2的表达量;转染前体miR-205,使miR-205过表达,随后q-PCR方法检测miR-205过表达PD模型细胞中LRRK2转录水平变化;转染miR-205抑制剂,随后q-PCR方法检测miR-205抑制PD模型细胞中LRRK2转录水平变化。结果相较于正常细胞(1.02±0.14),PD模型细胞中miR-205的表达水平明显降低(0.59±0.03),差异有统计学意义(P=0.017);而相较于正常细胞(1.00±0.11),PD模型细胞中LRRK2水平上调(1.50±0.10),差异有统计学意义(P=0.033);相较于正常细胞(1.02±0.11)以及PD模型细胞(1.47±0.12),使用前体miR-205处理SH-SY5Y细胞可持续抑制LRRK2蛋白表达约50%(0.87±0.11),差异有统计学意义(P=0.020);相较于正常细胞(1.02±0.11)以及PD模型细胞(1.47±0.12),转染miR-205抑制剂后可诱导神经元培养物中LRRK2蛋白表达的剂量依赖性上调(1.87±0.11),差异有统计学意义(P=0.036)。结论miR-205可抑制LRRK2的转录水平。过表达miR-205可能成为LRRK2-PD的治疗手段。

血清MIF、LRRK2表达联合UPDRS评分对帕金森病的诊断价值及其与疾病分期的关系分析

目的探讨血清巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、LRRK2表达联合帕金森病综合评分量表(UPDRS)评分对帕金森病的诊断价值及其与疾病分期的关系分析。方法前瞻性选取2019年7月至2022年8月南通市第一人民医院收治的100例帕金森病患者作为研究对象,纳入研究组,并纳入同期年龄、性别配对的100名体检健康者作为对照,纳入对照组。比较帕金森病患者和对照组的外周血MIF、LRRK2的表达;采用Logistics回归模型分析帕金森病发生的独立危险因素;明确MIF mRNA、LRRK2 mRNA和UPDRS评分诊断帕金森病的临床价值;分析MIF mRNA、LRRK2 mRNA、UPDRS评分与帕金森病疾病分期的相关性。结果帕金森病患者MIF mRNA、LRRK2 mRNA、UPDRS评分均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着疾病分期的增加MIF mRNA、LRRK2 mRNA、UPDRS评分亦明显更高(P<0.05)。多因素分析结果显示,MIF mRNA、LRRK2 mRNA、UPDRS评分是影响帕金森病发生的独立危险因素(OR=1.954,95%CI=1.354~3.564;OR=2.364,95%CI=1.523~4.654;OR=2.575,95%CI=1.654~5.654,P<0.05)。MIF mRNA、LRRK2 mRNA联合UPDRS评分诊断帕金森病的敏感度和特异度达到93.54%和85.45%,曲线下面积为0.897;MIF mRNA、LRRK2 mRNA、UPDRS评分的表达均与帕金森病患者病情分期密切相关(r=0.49、0.52、0.54,P<0.05)。结论MIF和LRRK2的高表达可作为诊断帕金森病的可靠血清标志物,且可检测MIF和LRRK2的表达及联合UPDRS评分对帕金森病疾病分期做出可靠评估。

敲除LRRK2基因的PC12细胞移植对帕金森病大鼠的疗效

目的探究经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞移植至帕金森病模型大鼠右侧纹状体的治疗效果及作用机制。方法用CRISPR/Cas9单载体慢病毒转染PC12细胞构建敲除LRRK2基因的细胞株,Western blot法检测敲除效率;颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型,通过立体定向注射移植敲除LRRK2基因的PC12细胞至帕金森病大鼠右侧纹状体,移植1周后采用旷场实验、爬杆实验检测对大鼠的运动功能的改变,用Western blot法、免疫组化检测纹状体区凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax以及酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化探索经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞对PD模型大鼠运动症状改善的作用机制。结果右侧纹状体PC12细胞移植治疗1周后,与帕金森病组大鼠比较,移植敲除LRRK2基因的PC12细胞的PD大鼠的旷场实验运动总路程延长、运动平均速度增大及爬杆试验评分降低(P<0.05);右侧纹状体中TH的表达量增多(P<0.05);右侧状体区中细胞凋亡的发生率降低(P<0.05),且上述指标的改善程度均高于移植正常PC12细胞的帕金森病大鼠(P<0.05)。结论经过LRRK2敲除的PC12细胞移植后对帕金森病模型大鼠的运动功能有更好的疗效,其潜在的作用机制可能是减少移植区中细胞凋亡的发生率来增强其疗效,基因修饰LRRK2的细胞移植有望成为帕金森病运动功能的治疗手段之一。

新疆维吾尔族和汉族帕金森病LRRK2基因S1647T多态性研究

目的遗传因素在帕金森病(Parkinson's disease,PD)的发病因素中起重要作用。其患基因及突变位点具有明显的地域和种族差异。文中研究LRRK2基因多态性位点S1647T与新疆地区维吾尔族和汉族PD患者发病的关系,探讨2个民族S1647T多态性的分布差异。方法对354例临床确诊为帕金森病的患者(汉族183例,维吾尔族171例)和340名正常对照者(汉族180名,维吾尔族160名)进行病例对照研究,应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(polymerasechain reaction-restriction length fragment polymorphism,PCR-RFLP)方法对LRRK2基因S1647T位点的基因型和等位基因频率进行分析,并采用DNA直接测序法对检测结果进行验证。结果按民族分层,汉族PD组中TA+AA基因型频率和A等位基因频率高于汉族对照组(χ2=6.441,P=0.04和χ2=5.389,P=0.02),携带A等位基因个体发生PD的风险高于未携带者(OR=1.436 95%CI:1.058～1.950)。维吾尔族PD组和维吾尔族对照组基因型频率和等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。将汉族PD组和维吾尔族PD组基因型频率和等位基因频率比较,差异有统计学意义(χ2=6.127,P=0.047和χ2=4.299,P=0.038),汉族携带A等位基因个体发生PD的风险高于维吾尔族个体(OR=1.387,95%CI:1.018～1.89)。PD组和对照组中基因型频率和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。按年龄和按性别分层,比较各组间基因型频率和等位基因频率,差异均无统计学意义(P>0.05)。对等位基因及基因型进行多因素Logistic回归分析,结果显示不同民族A等位基因及AA和TA基因型有差异(P<0.05),其他因素均无影响。结论维吾尔族和汉族LRRK2基因S1647T多态基因型频率及等位基因频率存在差异,其A等位基因可能增加新疆地区汉族人群的PD发病风险,而与维吾尔族人群PD的发生无关。

家族性帕金森病相关遗传基因LRRK2的差异性研究

目的研究汉族人群家族性帕金森病的LRRK2基因的突变情况,并考察其存在的遗传差异性。方法收集21例家族性帕金森病患者,其中有3例来源于同一家族。采集外周血,提取基因组DNA作为模板,扩增LRRK2基因上的p.K616R、p.R1441G、p.R1441C、p.Y1699C、p.G2019S、p.I2020T及p.G2385R 7种突变位点的目标区域,扩增产物经电泳验证后进行Sanger测序,分析LRRK2基因的7种突变类型在样本中的分布情况。采用123I-IMP SPECT分析来自同一家族的3例帕金森病患者的脑缺血情况。结果 Sanger测序结果显示,p.G2385R突变型有5例(23.8%),p.R1441G突变型有3例(14.3%),p.K616R突变型有2例(4.76%),而其他突变型如p.G2019S、p.R1441C、p.Y1699C及p.I2020T则未检出(0%)。123I-IMP SPECT结果显示,对于来源于同一家族的3例帕金森病患者,患者2d的123I123I-IMP SPECT结果未见异常;患者1h的123I-IMP SPECT结果则显示患者双侧额叶区血流量明显下降;患者2b的123I-IMP SPECT结果则显示患者右侧基底节区血流量明显下降。结论首次在中国人群中发现来自一个家族的3例携带p.R1441G突变基因的帕金森患者,其他基因突变型的分布频率也与以往其他地区和种族的研究结果存在明显差异,证实家族性帕金森病携带的LRRK2基因突变型及突变频率均存在区域和种族的差异性。携带p.R1441G突变基因的帕金森患者与先天性帕金森病特征存在差异,原因尚不明确。

亚洲人群LRRK2基因rs34778348位点的多态性与帕金森病发病风险的meta分析

目的运用Meta分析方法综合评价富亮氨酸重复激酶2（leucine—rich repeat kinase2，LRRK2）基因中rs34778348位点的多态性与亚洲人群帕金森病（Parkinson disease，PD）发病的关系。方法检索PubMed、MedEne、Embase和中国生物医学文献数据库等数据库中2012—10以前已经公开发表的内容涉及LRRK2基因中rs34778348位点基因多态性与亚洲人群PD发病率的病例对照研究，应用RevMan5．1软件进行统计分析。结果共11篇以亚洲人群为研究对象的内容涉及LRRK2基因中rs34778348位点基因多态性与亚洲人群PD发病率的PD病例对照研究纳入分析，PD组4714例，对照组5048例。合并统计，基因型（GA＋AA）合并／GG的OR值为2．77（95％CI为2．32～3．30，P〈0．01）；等位基因A／G的OR值为2．31（95％CI为1．91～2．81，P〈0．01）。结论LRRK2基因rs34778348位点的基因多态性与亚洲人群PD发病率具有相关性。

序列特异性引物联合RT-PCR在LRRK2基因多态性分型中的应用

目的建立帕金森病(PD)相关基因LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的新检测方法。方法设计序列特异性引物,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法,对已知基因型的标准品进行分型检验;检测100例未知基因型的PD样品,并用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)的方法对待检样品基因型进行验证。结果标准品分型结果完全正确,待检的100例样品分型结果与PCR-RLFP分型结果完全吻合。结论序列特异性引物联合实时荧光定量PCR可成功实现对LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的基因型分型。

帕金森病相关蛋白质LRRK2在脑中的表达分布与定位分析

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2(leucine-rich repeat kinase 2)基因突变引起.原核表达和纯化得到LRRK2多肽与GST的融合蛋白,免疫新西兰雄兔,得到了anti-LRRK2兔多克隆抗体.抗体用途分析实验表明,自制的anti-LRRK2兔多克隆抗体可用于Western印迹,免疫组织化学,免疫细胞染色等实验.利用自制的抗体,Western印迹证明,LRRK2在大鼠脑主要神经解剖学部位均有表达.免疫荧光双染色的结果表明,LRRK2定位于线粒体.本研究对了解LRRK2在PD中的分子生物学功能具有重要的意义.

LRRK2基因多态性与帕金森病相关性的研究进展

LRRK2基因被认为是引起帕金森病易感性最常见的突变基因,也是最常见的家族和散发性帕金森病的原因,其主要为常染色体显性遗传。帕金森病在目前尚不能被治愈,只能在一定程度上控制其进展。为此,从该病易感基因常见突变位点的角度出发进行了一定程度的探索,期待为该病的治疗提供新思路。

新疆和田地区维吾尔族帕金森病LRRK2基因S1647T多态性分析

目的研究LRRK2基因多态性位点S1647T与新疆和田地区维吾尔族(维族)帕金森病(PD)的关系。方法对124名临床确诊为PD的患者和130名正常对照者进行病例-对照研究,应用PCR聚合酶链反应及DNA测序法分析LRRK2基因第34外显子S1647T位点的多态性。结果病例组和对照组之间以及按年龄和按性别分层的各亚组间基因型频率和等位基因频率比较均无差异(P>0.05)。结论 LRRK2基因S1647T多态与维族人群PD的发生可能无关。

帕金森病中LRRK2的功能

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2基因的突变引起.总结了LRRK2功能研究的最新成果,分为分子遗传学、表达分布和亚细胞定位、突变体的功能、蛋白质化学、蛋白质动力学、相互作用蛋白和底物、信号传导途径、与突起和突触囊泡蛋白的关系、结构分析、病理和临床特征等10个方面进行论述.指出已有的研究初步阐明了LRRK2突变导致PD的发病机制,提出了治疗PD的新策略,并对未来研究进行展望.

LRRK2基因核心启动子的预测

目的运用生物信息学方法对LRRK2基因的启动子区域进行预测,以指导LRRK2基因核心启动子的克隆,为LRRK2基因的转录调控机制的研究奠定基础。方法在数据库中查询LRRK2基因相关的序列信息,运用多种在线软件对LRRK2基因的转录起始位点、第一个外显子和启动子进行预测,并对预测结果进行综合分析。结果将LRRK2基因脑组织主要剪切本(ENST00000298910,相当于NM_198578)的启动子定位于-803～-1区间。结论 LRRK2基因主要剪切本(ENST00000298910)的启动子区间可能定位于-803～-1区间。

LRRK2与帕金森病

LRRK2基因是家族遗传性帕金森病8型(PARK8)的致病基因。其编码蛋白LRRK2具有蛋白激酶活性,GTP酶活性,并作为支架蛋白参与蛋白质相互作用。现发现20余个LRRK2基因突变与家族性及散发性帕金森病相关,突变携带者具有典型帕金森病临床表现。突变的LRRK2蛋白致帕金森病机制仍不十分明确,可能与蛋白激酶介导的细胞毒性,细胞凋亡,线粒体功能障碍,氧化应激及泛素蛋白酶体系统异常相关。LRRK2及其突变蛋白的功能确立具有潜在的临床治疗前景。

帕金森病患者PINK1 LRRK2基因单核苷酸多态性分析

目的 探讨PINK1基因rs45530340位点及LRRK2基因rs1491942位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与淮海地区汉族人群晚发散发性帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）的相关性.方法 收集152例晚发散发性PD患者和160例年龄和性别相匹配的健康对照者,入组者均来自淮海地区汉族人群.提取外周血全基因组DNA,应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术扩增包含多态位点的目的 基因片段,通过琼脂糖凝胶电泳（AGE）检测PCR产物.对PCR产物分别用DNA限制性内切酶NlalV和SmlI进行酶切,用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、硝酸银染色检测酶切产物,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）技术分析基因型,计算所有研究对象两个SNP位点的基因型频率和等位基因频率.结果 （1）PINK1基因rs45530340位点基因型和等位基因在晚发散发性PD组和正常对照组中的分布无统计学差异（基因型：χ2=1.572,P=0.456;等位基因：χ2=1.318,P=0.251）.（2） LRRK2基因rs1491942 位点基因型和等位基因在晚发散发性PD组与正常对照组中的分布差异有统计学意义（基因型：χ2=6.802,P=0.033;等位基因C：χ2=7.448,P=0.006,OR=1.571,95%CI=1.135~2.176）.结论 （1）PINK1基因rs45530340 多态位点可能不是淮海地区汉族人群晚发散发性PD患者的危险因素.（2）LRRK2基因rs1491942多态位点C等位基因可能是淮海地区汉族人群晚发散发性PD患者的危险因素.

LRRK2基因与帕金森病

帕金森病是一种复杂的多因素共同作用的神经变性性疾病,遗传因素和环境因素被认为是发病的重要原因。越来越多的研究发现遗传因素在其发病中起着重要作用,而最近LRRK2基因的发现更加确定了遗传因素在帕金森发病中不可忽视的作用。本文对LRRK2基因以及LRRK2基因在帕金森病中的研究做一综述。

帕金森致病基因LRRK2的研究进展

帕金森病(PD)是继阿尔茨海默病的第二大神经退行性疾病。随着对PD发病机制的研究深入,发现遗传因素在PD发病中起着越来越重要的作用。其中LRRK2不仅是常染色体显性遗传PD最常见的原因,且在散发PD发病中起重要作用。本文对LRRK2基因的基本特征、功能特点、各种突变形式及该基因致PD发病机制的研究进展进行综述。

LRRK2活化Rho GTPases信号通路在小胶质细胞吞噬α-突触核蛋白中的作用机制

目的探讨小胶质细胞吞噬α-突触核蛋白的分子机制。方法构建α-Syn寡聚体诱导BV-2细胞活化模型,免疫荧光检测BV-2细胞内α-Syn阳性包涵体的数量。Western blot检测BV-2细胞LRRK2蛋白的表达。Pull down检测BV-2细胞Rac1、Cdc42、RhoA的活性。结果与对照组相比,α-Syn寡聚体诱导BV-2细胞内α-Syn阳性包涵体数量增加,LRRK2蛋白表达增加及Rac1、Cdc42、RhoA活性增加。结论小胶质细胞对α-突触核蛋白的吞噬与LRRK2活化Rho GTPases信号通路相关。

14-3-3γ过表达通过抑制LRRK2的去磷酸化防护鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤

目的探讨14-3-3γ蛋白对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法用腺病毒载体携带人14-3-3γ基因(Ad/14-3-3γ)感染PC12细胞,基因转移成功后,用鱼藤酮处理细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光双标法检测14-3-3γ蛋白与LRRK2(leucine-rich repeat protein kinase 2)的相互作用,免疫印迹技术检测14-3-3γ蛋白及LRRK2的Ser910及Ser935磷酸化水平。结果 Ad/14-3-3γ基因转入PC12细胞后14-3-3γmRNA及蛋白均能过表达。14-3-3γ过表达能增加LRRK2的Ser910及Ser935磷酸化水平及与LRRK2的相互作用,降低PC12细胞的凋亡率(正常对照组4.26%±1.39%,鱼藤酮组36.20%±2.18%,Ad/14-3-3γ组12.78%±2.96%)。结论 14-3-3γ蛋白过表达可能通过抑制LRRK2的去磷酸化,保护鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤。

LRRK2在肾癌细胞中的表达及其对迁移能力的影响

目的探讨LRRK2蛋白在人肾癌细胞ACHN中的表达及其对迁移能力的影响。方法 Westernblot检测人肾小管上皮细胞(HK2)与人肾癌细胞ACHN中LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测HK2与ACHN细胞迁移能力;体外培养ACHN细胞,分别转染pcDNA-LRRK2及LRRK2-siRNA 24 h,收获细胞Western blot检测LRRK2蛋白的表达,小室体外迁移实验检测ACHN细胞迁移能力的改变。结果 ACHN细胞LRRK2蛋白表达量及迁移能力显著高于HK2细胞(P<0.05);质粒转染方法能有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达上调(P<0.05),LRRK2蛋白表达上调可以使ACHN细胞迁移能力增强(P<0.05);脂质体转染方法能够有效介导ACHN细胞LRRK2蛋白表达下调(P<0.05),LRRK2蛋白表达下调能够显著抑制ACHN细胞迁移能力(P<0.05)。结论 LRRK2蛋白表达水平可能与人肾癌细胞ACHN恶性程度及侵袭转移特性有关。