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大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析
被引量:
14
1
作者
许崇波
卫广森
+3 位作者
吴广谋
张立国
冯书章
刘晓明
《畜牧与兽医》
北大核心
1997年第4期154-156,共3页
用内切酶SacⅠ和HindⅢ双酶切大肠杆菌质粒pEWD299,回收505bp的LTB基因片段,再将载体pUC18用SacⅠ和HindⅢ双酶切,最后将pUC18DNA与505bp的LTBDNA进行连接,转化至受体菌DH...
用内切酶SacⅠ和HindⅢ双酶切大肠杆菌质粒pEWD299,回收505bp的LTB基因片段,再将载体pUC18用SacⅠ和HindⅢ双酶切,最后将pUC18DNA与505bp的LTBDNA进行连接,转化至受体菌DH5α中,经SacⅠ/HindⅢ、EcoRⅠ/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1。再将pXLT1进行EcoRⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠKlenow大片段补平、HindⅢ酶切处理,然后与用HicⅡ和HindⅢ酶切的pUC18连接,转化至受体菌DH5α中,经XbaⅠ/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1-1。将质粒pXLT1-1进行核苷酸序列分析。
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关键词
大肠杆菌
LTB基因
基因克隆
核苷酸序列分析
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职称材料
利用重组PCR技术构建大肠杆菌肠毒素LT_B0ST_I融合基因
被引量:
1
2
作者
王莹
周智爱
+1 位作者
李震
曹祥荣
《上海农业学报》
CSCD
2001年第1期39-44,共6页
利用重组PCR技术将从原始菌种中扩增得到的LTB、STI 基因片段连接起来 ,构建了LTB STI 融合基因。并将其克隆到 pUCm T载体上 ,转化到大肠杆菌DH5α中 ,得到克隆T LS ,序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框 ,具有起始密码子AT...
利用重组PCR技术将从原始菌种中扩增得到的LTB、STI 基因片段连接起来 ,构建了LTB STI 融合基因。并将其克隆到 pUCm T载体上 ,转化到大肠杆菌DH5α中 ,得到克隆T LS ,序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框 ,具有起始密码子ATG和终止密码子TAA 。
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关键词
产肠毒素性大肠杆菌
耐热性肠毒素
重组PCR
LTB-STI融合基因
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职称材料
分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒的构建
3
作者
程度胜
韩素文
方继明
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
1991年第3期186-191,共6页
本文构建了分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒,并观察了这3种基因的表达情况。首先将K88亚单位基因克隆入痘苗转移或体PGJP-5中,得到嵌合质粒P_5-K88,将K99和LT-B亚单位基因分别克隆至痘苗转移载体PJ16中,得到重组质粒PJ...
本文构建了分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒,并观察了这3种基因的表达情况。首先将K88亚单位基因克隆入痘苗转移或体PGJP-5中,得到嵌合质粒P_5-K88,将K99和LT-B亚单位基因分别克隆至痘苗转移载体PJ16中,得到重组质粒PJK-9和PLT-B。再经细胞体内同源重组技术,将以上3种基因分别插入到痘苗病毒天坛株的TK基因中,经5-BUdR的选择压力在人TK^--143细胞中挑选TK^-表型病毒,分别以相应的^(32)P标记的基因片段为探针进行杂交筛选重组病毒株。我们得到7株含K99亚单位基因的重组病毒V-K99(Ⅰ~Ⅷ),5株含K88亚单位基因的重组病毒V-K88(Ⅰ~Ⅴ);1株含LT-B亚单位基因的重组病毒V-LTB,ELISA检测结果表明,在以上3种重组病毒感染的人TK^--143细胞培养液和细胞裂解物中均未测出相应的基因表达产物。以上结果表明这3种基因可能不易在痘苗系统内有效表达。
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关键词
K88基因
K99基因
重组痘苗病毒
原文传递
题名
大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析
被引量:
14
1
作者
许崇波
卫广森
吴广谋
张立国
冯书章
刘晓明
机构
解放军农牧大学军事兽医研究所
辽宁省兽医生物药品厂
南京农业大学微生物教研室
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
1997年第4期154-156,共3页
文摘
用内切酶SacⅠ和HindⅢ双酶切大肠杆菌质粒pEWD299,回收505bp的LTB基因片段,再将载体pUC18用SacⅠ和HindⅢ双酶切,最后将pUC18DNA与505bp的LTBDNA进行连接,转化至受体菌DH5α中,经SacⅠ/HindⅢ、EcoRⅠ/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1。再将pXLT1进行EcoRⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠKlenow大片段补平、HindⅢ酶切处理,然后与用HicⅡ和HindⅢ酶切的pUC18连接,转化至受体菌DH5α中,经XbaⅠ/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1-1。将质粒pXLT1-1进行核苷酸序列分析。
关键词
大肠杆菌
LTB基因
基因克隆
核苷酸序列分析
Keywords
E. coli
LT B
gene
gene
cloning
nucleotide sequencing
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
利用重组PCR技术构建大肠杆菌肠毒素LT_B0ST_I融合基因
被引量:
1
2
作者
王莹
周智爱
李震
曹祥荣
机构
南京师范大学生命科学学院
上海市农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《上海农业学报》
CSCD
2001年第1期39-44,共6页
基金
上海市农委科技兴农项目!(农科攻字 94 2 0 3号 )
文摘
利用重组PCR技术将从原始菌种中扩增得到的LTB、STI 基因片段连接起来 ,构建了LTB STI 融合基因。并将其克隆到 pUCm T载体上 ,转化到大肠杆菌DH5α中 ,得到克隆T LS ,序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框 ,具有起始密码子ATG和终止密码子TAA 。
关键词
产肠毒素性大肠杆菌
耐热性肠毒素
重组PCR
LTB-STI融合基因
Keywords
Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC)
Heat labile toxin(LT)
Heat stable toxin(ST)
Recombinant PCR
LT B ST I fusion
gene
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒的构建
3
作者
程度胜
韩素文
方继明
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
1991年第3期186-191,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目
文摘
本文构建了分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒,并观察了这3种基因的表达情况。首先将K88亚单位基因克隆入痘苗转移或体PGJP-5中,得到嵌合质粒P_5-K88,将K99和LT-B亚单位基因分别克隆至痘苗转移载体PJ16中,得到重组质粒PJK-9和PLT-B。再经细胞体内同源重组技术,将以上3种基因分别插入到痘苗病毒天坛株的TK基因中,经5-BUdR的选择压力在人TK^--143细胞中挑选TK^-表型病毒,分别以相应的^(32)P标记的基因片段为探针进行杂交筛选重组病毒株。我们得到7株含K99亚单位基因的重组病毒V-K99(Ⅰ~Ⅷ),5株含K88亚单位基因的重组病毒V-K88(Ⅰ~Ⅴ);1株含LT-B亚单位基因的重组病毒V-LTB,ELISA检测结果表明,在以上3种重组病毒感染的人TK^--143细胞培养液和细胞裂解物中均未测出相应的基因表达产物。以上结果表明这3种基因可能不易在痘苗系统内有效表达。
关键词
K88基因
K99基因
重组痘苗病毒
Keywords
K88
gene
K99
gene
lt-b gene
recombinant vaccinia virus
分类号
R373.12 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析
许崇波
卫广森
吴广谋
张立国
冯书章
刘晓明
《畜牧与兽医》
北大核心
1997
14
下载PDF
职称材料
2
利用重组PCR技术构建大肠杆菌肠毒素LT_B0ST_I融合基因
王莹
周智爱
李震
曹祥荣
《上海农业学报》
CSCD
2001
1
下载PDF
职称材料
3
分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒的构建
程度胜
韩素文
方继明
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
1991
0
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