人AGM区基质细胞对脐血LTC-IC的支持作用

为探讨人主动脉-性腺-中肾(AGM)区基质细胞对脐血长期培养启动细胞(LTC-IC)的造血支持作用,建立了人AGM区基质细胞与脐血CD34+细胞体外长期共培养体系。采用免疫磁珠方法分离人脐血CD34+细胞,接种于已制备好人AGM区基质细胞(hAGMS1-S5)饲养层的24孔板中共培养,同时设无饲养层组作为对照,分别于共培养5、6、7、8周时收获细胞行造血细胞集落培养,并采用极限稀释法(LDA)检测与人AGM区基质细胞共培养后的脐血CD34+细胞的LTC-IC含量。结果表明,无饲养层的对照组培养5周后不再产生造血细胞集落,而以hAGMS1-S5作为饲养层,共培养5周后造血细胞仍具有集落形成能力。hAGMS1-S5维持LTC-IC的作用组间比较有显著性差异(P<0.05),其中以hAGMS3与S4组支持作用最强。LDA检测结果显示,hAGMS3和S4维持LTC-IC的能力无显著性差异(P>0.05);与hAGMS3和S4共培养14天后脐血CD34+细胞中的LTC-IC扩增,分别是达到(176±46)%、(187±52)%,S3和S4两组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:人AGM区基质细胞S1-S5对脐血LTC-IC具有维持作用,特别是hAGMS3和S4两株细胞对脐血LTC-IC具有更好的维持及扩增作用。

细胞因子扩增脐带血CD_(34)^+细胞中LTC-IC的变化

目的 :探讨脐带血造血干细胞的体外扩增及移植最佳时机。方法 :免疫磁珠法分离纯化脐带血 CD+ 3 4细胞 ,在细胞因子 FL T3配体、血小板生成素作用下 ,进行体外扩增 ,流式细胞仪检测培养体系中 CD+ 3 4 细胞数量的变化 ,甲基纤维素法检测 CFU - GM、长期培养起始细胞 ( L TC- IC)。结果 :经过 2周的培养 ,有核细胞扩增 ( 2 1± 5 )倍 ,CD+ 3 4 细胞扩增 ( 9± 3 )倍 ,CFU- GM扩增 ( 164± 5 1)倍 ,L TC- IC扩增 ( 6.5± 3 .1)倍 ,随着体外培养时间的延长 ,有核细胞、CD+ 3 4 细胞和 CFU- GM得到进一步扩增 ,但培养体系中已缺少 L TC- IC。结论 :FL T3配体联合血小板生成素能扩增具有造血干细胞特征的 L TC- IC细胞 ,培养时间以

小鼠胎肝基质细胞体外扩增骨髓来源的LTC-IC

基质细胞是胎肝造血微环境的主要成分 ,参与造血干 祖细胞的自我更新、增殖分化的调控。为了研究小鼠胎肝基质细胞在造血微环境中的功能 ,采用转染SV40大T抗原基因的方法建立了小鼠胚胎期第 12 5天 (Embry onicday 12 5 ,E12 5d)胎肝基质细胞系A4、B3 ,并进一步鉴定基质细胞系的一般细胞生物学特性和造血支持功能。结果 :A4、B3为细胞形态、生长行为以及表面分子表达不同细胞系 ,二者均可维持骨髓源长期培养启动细胞 (Long termculture initiatingcell,LTC IC)至少 4周并且有不同程度的扩增LTC IC能力 ,其中B3扩增LTC IC的能力是A4的8 3倍。外源性细胞因子组合SCF +IL 3 +IL 6+Epo在本实验体系中不影响LTC IC数量的维持和扩增。暗示E12 5d胎肝造血微环境中基质细胞的功能是不同的 。

脐带血中长期培养启动细胞在转染FL和/或TPO基因骨髓基质细胞层上的生长

检测长期培养启动细胞 (LTC IC)含量可反映造血干细胞的存在和变化。用正常人骨髓基质细胞、人骨髓基质细胞系和转基因骨髓基质细胞系做培养底层 ,接种CD34+ 细胞 ,进行连续 8周的长期体外培养。研究结果表明 ,在共转染FL和TPO基因的基质细胞系HFT为培养底层所产生的LTC IC为 3.6 5± 0 .5 8 10 0 0CD34+ 细胞 ,在原代骨髓基质细胞层上所产生的LTC IC为2 .6 5± 0 .76 10 0 0CD34+ 细胞 ,二者在统计学上无显著性意义。结论 :转染FL TPO基因的HFT细胞系可作为LTC

骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究

采用静置贴壁细胞培养法，体外长期培养了胎儿、儿童、成人骨髓基质细胞，时间为６个月，可传至１０代，并观察了成纤维肌样细胞、内皮细胞和巨噬细胞；通过免疫细胞化学染色法，证明了１～３代的骨髓基质肌样细胞Ｖｉｅｍｅｎｔｉｎ为阳性，第Ⅷ因子阴性；采用流式细胞仪检测法，证明了儿童骨髓基质细胞的细胞表型为ＣＤ３３－和ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ＋Ｗ９０，成人骨髓基质细胞为ＣＤ－３３、ＣＤ－３４、ＣＤ＋３８、ＣＤ＋Ｗ９０。 采用体外培养和扩增的脐血造血干细胞的半固体集落形成法，证明了基质细胞能长期维持脐血中的ＬＴＣ－ＩＣ的生存，若加入ＩＬ－６、ＩＬ－３、ＳＣＦ细胞因子的扩增体系，基质细胞对长期维持和扩增ＬＴＣ－ＩＣ的效果更为明显（Ｐ＜０．０１），比无基质细胞的对照组所形成的ＬＴＣ－ＩＣ产率高于２～４倍。表明骨髓基质细胞具有支持造血功能。

脐血造血干/祖细胞体外培养的实验研究

目的 深入了解脐血的造血功能。方法 采用体外半固体甲基纤维素培养法，检测了脐血中造血干细胞和造血祖细胞的含量。结果 经过１４ ｄ 的体外培养，粒单祖细胞集落为（８６±２６）个，多向造血祖细胞集落为（１３１±７１）个。经过８周的体外培养，起始细胞为（８６±２６）个集落。

长期培养起始细胞在不同的基质细胞层上的培养

长期培养起始细胞（ＬＴＣ－ＩＣ）是一群迄今为止经体外培养所获得的最幼稚的造血祖细胞。作者用正常人类骨髓基质细胞以及５株人或鼠的骨髓外纤维细胞作基底层，移种上ＣＤ／ＳＢＡ￣－细胞，进行持续８周的长期培养，获得了人类正常骨髓中的长期培养起始细胞；同时筛选出ＭＲＣ－５细胞株作为支持血细胞生成、分化的理想细胞株。