与宁夏人群强直性脊柱炎关联的新基因淋巴毒素-α(LTA)的识别

淋巴毒素-α(Lymphotoxin-alpha,LTA)基因与系统性红斑狼疮、银屑病及类风湿性关节炎的遗传性有关,但目前还未有关于LTA基因与强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)关联的报道。文章采用病例-对照设计,在宁夏人群中对人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)的Ⅲ类基因约58 kb区域进行了高密度标志的基因组扫描,在33个SNPs及其单倍型中,仅定位于LTA基因中的SNPs组成的TCC单倍型的分布在病例-对照间比较有统计学意义(P=0.0005)。在宁夏群体(病例组:300,对照组:385)中发现,LTA基因中的rs909253 T/C多态性在AS患者中出现的频率显著高于正常对照(28.5%vs 19.7%,P=2×10-6)。结果表明LTA基因变异和AS易感性之间存在相关性,由此识别LTA基因可能与宁夏人群AS关联。

慢性阻塞性肺疾病TNFA和LTA基因等位基因变异分析

目的研究中国北方汉族人群中TNF超家族基因等位基因变异是否与慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关联。方法以50例COPD患者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法研究TNF超家族基因(TNFA和LTA)等位基因变异分布。结果COPD组TNFA基因多态性位点-308G/AAA基因型频率明显高于对照组(P<0.01),OR值为10.756(95%CI为9.875～12.640);COPD组-308G/A多态性位点A等位基因频率明显高于对照组(P<0.01);COPD组LTA基因+252A/G多态性位点AG基因型频率明显高于对照组(P<0.01),OR值为4.373(95%CI为3.301～6.872)。COPD组TNFA基因GG正常基因型和LTA基因AG杂合基因型结合个体频率明显高于对照组(P(0.05)。2组间LTA基因+252A/G多态性位点G等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论中国北方汉族人群LTA基因等位基因变异、TNFA基因多态性变异组合与COPD相关联。

肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立

由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法。肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段。因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19cfu/mL。

慢性阻塞性肺病TNFA和LTA基因等位基因变异分析

目的中国北方汉族人群中研究TNF超家族基因等位基因变异是否与慢性阻塞性肺病(COPD)相关联。方法以50例COPD患者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法研究TNF超家族基因(TNFA和LTA)等位基因变异分布。结果TNFA基因多态性位点-308G/ACOPD组和对照组比较AA基因型频率分布差异显著(χ2=7.111,P<0.01),OR值为10.756(95%CI为9.875～12.640)。-308G/A多态性位点A等位基因频率差异显著(χ2=8.219,P<0.01);LTA基因+252A/G多态性位点AG基因型频率分布COPD组与对照组比较差异显著(χ2=11.974,P<0.01),OR值为4.373(95%CI为3.301～6.872)。LTA基因+252A/G多态性位点G等位基因频率差异不显著。在COPD患者组中TNFA基因GG正常基因型和LTA基因AG杂合基因型结合个体频率比对照组显著增高(χ2=4.10,P<0.05)。结论中国北方汉族人群LTA基因等位基因变异、TNFA基因多态性变异组合与COPD相关联。

沉默CXCL2基因对LTA诱导的炎性MAC-T细胞的作用

CXCL2基因可影响多种疾病并介导炎症和自身免疫的发生,但其在奶牛乳房炎中的作用鲜有报道。为初步揭示CXCL2基因在奶牛乳房炎中发挥的作用,本试验通过转染siRNA特异性序列构建CXCL2基因沉默模型,采用LTA刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)构建奶牛乳房炎细胞模型,并通过CCK-8法检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞活力的影响;EdU染色法检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞增殖水平的影响;流式细胞术检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞凋亡水平的影响。结果显示,CXCL2基因沉默可使炎性MAC-T细胞活力和增殖能力增加,细胞凋亡数减少。CXCL2基因沉默可通过提高细胞活力、促进细胞增殖和抑制细胞凋亡来减轻LTA诱导的MAC-T细胞的炎症反应,但具体的分子机制仍有待进一步研究。

猪大肠杆菌热敏肠毒素A亚基基因的克隆及核苷酸序列分析

本文克隆了含猪源肠毒素大肠杆菌ＬＴＡ基因的６．７ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段，进行了限制酶图谱分析和核苷酸序列测定，共测定了１０９３ｂｐ的核苷酸序列，其中ＬＴＡ亚基基因编码区长７６５ｂｐ，编码２５４个氨基酸的蛋白质；计算分子量为２９６５２；氨基酸组成表明，ＬＴＡ富含带电荷的精氨酸、天冬氨酸和谷氨酸，同时酪氨酸和苯丙氨酸也异常的高。

大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基K63突变体表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

采用PCR方法从产肠毒素大肠杆菌（ETEC）44815菌株基因组中扩增不耐热肠毒素A亚基（LTA）编码基因，并将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因插入到含有人CD5信号肽序列的pcDNACD5sp真核表达载体中，构建成pcDNACD5sp／LTA分泌性真核表达载体，然后采用定点突变方法将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基第63位的丝氨酸改变为赖氨酸，构建成pcDNACD5sp／LTAK63突变体，经磷酸钙介导将pcDNACD5sp／LTAK63质粒转染HEK293T细胞进行表达。结果表明：试验克隆的大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因与GenBank中大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因序列相比，碱基序列、氨基酸序列同源性均达99％；表达产物经Western-blot检测，结果说明构建的含有人CD5信号肽的LTAK63基因能够在真核细胞中进行分泌性表达。

双歧杆菌脂磷壁酸对衰老小鼠胸腺Bcl-2、Fas基因表达的影响

目的研究双歧杆菌脂磷壁酸对D-半乳糖致衰老小鼠胸腺组织Bcl-2、Fas基因表达的影响,探讨双歧杆菌脂磷壁酸的抗衰老机制。方法用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,以双歧杆菌脂磷壁酸治疗,反转录-聚合酶链反应法观察小鼠胸腺Bcl-2、Fas基因mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组Bcl-2基因表达降低,Fas表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组Bcl-2基因表达升高,Fas表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论双歧杆菌脂磷壁酸能降低衰老小鼠Fas表达水平,增加Bcl-2表达,具有抗衰老作用。