鸭LXRα基因表达与肉质和血清生化指标的相关性

为探明鸭LXRα基因的功能并为该基因在鸭育种中的运用提供参考,采用实时荧光定量PCR法检测樱桃谷鸭LXRαmRNA的组织表达谱,分析LXRαmRNA表达水平与樱桃谷鸭肉质和血清生化指标的相关性。结果表明:胸肌pH、失水率、嫩度、肌内脂肪和水分等肉质指标在公、母鸭间均未达到显著差异(P>0.05),血清中的总蛋白、球蛋白、甘油三酯和总胆固醇公鸭显著高于母鸭(P<0.05);LXRαmRNA在肝脏等11个组织中均存在不同程度的表达,在肝脏中表达量最高;LXRαmRNA表达量与甘油三酯和总胆固醇含量呈极显著正相关(P<0.01),与其他血清指标和肉质指标的相关性不显著(P>0.05)。鸭LXRα基因可作为脂质性状选择的候选基因。

LXRα-shRNA真核表达质粒的构建及抑制LXRα表达的有效序列筛选

目的构建和筛选对肝X受体α(LXRα)mRNA和蛋白有抑制作用的LXRα质粒。方法从NCBI网站获得人的LXRαcDNA序列,根据RNA干扰设计原则,设计三条理论上最佳的siRNA序列,相应的双链DNA插入pGenesil-1.1载体中,经酶切和测序鉴定符合设计要求后,用转染试剂PolyJetTM将三条质粒转染至HepG2.2.15细胞中并观察转染效果。然后用RT-PCR和Western印迹方法分析各组LXRα的表达,筛选出干扰效率最佳的质粒。结果三个质粒经测序分析与设计的序列完全一致,酶切凝胶电泳证实质粒构建成功。三个质粒均能抑制LXRαmRNA和蛋白的表达,与shRNA-LXRα2和shRNA-LXRα3质粒比较shRNA-LXRα1质粒表达更低。结论成功构建了LXRαRNAi表达载体,且三条质粒均能高效抑制转染细胞中LXRα的表达,其中第一条质粒shRNA-LXRα1干扰效率最好,从而为脂肪肝的治疗提供了新的方法和材料。

藏猪肝X受体(LXRs)基因PCR-RFLP多态性分析

LXRα和LXRβ基因是猪肌肉发育和脂肪沉积的重要候选基因。本研究利用PCR-RFLP技术测定了112头藏猪的LXRα-BslI和LXRβ-AciI多态性。结果显示,藏猪群体中LXRα-BslI有CC、CG和GG3种基因型,基因型频率分别为0.4286、0.4643和0.1071;LXRβ-AciI有TT、TC和CC3种基因型,基因型频率分别为0.1964、0.5179和0.2857;与瘦肉型猪基因型分布差别较大。推测可能与藏猪肌肉和脂肪发育遗传特点有关。

基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和LXRα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3-h FXR和EcRETK-Luc、p CMX-FLAG-h LXRα和p GL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果 1根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞;2根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,最终分别选择1∶1、2∶1和2∶1;3模型中,报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长;4仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z'值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

土鳖虫抗兔高胆固醇血症模型内参基因的评估及应用

以60只雄性哈尔滨大白兔(Leporidae)制备土鳖虫(Eupolyphaga steleophaga)抗兔高胆固醇血症模型,使用GeNorm、BestKeeper、NormFinder、ΔCt和RefFinder算法综合评估9个常用内参基因(Actb、B2m、 Eef1a1、Gapdh、Hprt1、Ppia、 Rpl5、Sdha、Ywhaz)模型肝脏表达稳定性,应用最稳定内参基因标准化肝Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因在不同处理组mRNA表达。结果表明,哈白兔可制备土鳖虫抗兔高胆固醇血症模型,模型中2个最稳定内参基因为Gapdh和B2m;与高胆固醇血症组相比,各治疗组肝Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因mRNA表达显著上调(P<0.05)。评估所获最稳定内参基因,为实时定量PCR技术研究该模型机制奠定基础;土鳖虫可降低高胆固醇血症兔胆固醇水平,上调Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因表达。

过表达LXRα和RXRA对HepG2全基因组转录的影响

LXRα(Liver Xreceptorα)是一种氧甾醇核受体在免疫和脂类代谢等生物过程中发挥重要作用,为了进一步探究LXRα的生物学功能,本研究对LXRα和RXRA共同过表达的HepG2细胞进行了全基因组转录分析。在HepG2细胞中LXRα和RXRA共同过表达导致451个基因发生差异表达(p<0.05)其中有213个基因表达上调,221个基因表达下调,通过GO(Gene ontology)功能和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomics)通路基因富集分析发现这些基因参与调控化合物代谢、转录和免疫防御等生物过程。此外还发现在HepG2细胞中,LXRα和RXRA过表达也导致细胞死亡和凋亡相关基因的部分沉默或激活,证明LXRα也参与调控细胞死亡和凋亡。本研究首次在HepG2细胞中通过同时过表达LXRα和RXRA分析LXRα的靶基因及其所参与的生物过程和信号通路,为后续LXRα的功能发掘和相关疾病的药物开发和治疗提供了理论依据。