LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响

目的观察LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,分别构建LYRM1基因过表达细胞株(LYRM1-pcDNA3.1/myc-His B)和空载对照细胞株(pcDNA3.1/myc-His B);实时定量RT-PCR验证转染情况;RT-PCR检测诱导分化成熟后的线粒体代谢酶HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C基因表达水平。结果 RT-PCR结果证实LYRM1质粒转染成功;与空载对照组比较,LYRM1过表达组HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C mRNA表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论 LYRM1基因过表达下调了3T3-L1脂肪细胞中线粒体的代谢关键酶基因表达水平,可能参与调节脂肪细胞线粒体的代谢。

人类肥胖相关新基因LYRM1的克隆及其生物信息学分析

目的克隆人类肥胖相关新基因LYRM1,并对其进行初步的生物信息学分析。方法以人网膜脂肪组织为模板,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,并将其克隆到TA克隆载体,RT-PCR法鉴定并测序。利用一系列生物信息学软件或数据库初步分析预测LYRM1基因及其编码蛋白的基因结构、染色体定位、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。结果扩增出包含LYRM1基因开放阅读框的cDNA片段,采用RT-PCR及测序方法证实成功克隆出目的片段。生物信息学分析显示,LYRM1基因cDNA全长1589bp,开放阅读框长369bp,编码122个氨基酸,相对分子质量13270;定位于染色体16p11.2区域,含4个外显子和3个内含子。蛋白序列分析显示LYRM1基因编码蛋白无跨膜螺旋结构,为一非分泌蛋白。亚细胞定位分析提示其定位于胞核的可能性较大,蛋白结构域分析提示N端存在一LYR结构域,可能参与线粒体功能及能量代谢。蛋白序列比对提示LYRM1基因编码蛋白相对保守。结论LYRM1基因的成功克隆及生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。

人类肥胖相关新基因LYRM1在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化

【目的】观察LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中表达水平的变化。【方法】体外培养人前体脂肪细胞,采用RT-PCR及Western-Blot技术检测LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化不同阶段(前体脂肪细胞;0、2、6、12 d)核酸及蛋白水平的表达变化。【结果】LYRM1基因在分化第2 d(Day2)时核酸及蛋白表达水平均明显上调,与各时段的表达水平差异有显著性(P<0.01),其余各组之间差异无显著性(P>0.05)。【结论】初步揭示了LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化趋势。

LYRM1基因过表达对骨骼肌细胞活性氧的影响

目的探讨LYRM1基因过表达对骨骼肌细胞活性氧簇（ROS）生成的影响。方法培养大鼠骨骼肌细胞株（L6），分别以pcDNA3．1及LYRM1-pcDNA3．1转染IJ6，构建空载对照细胞株（空载对照组）及过表达LYRM1基因细胞株（LYRM1基因过表达组），筛选、验证细胞株LYRM1的表达。诱导M分化成熟后以H2-DCFDA探针孵育，荧光显微镜下观察ROS的荧光强度，流式细胞仪定量测定ROS的生成变化。结果LYRM1基因过表达组荧光强度明显强于空载对照组；LYRM1基因过表达组荧光值为24．8933±4．4574，空载对照组荧光值为13．1512±0．7347，2组比较差异有统计学意义（t=24．12，P=0．00）。结论LYRM1基因在骨骼肌细胞中过表达可显著增加其ROS的产生，提示LYRM1基因过表达可影响细胞线粒体功能，造成线粒体损伤。

LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达

【目的】构建LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体,进而观察LYRM1基因编码蛋白在细胞内的定位情况。【方法】运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N2,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的表达情况。【结果】PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。激光共聚焦显微镜下观察到pEGFP-N2转染的细胞中绿色荧光均匀分布于整个细胞,而pEGFP-LYRM1转染的细胞中绿色荧光主要集中在细胞核区域。【结论】成功构建了LYRM1绿色荧光蛋白融合载体,LYRM1编码蛋白在细胞中定位于胞核中。

贵州黑山羊LYRM1基因生物信息学及组织表达分析

采用RT-PCR的方法对贵州黑山羊LYRM1基因进行了克隆,并对该基因的编码区序列进行生物信息学分析,利用qRT-PCR的方法检测LYRM1基因在贵州黑山羊不同组织中mRNA的相对表达量以及在不同月龄的时序表达。结果:黑山羊LYRM1基因的编码区全长369 bp,编码122个氨基酸,编码蛋白分子质量为14.4 kDa,理论等电点为9.73,不稳定系数为49.48,为不稳定蛋白;与GenBank数据库中提供的山羊LYRM1基因的编码区序列匹配度为99%,存在2个碱基的突变,分别为第177位和242位;通过LYRM1基因系统进化树得知,黑山羊与牛的进化距离较近,与斑马鱼进化距离较远。qRT-PCR结果显示LYRM1基因在贵州黑山羊7个组织中均有表达,在脂肪组织的表达量最高,背最长肌中的表达量最低;时序表达结果表明,LYRM1基因在黑山羊脂肪组织的整体表达趋势为先增加再减少,6月龄的表达量最高,7日龄最低。本试验成功克隆了黑山羊LYRM1基因编码区并进行了生物信息学分析,且检测了其在黑山羊不同组织中的表达以及在脂肪组织中的时序表达,为深入研究LYRM1基因功能奠定基础。