乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞凋亡及bcl-2、bax表达和caspase-3活性的影响

目的:探讨不同浓度乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡和bcl-2、bax表达及caspase-3活性的影响。方法:采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型,分别用浓度为1.50%、2.50%和4.25%的L-PDS与HPMC共同培养,同时设对照组。采用流式细胞术检测HPMC凋亡,采用RT-PCR法测定bcl-2及bax mRNA的表达,采用免疫荧光法检测caspase-3的活性。结果:与对照组比较,L-PDS各组HPMC凋亡率增加,bcl-2 mRNA的表达降低,bax mRNA表达升高,caspase-3活性增加,上述指标变化中2.50%及4.25%L-PDS组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),4.25%L-PDS组与2.50%L-PDS组比较差异也有显著性(P<0.05),而1.50%L-PDS组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:L-PDS可诱导HPMC凋亡,其机制可能是通过对bcl-2及bax mRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现。

丙酮酸盐腹透液保护中性粒细胞一氧化氮的生成

目的 研究以丙酮酸盐替代乳酸盐作缓冲碱的酸性高糖腹透液 (PDS)对人外周血中性粒细胞(PMN)功能的影响 ,探讨丙酮酸盐腹透液 (P PDS)优良生物相容性的作用机制。方法 将PDS的缓冲碱分为乳酸盐和丙酮酸盐 2种 ,分别配制成酸碱度 (pH)为 5 .2和7.4及葡萄糖浓度为 1.5 %和 4.2 5 %等 8种 ,并以Han ks’平衡盐溶液 (HBSS ,pH 7.4)为对照 ,采用紫外分光法 ,分别测定各种不同 pH、不同葡萄糖浓度和不同缓冲碱的PDS对PMN产生一氧化氮 (NO)功能的影响。结果 酸性和高糖对PMN产生NO的功能有明显的抑制 ;而且葡萄糖浓度愈高对PMN功能的抑制愈明显。但是在相同葡萄糖浓度 ,不论 pH为 5 .2或 7.4,P PDS均较乳酸盐腹透液 (L PDS)显著改善PMN产生NO的功能。同时 pH 7.4的P PDS较HBSS明显减轻高糖抑制PMN产生NO的功能。结论 丙酮酸盐作缓冲碱能显著减轻非生理性PDS对细胞的毒性作用 ,保护细胞的功能 ,提高PDS的生物相容性。

氨基胍对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤及血管内皮生长因子表达的影响

目的研究氨基胍(AG)对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致人腹膜间皮细胞(HMr SV5)损伤及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用人腹膜间皮细胞株HMr SV5为体外实验模型,分为无血清DMEM培养液对照组、L-PDS组(2.5%L-PDS)、L-PDS+AG组(2.5%L-PDS+10 mmol/L AG)、单纯AG组(终浓度10 mmol/L)。各组以上不同干预因素与HMr SV5细胞共孵育。MTT法检测各组细胞增殖、评估细胞活力,Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF蛋白及m RNA的表达。结果 MTT试验表明,L-PDS组OD值为(0.120±0.019),明显低于对照组的(0.298±0.031),差异有统计学意义(P<0.05);L-PDS+AG组OD值为(0.289±0.022),明显高于LPDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot和RT-PCR结果均表明,与对照组比较,L-PDS组细胞中VEGF蛋白和m RNA表达明显增加,与L-PDS组比较,PDS+AG组VEGF蛋白和m RNA的表达明显减低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AG可拮抗乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤并下调VEGF的表达。

腹膜透析液(乳酸盐)中葡萄糖和乳酸钠的含量测定方法改进

目的:建立HPLC法同时测定腹膜透析液(乳酸盐)中葡萄糖和乳酸钠的含量。方法:采用Carbomix H-NP 10:8%(7.8 mm×300 mm,10μm)色谱柱,流动相为水,流速0.5 m L·min-1,柱温55℃,示差折光检测器检测池温度为55℃。并将测得结果与国家标准中收载的碘量法(葡萄糖)与HPLC法(乳酸钠)进行比较。结果:葡萄糖和乳酸钠浓度分别在2.0918~7.3214 mg·m L^(-1)(r=0.9999)、0.7954~2.7825 mg·m L-1(r=0.9999)呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.0%(n=9)、98.6%(n=9)。本法测得结果与国家标准中的碘量法与HPLC法的结果基本一致。结论:本方法简便、快速、准确,可用于腹膜透析液(乳酸盐)的质量控制。

Pyruvate-based peritoneal dialysate preserves neutrophilic oxygen consumption

目的：观察丙酮酸盐和乳酸盐腹膜透析液（ＰＰＤＳ，ＬＰＤＳ）在不同ｐＨ条件下对中性白细胞氧耗量的影响．方法：中性白细胞分别与ＰＰＤＳ及ＬＰＤＳ在细胞外液ｐＨ５２和７４及ＰＤＳ原始ｐＨ５２的条件下温育，观察经调理的酵母聚糖为刺激剂的细胞氧耗量．结果：与ＬＰＤＳ相比较，酸性的ＰＰＤＳ仍能显著保持细胞的耗氧功能，但在相同的细胞外液ｐＨ条件下，两者的耗氧能力无差别．结论：ＰＤＳ的ｐＨ值对中性白细胞氧化代谢有重要影响。